本文關(guān)鍵詞：EPO促進胚胎期氟他胺誘導(dǎo)的隱睪生殖發(fā)育及Leydig細胞增殖分化的實驗研究

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【摘要】：目的探討促紅細胞生成素(EPO)對胚胎期氟他胺(Flu)誘導(dǎo)隱睪生殖細胞發(fā)育的生物效應(yīng)及其作用機制;探討外源性EPO對睪丸原代Leydig細胞增殖分化及內(nèi)分泌功能的影響。方法1氟他胺誘導(dǎo)后的SD仔鼠出生后隨機分為三組:Flu組(n=36)、Flu+EPO組(n=42)和Flu+PBS組(n=32),正常飼養(yǎng)的SD仔鼠分為正常對照組(n=40)及EPO組(n=16);Flu組和正常對照組常規(guī)飼養(yǎng),Flu+EPO組、EPO組及Flu+PBS組于PD1~7 d隔天腹腔注射1000 U/kg外源性EPO或同等體積的PBS。PD25時統(tǒng)計隱睪發(fā)生率及睪丸臟器系數(shù),觀察睪丸組織學(xué)變化,統(tǒng)計生殖指數(shù),測量曲細精管橫截面積和直徑,免疫組織化學(xué)法及Western blot檢測睪丸間隙連接蛋白Connexin43在睪丸組織中的表達。Western blot及免疫組化檢測睪丸組織piwil2、piwil4蛋白質(zhì)表達,Western blot檢測睪丸組織內(nèi)EPO、EPOR表達水平,ELISA檢測睪丸組織內(nèi)睪酮的含量。2差速貼壁法分離1W齡、3W齡及7W齡雄性SD大鼠睪丸leydig細胞進行原代培養(yǎng),在培養(yǎng)基中加入2U/ml外源性EPO進行干預(yù),MTT檢測各組細胞增殖指數(shù),3β-HSD染色檢測leydig細胞分化能力,HPLC檢測細胞培養(yǎng)液中睪酮含量。結(jié)果1Flu+EPO組隱睪發(fā)生率為38.1%(16/42),較Flu組55.6%(20/36)及Flu+PBS組53.1%(17/32)降低;Flu隱睪組睪酮含量明顯低于正常對照組(P0.05),而Flu+EPO隱睪組的睪酮含量與正常對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);EPO組、Flu非隱睪組、Flu隱睪組、Flu+EPO非隱睪組及Flu+EPO隱睪組的睪丸組織EPO/EPOR比值均明顯高于正常對照組(P0.05)。Flu+EPO隱睪組生精上皮細胞數(shù)量、睪丸臟器系數(shù)、生殖指數(shù)、平均曲細精管面積及直徑均明顯大于Flu組(P0.01,P0.05,P0.01,P0.01)且與正常對照組無明顯差異。EPO能夠促進Connexin43蛋白在隱睪組織中的正常表達。Flu隱睪組睪丸組織piwil2、piwil4蛋白分布異常,Flu+EPO隱睪組睪丸組織piwil2、piwil4蛋白表達與正常對照組比較無明顯差異。2除了7W齡組培養(yǎng)72h時,其他所有觀察點的EPO組原代培養(yǎng)睪丸leydig細胞的數(shù)量均要多于無EPO組(P0.05)。三個年齡組中,同一時間點無EPO組與EPO組間比較,3β-HSD染色細胞陽性率均無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。3W齡組及7W齡組,24h、48h、72h時EPO組培養(yǎng)液睪酮含量均明顯高于無EPO組(P0.001)。結(jié)論1外源性EPO可以降低胚胎期Flu暴露后隱睪發(fā)生率,促進隱睪生殖細胞發(fā)育,維持隱睪睪丸組織Connexin43正常表達;EPO可通過改善隱睪睪丸內(nèi)睪酮水平,促進血睪屏障正常形成,使piwil2、piwil4蛋白正常表達并提高隱睪模型的生殖潛能。2EPO可促進具有增殖潛能的leydig細胞增殖分裂,并促進ALCs分泌睪酮,但對Leydig細胞的分化作用并不顯著。
【關(guān)鍵詞】：氟他胺 隱睪 促紅細胞生成素 leydig細胞 生殖細胞發(fā)育
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R726.9
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-16
• 參考文獻15-16
• 第一部分 EPO促進胚胎期氟他胺誘導(dǎo)隱睪生殖發(fā)育的實驗研究16-35
• 1 材料和方法16-21
• 2 結(jié)果21-29
• 3 討論29-32
• 參考文獻32-35
• 第二部分 外源性EPO對睪丸原代Leydig細胞增殖分化及內(nèi)分泌功能的影響35-46
• 1 材料與方法35-39
• 2 結(jié)果39-42
• 3 討論42-44
• 參考文獻44-46
• 全文總結(jié)46-47
• 文獻綜述47-56
• 參考文獻51-56
• 致謝56-57
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文57

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 ;Erythropoietin gene transfer into rat testes by in vivo electropo-ration may reduce the risk of germ cell loss caused by cryptorchidism[J];Asian Journal of Andrology;2005年04期

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本文編號：971105