本文關(guān)鍵詞：CXCL16基因沉默在減輕ox-LDL引起的足細(xì)胞損傷中的作用研究

  更多相關(guān)文章： 足細(xì)胞 CXC趨化因子配體16 氧化低密度脂蛋白 活性氧 β1整合素

【摘要】：研究背景與研究目的原發(fā)性腎病綜合征(Primary nephrotic syndrome, PNS)是兒童時(shí)期常見(jiàn)的腎小球疾病之一,約占小兒時(shí)期腎病綜合征(Nephrotic syndrome, NS)的90%。高脂血癥和高脂蛋白血癥是PNS重要的病理生理特征之一。研究表明,氧化應(yīng)激、炎癥應(yīng)激、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等是引起慢性腎臟疾病的可能機(jī)制。脂質(zhì)在腎臟的過(guò)多沉積將致使腎功能障礙,然而,脂質(zhì)引起腎臟損傷的具體機(jī)制尚未明確。近年來(lái)研究表明,氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, ox-LDL)對(duì)腎臟系膜細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞以及足細(xì)胞均可造成損傷。在許多腎小球疾病中,如糖尿病腎病(Diabetic nephropathy, DN)、微小病變腎病綜合征(Minimal change disease nephrotic syndrome, MCNS)、局灶性節(jié)段性腎小球硬化(Focal segmental glomerular sclerosis, FSGS)及膜性腎病(Membranous nephropathy, MN),足細(xì)胞是最主要的受損部位和早損指標(biāo)。足細(xì)胞是高度分化的腎臟固有細(xì)胞,其通過(guò)足突覆蓋于腎小球基底膜(glomerular basement membrane, GBM)表面,構(gòu)成腎小球?yàn)V過(guò)的最后屏障。當(dāng)足細(xì)胞受到損傷時(shí),將導(dǎo)致蛋白尿的產(chǎn)生。目前,ox-LDL引起足細(xì)胞損傷的機(jī)制尚不明確。CXC趨化因子配體16 (chemokine ligand 16, CXCL16)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種趨化因子,其集清道夫受體功能及炎性趨化因子功能于一身,是CXC趨化因子家族中獨(dú)特的一種,在免疫反應(yīng)及炎癥等多方面有重要作用。早期對(duì)于CXCL16的研究主要集中于動(dòng)脈粥樣硬化。近期研究發(fā)現(xiàn)CXCL16參與了多種腎臟疾病的疾病過(guò)程[4-5]。本課題前期研究顯示,CXCL16參與阿霉素腎病,其可能作為ox-LDL的清道夫受體,協(xié)助足細(xì)胞攝取ox-LDL[6]。然而,在原發(fā)性腎病綜合征中,CXCL16介導(dǎo)ox-LDL引起足細(xì)胞損傷的具體機(jī)制尚不明確。脫落和凋亡是目前已知的足細(xì)胞減少的主要原因。β1整合素是足細(xì)胞基底膜上重要的粘附分子,其與足細(xì)胞的粘附功能及脫落有重要聯(lián)系并且在細(xì)胞內(nèi)外信號(hào)傳導(dǎo)中發(fā)揮作用。β1整合素表達(dá)量的下降可導(dǎo)致足細(xì)胞黏附力降低引起足細(xì)胞脫落,足細(xì)胞脫落與腎小球硬化有重要聯(lián)系。Chen等報(bào)道β1整合素表達(dá)量的減少伴有足細(xì)胞數(shù)量的減少。關(guān)于足細(xì)胞凋亡,活性氧(reactive oxygen species, ROS)是近來(lái)的研究熱點(diǎn)之一。足細(xì)胞是終末分化細(xì)胞,其內(nèi)有大量的線粒體存在以維持其對(duì)能量的需求。當(dāng)線粒體受到損傷時(shí),必定引起足細(xì)胞的功能障礙。當(dāng)細(xì)胞受損時(shí),線粒體外膜通透性增加,可引起細(xì)胞凋亡,氧化呼吸鏈上電子丟失使部分氧形成ROS。線粒體的損傷及ROS的產(chǎn)生可進(jìn)一步導(dǎo)致足細(xì)胞的損傷及大量ROS的形成,導(dǎo)致惡性循環(huán)。目前,在PNS中,關(guān)于CXCL16是否通過(guò)介導(dǎo)ox-LDL進(jìn)入足細(xì)胞引起ROS以及β1整合素變化,國(guó)內(nèi)外尚未有所研究。為此,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染小鼠足細(xì)胞,建立小鼠足細(xì)胞CXCL16基因沉默模型,觀察ox-LDL作用下足細(xì)胞β1整合素及ROS的表達(dá)變化,探討CXCL16在ox-LDL引起足細(xì)胞損傷的機(jī)制。研究CXCL16基因沉默后,能否減少ox-LDL引起的細(xì)胞損傷而發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用。方法體外培養(yǎng)永生化小鼠足細(xì)胞,CXCL16-shRNA慢病毒及陰性對(duì)照慢病毒轉(zhuǎn)染足細(xì)胞建模,熒光倒置顯微鏡觀察慢病毒轉(zhuǎn)染效果,Western blotting及Real-time PCR檢測(cè)CXCL16沉默效率。CCK8法檢測(cè)陰性對(duì)照慢病毒轉(zhuǎn)染組(NC組)及CXCL16-shRNA慢病毒轉(zhuǎn)染組(CXCL16-shRNA組)足細(xì)胞活力差異。將NC組及CXCL16-shRNA組分別用ox-LDL處理,總膽固醇含量測(cè)定估計(jì)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積,Western blotting檢測(cè)CXCL16及β1整合素變化,ROS深紅色染料檢測(cè)ROS表達(dá)。結(jié)果1.慢病毒轉(zhuǎn)染效果 以MOI=50進(jìn)行轉(zhuǎn)染后可見(jiàn)明顯綠色熒光,且MOI=50時(shí)細(xì)胞狀態(tài)良好,確定足細(xì)胞的最優(yōu)MOI為50。為保持細(xì)胞在增值過(guò)程中轉(zhuǎn)染率,采用二鹽酸嘌呤霉素對(duì)其篩選,根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定嘌呤霉素1ug/mL對(duì)篩選轉(zhuǎn)染細(xì)胞,篩選后熒光觀察感染率90%。2.CXCL16-shRNA慢病毒感染效率慢病毒轉(zhuǎn)染及二鹽酸嘌呤霉素篩選后,CXCL16-shRNA組較NC組CXCL16蛋白表達(dá)水平顯著下降(Z=2.61,P0.05),蛋白表達(dá)水平下降約60%；CXCL16-shRNA組較NC組CXCL16 mRNA表達(dá)水平顯著下降(Z.-2.61,P0.05),mRNA表達(dá)水平下降約70%。3.足細(xì)胞活力測(cè)定 陰性對(duì)照轉(zhuǎn)染組及CXCL16-shRNA組足細(xì)胞活力無(wú)顯著差異(Z=0.369,P0.05)。4.細(xì)胞內(nèi)總膽固醇含量ox-LDL作用后,24h至72h細(xì)胞內(nèi)總膽固醇含量增加。作用72h,ox-LDL組總膽固醇含量明顯增加,ox-LDL組細(xì)胞內(nèi)總膽固醇含量高于NC組、CXCL16-shRNA組、ox-LDL+CXCL16-shRNA組(P0.05).5.ox-LDL處理后CXCL16及β1整合素表達(dá)量變化ox-LDL處理48h后,CXCL16表達(dá)量增加,隨時(shí)間延長(zhǎng)無(wú)顯著增加(F=19.24,P0.05)。β1整合素在處理48h后出現(xiàn)減少,隨時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)進(jìn)一步減少,72h有明顯減少(F=54.15,P0.001)。ox-LDL處理72h后,ox-LDL組及ox-LDL+CXCL16-shRNA組均有β1整合素表達(dá)量下降,且ox-LDL組低于NC、CXCL16-shRNA. ox-LDL+CXCL16-shRNA組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=51.12,P0.001)。6.細(xì)胞內(nèi)ROS測(cè)定通過(guò)熒光強(qiáng)度檢測(cè)ox-LDL作用下ROS的產(chǎn)生,陰性對(duì)照轉(zhuǎn)染組、CXCL16-shRNA組、ox-LDL+CXCL 16-shRNA轉(zhuǎn)染組ROS表達(dá)量均少于ox-LDL組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=307.57,P0.001)。結(jié)論1.MOI=50時(shí)可獲得滿意的病毒轉(zhuǎn)染效果,提示以MOI=50轉(zhuǎn)染40-48h進(jìn)行造模。2.與陰性對(duì)照相比,CXCL16-shRNA轉(zhuǎn)染組足細(xì)胞CXCL16蛋白表達(dá)明顯減少,提示建模成功。3.與陰性對(duì)照相比,CXCL16-shRNA轉(zhuǎn)染組足細(xì)胞活力無(wú)顯著性差異,提示兩組細(xì)胞活性無(wú)差異,可進(jìn)一步探討ox-LDL作用下的兩組細(xì)胞的損傷差異。4.在ox-LDL作用下,陰性對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積明顯高于CXCL16-shRNA轉(zhuǎn)染組足細(xì)胞,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,提示CXCL16基因沉默后,脂質(zhì)的攝取減少,CXCL16是ox-LDL的清道夫受體。5.在ox-LDL作用后,細(xì)胞內(nèi)ROS表達(dá)增加,p1整合素表達(dá)降低,提示ox-LDL可通過(guò)改變ROS及p1整合素的表達(dá)而損傷足細(xì)胞。6.CXCL16基因沉默后,ROS產(chǎn)生減少,β1整合素表達(dá)增加,提示CXCL16基因沉默能減輕ox-LDL對(duì)足細(xì)胞的損傷,起到細(xì)胞保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：足細(xì)胞 CXC趨化因子配體16 氧化低密度脂蛋白 活性氧 β1整合素
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R726.9
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-14
• 符號(hào)說(shuō)明14-15
• 前言15-17
• 材料與方法17-31
• 結(jié)果31-33
• 討論33-39
• 結(jié)論39-40
• 創(chuàng)新性與局限性40-41
• 附表41-42
• 附圖42-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 致謝49-50
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄50-51
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表51

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳洪宇;吳文斌;王永鈞;;腎臟病足細(xì)胞損傷及其防治研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2007年11期

2 王惠;何方方;張春;;足細(xì)胞損傷機(jī)制研究進(jìn)展[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2008年11期

3 洪亦眉;陳朝紅;;足細(xì)胞損傷的病因和發(fā)病機(jī)制[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2009年01期

4 暴小方;黃國(guó)東;;中醫(yī)藥對(duì)腎臟足細(xì)胞損傷干預(yù)作用的研究進(jìn)展[J];內(nèi)科;2013年03期

5 王慶苗;魏錦慧;;中藥防治足細(xì)胞損傷研究進(jìn)展[J];中醫(yī)研究;2014年05期

6 李芙蓉;鄭春霞;;可溶性尿激酶型纖溶酶原激活物受體與局灶節(jié)段性腎小球硬化[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2014年01期

7 李振勇;倪兆慧;;足細(xì)胞損傷的干預(yù)研究進(jìn)展[J];國(guó)際泌尿系統(tǒng)雜志;2006年04期

8 黃國(guó)東;許健;喬莉;;腎足細(xì)胞損傷中西醫(yī)治療的國(guó)內(nèi)研究進(jìn)展[J];時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥;2009年12期

9 鄔民香;羅群;;糖尿病腎病足細(xì)胞損傷機(jī)制研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué);2012年05期

10 肖厚勤,張建鄂,丁國(guó)華;足細(xì)胞損傷與腎小球硬化[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).泌尿系統(tǒng)分冊(cè);2004年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 黃國(guó)東;許健;;腎足細(xì)胞損傷治療的國(guó)內(nèi)研究進(jìn)展[A];第10屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

2 郭兆安;;中藥及其有效成分防治足細(xì)胞損傷研究進(jìn)展[A];第十一屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

3 劉志紅;;足細(xì)胞損傷的研究[A];2012年浙江省腎臟病學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2012年

4 馮泉城;苗靜;姜麗娜;李雪娟;張曉燕;丁潔;;補(bǔ)體C3在足細(xì)胞損傷中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十七次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2012年

5 劉雙信;史偉;梁馨苓;李珩;葉智明;王文健;何朝生;梁永正;駱寧;劉艷輝;胡湘明;章斌;彭炎強(qiáng);馬健超;;RANK可能是足細(xì)胞損傷標(biāo)志[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

6 范青鋒;張涵;劉淑芳;余自華;管娜;邢燕;丁潔;;突變podocin通過(guò)TRPC6介導(dǎo)的鈣離子內(nèi)流誘導(dǎo)足細(xì)胞損傷[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第五次全國(guó)兒科中青年學(xué)術(shù)交流大會(huì)論文匯編（上冊(cè)）[C];2008年

7 饒佳;徐虹;楊海春;郝偉明;;嘌呤霉素誘導(dǎo)足細(xì)胞損傷中ANGPTL3對(duì)硫酸肝素蛋白多糖表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十四次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

8 王文琰;張愛(ài)華;袁楊剛;朱春華;黃松明;;自噬早期激活可抑制醛固酮誘導(dǎo)的足細(xì)胞損傷[A];2012年江浙滬兒科學(xué)術(shù)年會(huì)暨浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)、兒內(nèi)科疾病診治新進(jìn)展國(guó)家級(jí)學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2012年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 徐維瑋;糖原合成酶激酶3β調(diào)節(jié)足細(xì)胞骨架在足細(xì)胞損傷機(jī)制及治療中的作用[D];南京大學(xué);2014年

2 湯曦;局灶節(jié)段性腎小球硬化足細(xì)胞損傷標(biāo)志物及凝血功能異常的研究[D];南京大學(xué);2011年

3 朱春華;線粒體功能障礙在足細(xì)胞損傷中的作用及干預(yù)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

4 黃軼嶸;腎臟缺血再灌注中足細(xì)胞損傷機(jī)制的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

5 陳珊;TRPC6介導(dǎo)的鈣離子內(nèi)流在白蛋白過(guò)負(fù)荷所致足細(xì)胞損傷中的作用[D];華中科技大學(xué);2011年

6 高丹;氯沙坦改善5/6腎切除大鼠生存率及修復(fù)足細(xì)胞損傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2012年

7 袁楊剛;線粒體功能障礙在腎小球足細(xì)胞早期損傷中作用的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

8 邢玲玲;P13K/Akt通路在糖尿病腎病足細(xì)胞損傷中的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊向貴;miR-135能促進(jìn)wnt信號(hào)通路介導(dǎo)的足細(xì)胞損傷[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

2 夏虹;Toll樣受體9（TLR9）在足細(xì)胞損傷中的作用[D];南京大學(xué);2014年

3 鮑文朵娜;Toll樣受體-9在足細(xì)胞損傷中的作用及其機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2016年

4 王雪;CXCL16基因沉默在減輕ox-LDL引起的足細(xì)胞損傷中的作用研究[D];山東大學(xué);2016年

5 胡夢(mèng)思;粘著斑激酶在氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的體外足細(xì)胞損傷中的作用研究[D];山東大學(xué);2013年

6 部璇;肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子保護(hù)足細(xì)胞損傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

7 柳林芬;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的足細(xì)胞損傷的影響及可能機(jī)制[D];福建醫(yī)科大學(xué);2014年

8 姚琴;TRPC6在足細(xì)胞的表達(dá)及其與足細(xì)胞損傷修復(fù)相關(guān)性研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

9 王惠;瞬時(shí)受體電位陽(yáng)離子通道蛋白6在高糖所致足細(xì)胞損傷中的作用及機(jī)制[D];華中科技大學(xué);2011年

10 胡鶴一;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)大鼠足細(xì)胞損傷的保護(hù)作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

，

本文編號(hào)：946889