發(fā)布時(shí)間：2017-09-26 13:36

  本文關(guān)鍵詞：二步化學(xué)衍生法在苯丙酮尿癥GC-MS應(yīng)用中的初步探討

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【摘要】：目的:1.通過二步化學(xué)衍生法結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(Gas Chromatography-mass Spectrometry,GC-MS)技術(shù)分析苯丙酮尿癥(Phenylketonuria,PKU)患兒及正常兒童尿液,探討二步化學(xué)衍生法在PKU尿液檢測中生物標(biāo)志物種類,并與文獻(xiàn)相比較。2.二步化學(xué)衍生法方法學(xué)考察。3.初步建立13種差異明顯生物標(biāo)志物的正常參考值范圍方法:1.采集60例正常兒童尿液(對(duì)照組)和20例苯丙酮尿癥患兒治療前的尿液(PKU組),經(jīng)二步化學(xué)衍生法處理后,進(jìn)行GC-MS差異分析,對(duì)濃度差異明顯物質(zhì)進(jìn)行定性分析,并與文獻(xiàn)相比較。2.以苯丙酮酸為例,采用肌酐為內(nèi)標(biāo),進(jìn)行精密度和準(zhǔn)確度的方法學(xué)驗(yàn)證。3.采集120例正常兒童尿液,對(duì)濃度差異明顯物質(zhì)進(jìn)行分析,得出生物標(biāo)志物的正常值參考范圍。結(jié)果:1.二步化學(xué)衍生法處理PKU組尿液后,經(jīng)GC-MS分析,可同步檢測到苯乙酰谷胺酰胺、苯乙酸、扁桃酸、苯丙氨酸、2-羥基苯乙酸、苯乳酸、4-羥基苯乙酸、苯丙酮酸、N-乙酰苯丙氨酸、香草扁桃酸、4-羥基苯乳酸、4-羥基苯丙酮酸、5-羥基吲哚-3-丙酸、5-羥基吲哚-3-乙酸14種生物標(biāo)志物,其保留時(shí)間(Retention Time,RT)相對(duì)恒定。2.兩組間苯乙酰谷胺酰胺、苯乙酸、扁桃酸、苯丙氨酸、2-羥基苯乙酸、苯乳酸、4-羥基苯乙酸、苯丙酮酸、N-乙酰苯丙氨酸、香草扁桃酸、4-羥基苯乳酸、4-羥基苯丙酮酸、5-羥基吲哚-3-丙酸、5-羥基吲哚-3-乙酸均有顯著性差異,可作為PKU的檢測指標(biāo),與文獻(xiàn)報(bào)道相一致;兩組間4-羥基苯乙酸無顯著性差異;3.苯丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)曲線為:y=0.1042x-0.0147,線性相關(guān)系數(shù)r2=0.996,線性關(guān)系良好;三種不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液測定的日內(nèi)及日間RSD均5%;苯丙酮酸回收率均85%,精密度及準(zhǔn)確度好;4.由120例正常兒童尿液可得出生物標(biāo)志物的參考值范圍(生物標(biāo)志物/肌酐):苯乙酰谷胺酰胺0、苯乙酸0、扁桃酸0~0.5387、2-羥基苯乙酸0~0.1740、苯乳酸0、苯丙酮酸0、N-乙酰苯丙氨酸0、香草扁桃酸0~1.1336、4-羥基苯乳酸0~0.8574、4-羥基苯丙酮酸0~0.0703、5-羥基吲哚-3-丙酸0、5-羥基吲哚-3-乙酸0~0.8415;結(jié)論:1.二步化學(xué)衍生法可檢測到PKU患兒尿液中14種代謝物質(zhì),除4-羥基苯乙酸外,其余13種代謝標(biāo)志物在PKU組和對(duì)照組中有顯著性差異,可作為臨床檢測PKU的生物標(biāo)志物指標(biāo),與文獻(xiàn)報(bào)道相一致;2.該方法對(duì)混合樣品分離好,保留時(shí)間穩(wěn)定,日間及日內(nèi)差異小,精密度及準(zhǔn)確度好,回收率高。符合生物樣本分析方法基本要求。該檢測無創(chuàng)性,標(biāo)本采集和保存簡便,適于PKU的篩查和后期監(jiān)測,可在臨床推廣;3.確定了二步化學(xué)衍生法聯(lián)合GC-MS檢測13種生物標(biāo)志物的正常值范圍;
【關(guān)鍵詞】：二步化學(xué)衍生法 苯丙酮尿癥 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 生物標(biāo)志物
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R725.8;O657.63
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 主要英文縮略詞索引11-12
• 第1章 緒論12-18
• 1.1 苯丙酮尿癥的概述12
• 1.2 苯丙酮尿癥的生化機(jī)制12-13
• 1.3 苯丙酮尿癥的生化診斷13-14
• 1.4 GCMS在苯丙酮尿癥中的應(yīng)用14-18
• 第2章 二步化學(xué)衍生法在苯丙酮尿癥中GC-MS的生物標(biāo)志物分析18-25
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑18-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法19-20
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-24
• 2.4 分析與討論24-25
• 第3章 二步化學(xué)衍生法方法學(xué)考察25-30
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑25-26
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法26-27
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-29
• 3.4 分析與討論29-30
• 第4章 建立尿液中13種生物標(biāo)志物正常值參考范圍30-34
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑30
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法30-32
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-33
• 4.4 分析與討論33-34
• 第5章 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-41
• 文獻(xiàn)綜述41-48
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 致謝48

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 鄢慧明;唐華;胡浩;謝瓊;王華;;2001～2011年湖南省新生兒苯丙酮尿癥(PKU)篩查結(jié)果分析及體會(huì)[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2013年04期

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本文編號(hào)：923828