發(fā)布時(shí)間：2017-10-02 11:08

  本文關(guān)鍵詞：新生兒持續(xù)肺動(dòng)脈高壓遺傳病因及血清標(biāo)志物初步研究

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【摘要】：新生兒持續(xù)肺動(dòng)脈高壓(PPHN)是指出生后胎兒型循環(huán)向成人型循環(huán)過(guò)渡時(shí)發(fā)生障礙,肺血管壓力持續(xù)增高并超過(guò)體循環(huán)動(dòng)脈壓,引起心房和(或)動(dòng)脈導(dǎo)管水平血液右向左分流,臨床出現(xiàn)嚴(yán)重低氧血癥甚至死亡的一種疾病。國(guó)內(nèi)外成人及兒童研究顯示：家族性、特發(fā)性和先天性心臟病相關(guān)性肺動(dòng)脈高壓(PAH)與BMPR2、ALK1等基因突變有關(guān)。另有報(bào)道指出CPS1、ABCA3、CRHR1基因變異以及表觀遺傳可能參與PPHN的發(fā)生。PAH的臨床研究認(rèn)為,肺血管的收縮和舒張受血管活性因子調(diào)節(jié),其中比較重要的有一氧化氮(NO)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、血管緊張素II(AngⅡ)、內(nèi)皮素(ET-1)。有研究提示,上述因子合成相關(guān)基因NOS3、VEGFA、ACE、EDN1、突變或多態(tài)性和相應(yīng)血清因子濃度存在一定的關(guān)聯(lián)性。既往認(rèn)為PPHN病因主要包括：宮內(nèi)慢性缺氧或圍生期窒息,宮內(nèi)或生后感染,呼吸窘迫綜合征和胎糞吸入綜合征等肺實(shí)質(zhì)性疾病,肺發(fā)育不良和先天性膈疝等。近年來(lái)遺傳因素在PPHN中所起的作用日益受到關(guān)注,N0S3、EDN1、ACE、 VEGFA基因突變或多態(tài)性是否與PPHN易感性有關(guān)?而上述基因變異是否導(dǎo)致了血管活性因子濃度的改變?本研究旨在探索NOS3、EDN1、ACE、VEGFA基因變異和PPHN易感性的關(guān)系并試圖尋找基因變異對(duì)相應(yīng)血清因子濃度的影響。第一部分ACE、EDN1、VEGFA、NOS3基因多態(tài)性和新生兒持續(xù)肺動(dòng)脈高壓易感性研究目的：探索PPHN患兒是否存在ACE、EDN1、VEGFA、NOS3基因突變,或者是否存在相關(guān)SNP和PPHN易感性有關(guān)。方法：在2013年1月至2014年1月期間,收集復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院NICU中因?yàn)楹粑狡刃栎o助通氣患兒血標(biāo)本,納入對(duì)象符合PPHN診斷條件為PPHN組,余為非PPHN組,提取DNA,預(yù)實(shí)驗(yàn)利用Ion Torrent Ampliseq panel技術(shù)檢測(cè)兩組新生兒ACE、EDN1、VEGFA、NOS3基因編碼區(qū)有無(wú)突變,比較PPHN組和非PPHN組相關(guān)基因多態(tài)性位點(diǎn)基因型和等位基因頻率有無(wú)差異。發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性位點(diǎn)后進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量Sanger測(cè)序法驗(yàn)證。結(jié)果：共收集PPHN組’55例,非PPHN組27例,兩組患兒在性別構(gòu)成、出生體重、納入時(shí)間上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而在胎齡上,非PPHN組略小。預(yù)實(shí)驗(yàn)完成Ion Torrent測(cè)序30例,包括PPHN組20例,非PPHN組10例。Ion Torrent檢測(cè)未發(fā)現(xiàn)上述基因突變,共發(fā)現(xiàn)SNP49個(gè)。其中EDN1基因多態(tài)性位點(diǎn)rs5370、rs2070699、rs1800543基因型及等位基因頻率在兩組中差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。就上述3個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量驗(yàn)證后發(fā)現(xiàn),EDN1 rs2070699基因型頻率和等位基因頻率在PPHN和非PPHN組間差異仍然有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,PPHN組TT基因型頻率(30.9%)顯著高于非PPHN組(11.1%),x 2=7.2,P=-0.003,OR值：3.58,95%CI：0.882-20.783。PPHN組T等位基因頻率(54.5%)顯著高于非PPHN組(31.5%), x2=7.75, P=0.005, OR值：7.00,95%CI：.820-29.493。結(jié)論：EDN1 rs2070699可能和PPHN易感性有關(guān),T等位基因在缺氧時(shí)能增加PPHN的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。第二部分新生兒持續(xù)肺動(dòng)脈高壓患兒血清ET-1、VEGF、NO和ACE濃度變化目的：探討PPHN血管活性因子濃度變化,并尋找ET-1濃度改變和EDN1基因變異之間可能的關(guān)聯(lián)。方法：在2013年7月至2014年1月期間,收集復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院NICU中因?yàn)楹粑狡刃栎o助通氣患兒血標(biāo)本,納入對(duì)象符合PPHN診斷條件為PPHN組,余為非PPHN組,選擇同時(shí)期入住普通新生兒病房的無(wú)心肺疾病的黃疸或咽下綜合征新生兒作為正常對(duì)照組。應(yīng)用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清ET-1、ACE、VEGF濃度,比色法間接測(cè)定NO濃度。結(jié)果：共檢測(cè)PPHN組25例,非PPHN組13例,正常對(duì)照組20例。三組胎齡、體重和日齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。VEGF[(472.3±360.9)、(783.1±312.9)、(826.2±528.3) pg/mL]和ET-1 [(2.8±2.5)、(1.9±1.3)、(0.7±0.9) pg/mL]在三組中的濃度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x 2=8.12,P=0.02；χ 2=21.72,P=0.00)ACE和NO在三組間的濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)章義(x 2=1.09,P=0.58：χ 2=3.82,P=0.15)。EDN1 rs2070699位點(diǎn)T等位基因可能為PPHN的危險(xiǎn)因素,故將GT型和TT型合并為一大類(lèi),與GG型患兒ET-1濃度作比較,共32例患兒同時(shí)完成EDN1和ET-1檢測(cè),其中基因型為GG型11例,ET-1濃度1.36±0.93 pg/mL, GT+TT型患兒21例,ET-1濃度3.12±2.64 pg/mL。T等位基因攜帶者血清ET-1濃度更高,Mann-Whitney檢驗(yàn),U=63.5,P=0.039。結(jié)論：PPHN時(shí)ET-1和VEGF濃度改變明顯。EDN1 rs2070699位點(diǎn)GT變異可能引起ET-1濃度升高,增加PPHN易感性。
【關(guān)鍵詞】：新生兒持續(xù)肺動(dòng)脈高壓 基因變異 遺傳易感性 血清標(biāo)志物
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R722.1
【目錄】：

• 英文縮寫(xiě)索引4-5
• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-13
• 第一部分 ACE、EDN1、VEGFA、NOS3基因多態(tài)性和新生兒持續(xù)肺動(dòng)脈高壓易感性研究13-34
• 1. 背景13-14
• 2. 材料和方法14-20
• 3. 結(jié)果20-26
• 4. 討論26-28
• 5. 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-34
• 第二部分 新生兒持續(xù)肺動(dòng)脈高壓患兒血清ET-1、VEGF、NO和ACE濃度變化34-47
• 1. 背景34-36
• 2. 材料和方法36-38
• 3. 結(jié)果38-41
• 4. 討論41-43
• 5. 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 全文總結(jié)47-48
• 綜述48-56
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 致謝56-57
• 碩士期間主要發(fā)表和待發(fā)表文章57-58
• 碩士期間參加主要學(xué)術(shù)活動(dòng)58-59

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 周瑜;內(nèi)皮素1基因多態(tài)性與兒童青少年骨肉瘤化療耐藥的相關(guān)性分析[D];中南大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：959249