本文關(guān)鍵詞：基于GC-MS技術(shù)探討膿毒癥新生兒血清標(biāo)志物

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【摘要】：目的新生兒膿毒癥（Neotala Sepsis）是一種致死率及致殘率均較高的嚴(yán)重疾病，早期診斷、早期治療可以阻斷病程的進(jìn)展，改善預(yù)后，但當(dāng)前新生兒膿毒癥診斷共識(shí)中的相關(guān)臨床體征及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)存在一定的滯后性及非特異性，因此臨床上尚缺乏早期預(yù)警本病的有效指標(biāo)。本研究擬采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GasChromatography-Mass Spectrometry，GC-MS）為基礎(chǔ)的代謝組學(xué)研究平臺(tái)，建立新生兒血清樣本代謝組學(xué)的檢測(cè)方法，探究膿毒癥組新生兒和非膿毒癥組新生兒血清代謝產(chǎn)物差異，發(fā)現(xiàn)潛在的生物標(biāo)志物群，以期為早期診斷新生兒膿毒癥提供新的指標(biāo)，為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。 方法實(shí)驗(yàn)一通過考察不同萃取劑、萃取劑不同取樣體積比、不同內(nèi)標(biāo)液濃度、不同衍生化條件及進(jìn)樣方式和升溫程序?qū)Υx物圖譜的影響，建立基于GC-MS技術(shù)的標(biāo)本預(yù)處理及數(shù)據(jù)采集方法，并考察所建立方法的重復(fù)性和儀器的精密度。 實(shí)驗(yàn)二方法選擇30例2012年01月—2013年02月在我足月NICU住院并且符合2005年國(guó)際兒科膿毒癥會(huì)議新生兒膿毒癥診斷共識(shí)的新生兒作為病例組，選擇同期住院在性別、出生胎齡、日齡、體重與病例組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義并且除外感染的30例新生兒作為對(duì)照組。采用GC-MS技術(shù)獲得兩組代謝物總離子流圖，利用儀器自帶譜庫(kù)NIST2008(National Institute of Standards and TechnologyDatabases，USA）進(jìn)行代謝產(chǎn)物的鑒定，經(jīng)去噪、峰檢測(cè)、數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化處理后，借助模式識(shí)別軟件，綜合主要成分分析（Principal ComponentsAnalysis，PCA）和偏最小二乘法-判別分析（Partial Least Squares-DiscriminantAnalysis，PLS-DA）分析方法及t檢驗(yàn)對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 結(jié)果實(shí)驗(yàn)一1.以400μl丙酮混合100μl氯仿作為萃取劑，0.25mg/ml作為內(nèi)標(biāo)液濃度，以90℃(45min）作為衍生化條件對(duì)標(biāo)本進(jìn)行前處理。 2.通過考察不同進(jìn)樣方式和不同升溫程序?qū)Υx物譜的影響確立了GC-MS的分析參數(shù)設(shè)置，即選用1μl（10:1）分流進(jìn)樣方式，柱箱起始溫度為60℃（1min），以10℃/min上升至200℃(3min)，再以10℃/min上升至300℃(5min)的升溫程序。 3.一份樣品平行制備6份供試品和一份供試品連續(xù)6次進(jìn)樣的總離子流圖（Total Ion Chromatogram，TIC）色譜峰個(gè)數(shù)基本相同且10個(gè)主要共有色譜峰峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（Relative Standard Deviation，RSD)均在10%以內(nèi)，顯示方法學(xué)重復(fù)性和儀器精密度考察滿意。 實(shí)驗(yàn)二膿毒癥新生兒和非膿毒癥新生兒的血清代謝產(chǎn)物在PCA和PLS-DA模型中的分布差異直觀可見，結(jié)合t檢驗(yàn)，與非膿毒癥新生兒組相比，膿毒癥新生兒組血清葡萄糖、乳酸、尿素、丙酮酸、苯丙氨酸、丙氨酸含量升高，亮氨酸、異亮氨酸、谷氨酰胺、棕櫚酸、棕櫚油酸、亞油酸、硬脂酸含量降低，上述物質(zhì)組成的判別式靈敏度為93.33%，特異度為100%，，約登指數(shù)為0.9333，符合率為96.66%。 結(jié)論1.本實(shí)驗(yàn)建立的基于GC-MS技術(shù)的新生兒血清代謝組學(xué)測(cè)試分析方法，前處理方法簡(jiǎn)單，重復(fù)性和儀器精密度良好，可用于新生兒血清代謝組學(xué)測(cè)試分析； 2.應(yīng)用GC-MS技術(shù)可以反映新生兒膿毒癥的存在； 3.本實(shí)驗(yàn)篩選的代謝產(chǎn)物群組成的判別式可用于新生兒膿毒癥的診斷。
【關(guān)鍵詞】：新生兒膿毒癥 GC-MS技術(shù) 生物標(biāo)志物
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R720.597
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 引言11-16
• 實(shí)驗(yàn)一 基于 GC-MS 技術(shù)的新生兒血清代謝組學(xué)分析方法的建立16-31
• 1. 材料與試劑16-17
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法17-18
• 3. 結(jié)果與討論18-25
• 4. GC-MS 分析方法學(xué)考察25-28
• 5. 內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的鑒定28-30
• 6. 結(jié)論30-31
• 實(shí)驗(yàn)二 膿毒癥新生兒和非膿毒癥新生兒血清代謝組學(xué)研究31-45
• 1. 對(duì)象和材料、方法31-33
• 2. 結(jié)果33-41
• 3. 討論41-45
• 4. 結(jié)論45
• 參考文獻(xiàn)45-52
• 附錄一：個(gè)人簡(jiǎn)歷52-53
• 附錄二：在學(xué)期間的研究成果目錄53-54
• 致謝54-56
• 綜述56-64
• 參考文獻(xiàn)61-64

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：975384