本文關(guān)鍵詞：復(fù)合脂肪干細胞的微米紗補片的實驗研究

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【摘要】：研究目的:比較靜電動態(tài)液體紡紗法制備的大孔徑、高孔隙率的TPU/P(LLA-CL)微米紗支架和傳統(tǒng)靜電紡絲制備的TPU/P(LLA-CL)納米纖維支架的表征,包括兩種支架的表面形貌、力學(xué)性能等;研究兩種支架材料與兔脂肪干細胞構(gòu)建女性盆底組織工程網(wǎng)片的生物相容性。研究方法:1、TPU/P(LLA-CL)微米紗和納米纖維支架的制備和表征測試:將TPU/P(LLA-CL)按照質(zhì)量比例為100/0,75/25,50/50,25/75,0/100溶解于六氟異丙醇,分別采用靜電動態(tài)液體紡紗技術(shù)制備復(fù)合微米紗支架、傳統(tǒng)靜電紡絲技術(shù)制備復(fù)合納米纖維支架;應(yīng)用掃描電子顯微鏡觀察兩種支架的形貌,計算兩種支架材料的纖維直徑、孔隙率和孔徑的大小;應(yīng)用萬能材料測試機檢測兩種支架的力學(xué)性能;應(yīng)用傅里葉紅外光譜分析不同比例的支架材料的表面化學(xué)性能。2、TPU/P(LLA-CL)微米紗和納米纖維支架復(fù)合兔脂肪干細胞構(gòu)建盆底組織工程補片:分離兔脂肪干細胞,慢病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染EGFP對細胞進行標(biāo)記;將每種支架制備成0.5cm×0.5cm大小的樣本,共分為微米紗、納米纖維和對照組三組(n=3);將兔脂肪干細胞接種在三組的樣本上,通過掃描電子顯微鏡、倒置熒光顯微鏡、CCK-8實驗法等方法檢測兔脂肪干細胞在兩種支架表面的黏附、生長和增殖情況;組織學(xué)切片HE染色分析細胞長入支架的情況。研究結(jié)果:1、微米紗粗細不均,表面粗糙,納米纖維支架的纖維粗細均勻,表面光滑;微米紗的平均直徑約為14.05±2.21μm,納米纖維的平均直徑約為1.132±0.18μm,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P(27)0.05);微米紗支架的平均孔徑(550.78±142.60μm2)明顯大于納米纖維支架(69.05±19.18μm2),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P(27)0.05);微米紗支架孔隙率(79.09±3.22%)明顯高于納米纖維支架(61.8±1.64%),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P(27)0.05)。同一種質(zhì)量比例的TPU/P(LLA-CL)微米紗和納米纖維支架力學(xué)性能差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P(29)0.05)。微米紗支架,TPU/P(LLA-CL)為50/50時斷裂應(yīng)力最大(11.5±3.43Mpa),與天然陰道壁組織力學(xué)性能最接近。五種不同比例的納米纖維支架,隨著TPU比例的增加,斷裂應(yīng)力隨之增大。微米紗支架和納米纖維支架表面TPU和P(LLA-CL)沒有發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。2、CCK-8試驗顯示接種細胞1d后,三組之間吸光度值無明顯差異,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.806);接種細胞后4d,微米紗支架上的吸光度值大于納米纖維支架和空白板的吸光度值,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.083),隨著培養(yǎng)細胞時間的延長,三組在接種細胞7d后的吸光度值均高于其1d和4d的吸光度值;在接種細胞7d時,納米纖維支架組與對照組之間吸光度值差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),微米紗支架與納米纖維支架之間,微米紗支架與對照組之間的差異性均具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。根據(jù)HE染色結(jié)果分析得到細胞接種1d、4d和7d后,ADSCs長入納米纖維支架的平均深度分別為(36.50±3.08μm、37.06±2.23μm和40.17±4.96μm),第1d和4d(P=0.06)、4d和7d(P=0.06)、1d和7d(P=0.22)之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。ADSCs長入微米紗支架的平均深度分別為250.00±33.62μm,350.90±38.92μm和449.01±51.73μm,第1d和4d(P(27)0.05)、4d和7d(P(27)0.05)、1d和7d(P(27)0.05)之間差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:TPU/P(LLA-CL)微米紗是一種大孔徑、高孔隙率的三維支架結(jié)構(gòu);與TPU/P(LLA-CL)納米纖維支架相比,更能促進細胞粘附和增殖,其力學(xué)性能與天然陰道壁組織接近,并能有效改善細胞難以長入的情況,能更好的模擬天然細胞外基質(zhì),是一種極具潛力的盆底組織工程支架。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R318.08;R713

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