本文關(guān)鍵詞：孟德爾遺傳易感分枝桿菌病篩查方法的建立與應(yīng)用

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【摘要】：第一部分孟德爾遺傳易感分枝桿菌病篩查方法的建立 目的： 1.建立Q-RT-PCR檢測IL-12/23-IFN-γ通路完整性的功能試驗。 2.建立流式細(xì)胞術(shù)檢測IL-12RB1和IFN-γR1蛋白表達(dá)的方法。 方法： 1.正常人全血用RPMI1640稀釋后，加不同濃度的BCG（空白，，2.5ug/ml,0.25ug/ml,0.0250ug/ml,0.0025ug/ml）刺激培養(yǎng)48h后，Q-RT-PCR檢測IFN-γ的mRNA水平，用不同全血標(biāo)本重復(fù)三次。 2.正常人全血用RPMI1640稀釋后，加BCG及不同濃度的IL-12P70（空白，40ng/ml，20ng/ml，10ng/ml，5ng/ml）刺激培養(yǎng)48h后，Q-RT-PCR檢測IFN-γ的mRNA水平，用不同的全血標(biāo)本重復(fù)三次。 3.正常人全血用RPMI1640稀釋后，加BCG及不同濃度的IFN-γ（空白，10000U/ml，5000U/ml，2500U/ml，1250U/ml）刺激培養(yǎng)48h后，Q-RT-PCR檢測IL-12B mRNA的水平，用不同的全血標(biāo)本重復(fù)三次。 4.提取正常人的PBMC，于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中用PHA(5ug/ml)分別刺激培養(yǎng)24，48h和88h，流式細(xì)胞術(shù)檢測IL-12RB1和IFN-γR1蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1.檢測IL-12/23-IFN-γ軸完整性的功能試驗的最佳刺激條件如下： 1)無刺激組；2)只加BCG（0.25ug/ml）組；3)BCG（0.25ug/ml）+IL-12P70（20ng/ml）；4) BCG（0.25ug/ml）+IFN-γ（2500U/ml）。 2. PHA（5ug/ml）刺激88h作為流式細(xì)胞術(shù)檢測IL-12RB1和IFN-γR1最佳刺激條件。 結(jié)論： 本研究初步建立了Q-RT-PCR檢測IL-12/23-IFN-γ軸完整性的功能試驗，同時建立了流式細(xì)胞術(shù)檢測IL-12RB1和IFN-γR1蛋白表達(dá)的方法，兩種方法結(jié)合可以快速的篩查MSMD的疑似患者。 第二部分卡介苗接種異常反應(yīng)患兒孟德爾遺傳易感分枝桿菌病的篩查 目的： 對卡介苗接種異常反應(yīng)的12例患兒進(jìn)行孟德爾遺傳易感分枝桿菌病的篩查。 方法： 1.收集整理12例卡介苗接種異常反應(yīng)患兒的臨床及實驗室檢查資料。 2. Q-RT-PCR檢測12例患兒IL-12/23-IFN-γ通路的完整性。 3.流式細(xì)胞術(shù)檢測9例患兒IL-12RB1和IFN-γR1蛋白的表達(dá)。 4. RT-PCR/PCR直接測序分析IL12RB1和IFNGR1基因。 結(jié)果： 1.臨床特征及實驗室檢查 本組12例患兒，7男5女，均以接種卡介苗后出現(xiàn)淋巴結(jié)炎為主要就診原因，9例患兒有其他病史，7例患兒有可疑家族史�；純浩骄鸩∧挲g為6.03m，平均篩查年齡19.77m。目前，2例死亡（例3和例9）。 10例患兒淋巴結(jié)活檢結(jié)果均顯示結(jié)核。5例患兒胸部CT存在異常。 2.12例均進(jìn)行了IL-12/23-IFN-γ通路完整性的檢測�；純�1，3，9和10存在異常。 3.例4和9細(xì)胞表面未檢測到IL-12RB1蛋白的表達(dá)。 4.例3存在IFNGR1基因突變，例10為STAT1基因突變。 結(jié)論： 接種卡介苗后出現(xiàn)局部淋巴結(jié)炎是本組患兒的主要臨床表現(xiàn)，最常見的部位是同側(cè)腋窩淋巴結(jié)。例3存在IFNGR1基因突變，確診為MSMD。例10存在AD STAT1增強性突變，診斷為CMC。 第三部分干擾素γ受體1缺陷的臨床特征及功能、基因分析 目的： 探討1例疑似孟德爾遺傳易感分枝桿菌�。∕SMD）患兒的臨床特征、檢測IL-12/23-IFN-γ通路的完整性，并進(jìn)行干擾素γ受體l(IFN-γR1)基因分析，提高兒科醫(yī)生對本病的認(rèn)識。 方法： 1.根據(jù)患兒的臨床表現(xiàn)及常規(guī)免疫學(xué)篩查試驗，排除常見原發(fā)性免疫缺陷病。 2. Q-RT-PCR在mRNA水平檢測患兒及健康對照IL-12/23-IFN-γ通路的完整性。 3.通過PCR及RT-PCR直接測序分別對患兒和其父母的IFNGR1基因進(jìn)行擴(kuò)增并測序。 結(jié)果： 1.臨床特征： 患兒，女，11月，因“面色蒼白、間斷咳嗽4月，進(jìn)行性加重2天”入住我院。以貧血為主要表現(xiàn)，無出血及溶血表現(xiàn)；無皮疹、骨及關(guān)節(jié)腫脹。有播散性卡介苗（BCG）病。四肢長骨X線及胸腹聯(lián)合CT見全身多發(fā)骨質(zhì)破壞。 2.患兒NBT，血清免疫球蛋白，淋巴細(xì)胞亞群，白細(xì)胞呼吸爆發(fā)試驗和CD18的檢測均正常。 3.患兒的全血用BCG和IFN-γ共同刺激48h后IL-12B的表達(dá)量與單獨BCG刺激后比較明顯降低，而健康對照者表達(dá)量增加。 4.基因測序發(fā)現(xiàn)患兒IFNGR1第6外顯子雜合缺失突變（c.818-821delTTAA，p.Asn274fsX276），父母此位點正常。 結(jié)論： Q-RT-PCR檢測IL-12/23-IFN-γ通路完整性是一種有效的篩查MSMD的手段；IFNGR1突變是引起本例患兒發(fā)生播散性BCG病及全身多系統(tǒng)病變的根本原因。
【關(guān)鍵詞】：孟德爾遺傳易感分枝桿菌病 IL-12/23-IFN-γ軸 熒光實時定量PCR 流式細(xì)胞術(shù) 孟德爾遺傳易感分枝桿菌病 卡介苗接種異常反應(yīng) 慢性黏膜皮膚念珠菌病 卡介苗 孟德爾遺傳易感分枝桿菌病 干擾素γ受體l缺陷
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R725.9
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 摘要7-12
• ABSTRACT12-18
• 第一部分 孟德爾遺傳易感分枝桿菌病篩查方法的建立18-33
• 前言18
• 1 材料與方法18-26
• 2 結(jié)果26-31
• 3 討論31-32
• 4 結(jié)論32-33
• 第二部分 卡介苗接種異常反應(yīng)患兒的孟德爾遺傳易感分枝桿菌病的篩查33-48
• 前言33
• 1 材料和方法33-38
• 2 結(jié)果38-45
• 3 討論45-47
• 4 結(jié)論47-48
• 第三部分 干擾素γ受體 1 缺陷的臨床特征及功能、基因分析48-55
• 前言48
• 1 資料與方法48
• 2 結(jié)果48-52
• 3 討論52-54
• 4 結(jié)論54-55
• 全文總結(jié)55-56
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 文獻(xiàn)綜述60-74
• 參考文獻(xiàn)70-74
• 致謝74-75
• 攻讀碩士學(xué)位期間研究成果及發(fā)表學(xué)術(shù)論文目錄75-76

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 鄧建平;董海燕;李群;趙秀芹;連璐璐;肖體權(quán);萬康林;;多位點PCR技術(shù)用于四川267株分枝桿菌臨床分離株的鑒定[J];疾病監(jiān)測;2012年04期

2 黨昶永;殷書平;樊保平;;卡介苗淋巴結(jié)炎的臨床表現(xiàn)、誘發(fā)因素及防治[J];藥物不良反應(yīng)雜志;2006年06期

本文編號：939990