本文關(guān)鍵詞：ABO血型基因分型方法的建立及其在新生兒溶血病早期診斷中的初步應(yīng)用

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【摘要】：ABO血型系統(tǒng)是人類歷史上發(fā)現(xiàn)的第一個血液遺傳標(biāo)記系統(tǒng)。早在20世紀(jì)90年代初,Yamamoto等人就報(bào)道了其編碼基因的完整序列,為ABO血型基因型分子水平檢測奠定了理論基礎(chǔ)。當(dāng)前臨床多使用血清學(xué)方法,根據(jù)紅細(xì)胞上對應(yīng)抗原有無鑒定ABO血型表型,但該方法無法判斷血型基因型。近年來,分子生物學(xué)及實(shí)驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域的研究突飛猛進(jìn),對ABO血型基因型的研究亦廣泛開展,為使ABO血型基因型更好的服務(wù)于臨床,本研究建立和優(yōu)化了兩種ABO血型基因分型方法,并嘗試應(yīng)用于新生兒溶血病的早期診斷。 建立了一套基于擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(ARMS-PCR)的ABO血型基因分型方法,該方法通過一步PCR反應(yīng)可鑒定7種常見ABO血型基因型亞型(A1、A1Ⅴ、 A2、B、O1、O1Ⅴ和O2)、28種基因型亞型組合,從基因組DNA提取到獲得基因檢測結(jié)果約需3-4小時(shí)。本研究還建立了一套基于環(huán)介等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)的ABO血型基因分型方法,通過一步恒溫反應(yīng)可鑒定6種常見ABO血型的基因型組合(AA、AO、BB、 BO、OO和AB),從基因組DNA提取到獲得基因分型結(jié)果約需1-2小時(shí)。同時(shí),根據(jù)ABO血型遺傳規(guī)律,將本研究建立的ABO血型基因分型方法應(yīng)用于新生兒溶血病早期診斷研究中,并通過DNA測序?qū)z測結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果100%吻合。 對比兩種方法,ARMS-PCR法操作簡便,成本低,對實(shí)驗(yàn)條件要求低,適于在普通分子實(shí)驗(yàn)室或醫(yī)院檢驗(yàn)使用；LAMP法操作簡便,快捷,但成本相對較高,適于大型實(shí)驗(yàn)室或有快速診斷要求的醫(yī)院使用。
【關(guān)鍵詞】：ABO血型 基因分型 ARMS-PCR LAMP 新生兒溶血病
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R722.18
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-6
• 目錄6-10
• 第一章 緒論10-18
• 1 ABO血型系統(tǒng)概述10-13
• 1.1 ABO血型研究起源及分布10-11
• 1.2 ABO血型基因簡介11-12
• 1.3 ABO血型基因多態(tài)性12
• 1.4 ABO血型鑒定方法12-13
• 1.4.1 血清學(xué)方法12-13
• 1.4.2 基于分子生物學(xué)的檢測方法13
• 1.4.3 其他ABO血型鑒定方法13
• 1.5 ABO血型基因型鑒定意義13
• 2 新生兒溶血病概述13-15
• 2.1 發(fā)病機(jī)制14
• 2.2 常見發(fā)病類型14
• 2.3 診斷方法14-15
• 2.5 早期診斷意義15
• 3 論文立題意義15-18
• 第二章 基于ARMS-PCR法檢測ABO血型18-40
• 1 ARMS-PCR法基本原理18-19
• 2 檢測位點(diǎn)選取19
• 3 實(shí)驗(yàn)樣本、試劑及儀器19-21
• 3.1 實(shí)驗(yàn)樣本19-20
• 3.2 主要試劑20
• 3.3 主要儀器20-21
• 4 實(shí)驗(yàn)方法21-26
• 4.1 基因組DNA提取21-22
• 4.2 引物設(shè)計(jì)22-23
• 4.3 反應(yīng)體系優(yōu)化及確定23-25
• 4.3.1 引物用量優(yōu)化23
• 4.3.2 模板用量優(yōu)化23-24
• 4.3.3 退火溫度選擇24
• 4.3.4 擴(kuò)增循環(huán)數(shù)選擇24
• 4.3.5 重復(fù)性驗(yàn)證24-25
• 4.4 優(yōu)化后實(shí)驗(yàn)過程25-26
• 4.4.1 準(zhǔn)備階段25
• 4.4.2 反應(yīng)體系配制25
• 4.4.3 PCR擴(kuò)增25
• 4.4.4 結(jié)果鑒定25-26
• 5 結(jié)果與分析26-34
• 5.1 可檢測的ABO基因型亞型26-27
• 5.2 引物用量確定及分析27-29
• 5.3 模板用量確定及分析29-30
• 5.4 退火溫度確定及分析30-31
• 5.5 循環(huán)數(shù)確定及分析31-33
• 5.6 重復(fù)性驗(yàn)證結(jié)果及分析33-34
• 6 新生兒溶血病早期診斷34-37
• 6.1 檢測方法34-35
• 6.2 臨床樣本篩選35
• 6.3 臨床樣本檢測35-36
• 6.4 結(jié)果與討論36-37
• 7 本章小結(jié)37-40
• 第三章 基于LAMP技術(shù)檢測ABO型40-58
• 1 LAMP技術(shù)基本原理40-43
• 1.1 LAMP法引物40-41
• 1.2 擴(kuò)增原理41-43
• 1.2.1 循環(huán)模板合成階段41
• 1.2.2 循環(huán)模板擴(kuò)增階段41-43
• 2 檢測位點(diǎn)選取43
• 3 實(shí)驗(yàn)樣本、試劑及儀器43-45
• 3.1 實(shí)驗(yàn)樣本43-44
• 3.2 主要試劑44
• 3.3 主要儀器44-45
• 4 實(shí)驗(yàn)方法45-50
• 4.1 基因組DNA的提取45-46
• 4.2 引物設(shè)計(jì)46-47
• 4.3 反應(yīng)體系優(yōu)化及確定47-49
• 4.3.1 反應(yīng)溫度優(yōu)化47
• 4.3.2 Mg~(2+)濃度優(yōu)化47-48
• 4.3.3 甜菜堿濃度優(yōu)化48
• 4.3.4 dNTPs濃度優(yōu)化48-49
• 4.3.5 實(shí)時(shí)或目視化檢測49
• 4.3.6 重復(fù)性驗(yàn)證49
• 4.4 優(yōu)化后實(shí)驗(yàn)過程49-50
• 4.4.1 準(zhǔn)備階段49
• 4.4.2 反應(yīng)體系配制49-50
• 4.4.3 恒溫?cái)U(kuò)增50
• 4.4.4 結(jié)果檢測50
• 5 結(jié)果與討論50-56
• 5.1 可檢測的ABO基因型50-51
• 5.2 反應(yīng)溫度確定及分析51-52
• 5.3 Mg~(2+)濃度確定及分析52
• 5.4 甜菜堿濃度確定及分析52-53
• 5.5 dNTPs濃度確定及分析53-54
• 5.6 實(shí)時(shí)或目視化檢測結(jié)果及分析54-55
• 5.7 重復(fù)性驗(yàn)證結(jié)果及分析55-56
• 6 本章小結(jié)56-58
• 全文總結(jié)58-60
• 參考文獻(xiàn)60-68
• 附錄68-70
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果70-72
• 致謝72

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：929800