本文關(guān)鍵詞：褪黑素預(yù)處理對(duì)新生期反復(fù)驚厥所致神經(jīng)行為損傷的干預(yù)及機(jī)制初探

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【摘要】：目的：探討褪黑素預(yù)處理對(duì)三氟乙醚所致新生期反復(fù)驚厥大鼠遠(yuǎn)期神經(jīng)行為、海馬苔蘚纖維再生性發(fā)芽及相關(guān)分子表達(dá)的影響。 方法：生后6d（用P6表示，下同）的健康Sprague-Dawley（SD）大鼠72只隨機(jī)分為四組(n=18只/組)：正常對(duì)照組（Contrast, CON表示）、褪黑素空白對(duì)照組（MEL表示）、驚厥組（Recurrent Seizures，RS表示）及褪黑素組（RS+MEL表示）。通過三氟乙醚反復(fù)吸入建立新生期大鼠反復(fù)驚厥動(dòng)物模型：RS組每日吸入三氟乙醚誘導(dǎo)驚厥發(fā)作5次，每次間隔30min，連續(xù)9d；CON組與RS組同樣操作但不吸入三氟乙醚；RS+MEL組于驚厥前1h腹腔注射55mg/kg褪黑素（Melatonin, MEL），同樣方法吸入三氟乙醚誘導(dǎo)驚厥發(fā)作，操作同RS組; MEL組，，與RS+MEL組同樣操作但不吸入三氟乙醚。末次驚厥后3h,每組各隨機(jī)取6只大鼠共24只，分別取大腦皮質(zhì)及海馬，用免疫印跡技術(shù)（Western blot）檢測(cè)Beclin-1、Bcl-2的表達(dá)。于生后P24，P31進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分（平面翻正實(shí)驗(yàn)、負(fù)向趨地反應(yīng)實(shí)驗(yàn)、懸崖回避實(shí)驗(yàn)、前肢懸吊實(shí)驗(yàn)）；于P28-P35天行Morris水迷宮試驗(yàn)，于P35天行曠場(chǎng)行為試驗(yàn)，測(cè)試大鼠學(xué)習(xí)記憶功能及認(rèn)知情感能力。于P35天行為學(xué)測(cè)試結(jié)束后分別取大腦皮層及海馬組織，用免疫印跡技術(shù)（Western blot）檢測(cè)鋅離子轉(zhuǎn)運(yùn)體3（ZnT3）、鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶II（CaMKII）、ACAT-1以及Cathepsin E的表達(dá)。于P35天采用Neo-Timm’s染色法觀測(cè)海馬苔蘚纖維發(fā)芽的程度及分布情況。 結(jié)果：1、免疫印跡法顯示：（1）RS組海馬和皮質(zhì)中急性期Beclin-1的表達(dá)明顯高于CON組（P＜0.05）；與RS相比，RS+MEL組Beclin-1在海馬和大腦皮層的表達(dá)均明顯降低（P＜0.05）。RS+MEL組與CON組相比無(wú)明顯差異（P＞0.05），CON組與MEL組相比無(wú)明顯差異（P＞0.05）。（2）RS組海馬和皮質(zhì)中急性期Bcl-2蛋白的表達(dá)明顯低于CON組（P＜0.05）；與RS相比，RS+MEL組Bcl-2在海馬和大腦皮層的表達(dá)均明顯升高（P＜0.05）。RS+MEL組與CON組相比無(wú)明顯差異（P＞0.05），CON組與MEL組相比無(wú)明顯差異（P＞0.05）。 2、行為學(xué)結(jié)果：（1）與CON組相比，RS組（P24、P31）負(fù)向趨地反應(yīng)時(shí)間和懸崖回避時(shí)間均明顯延長(zhǎng)（P＜0.05），平面翻正時(shí)間、前肢懸吊時(shí)間（P24、P31）明顯縮短（P＜0.05）；與RS組比較，RS+MEL組大鼠（P24、P31）負(fù)向趨地反應(yīng)時(shí)間和懸崖回避時(shí)間均明顯縮短（P＜0.05），平面翻正時(shí)間、前肢懸吊時(shí)間（P24、P31）明顯延長(zhǎng)（P＜0.05）。（2）曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)顯示：RS組延遲時(shí)間較CON組明顯延長(zhǎng)（P＜0.05）；RS組水平運(yùn)動(dòng)次數(shù)少于CON組（P＜0.05）,而RS+MEL組較RS組增多（P＜0.05)。（3）Morris水迷宮檢測(cè)：〈1〉四組逃避潛伏期于測(cè)試第1d至第5d有逐漸縮短趨勢(shì);測(cè)試第2,4,5天，RS組逃避潛伏期較CON組明顯延長(zhǎng)（P＜0.05）,RS+MEL組逃避潛伏期較RS組明顯縮短（P＜0.05）�！�2〉空間探索測(cè)試：RS組穿越平臺(tái)次數(shù)較CON組明顯減少（P＜0.05）。 3、Neo-Timm’s染色結(jié)果顯示：RS組海馬齒狀回及CA3區(qū)苔蘚纖維發(fā)芽程度顯著高于CON組（P＜0.01），RS+MEL組海馬齒狀回及CA3區(qū)苔蘚纖維發(fā)芽程度較RS組明顯減輕（P＜0.05）。CON組和RS+MEL組Timm’s顆粒分布無(wú)明顯差異（P＞0.05）。 4、免疫印跡法顯示：（1）RS組海馬和皮質(zhì)中ZnT3、ACAT-1、Cathepsin E的表達(dá)明顯高于CON組（P＜0.05）；與RS相比，RS+MEL組ZnT3、Cathepsin E在海馬和大腦皮層的表達(dá)均明顯降低（P＜0.05）。與RS相比，RS+MEL組ACAT-1在海馬中的表達(dá)明顯降低（P＜0.05）。RS+MEL組與CON組相比無(wú)明顯差異（P＞0.05），CON組與MEL組相比無(wú)明顯差異（P＞0.05）。（2）RS組海馬和皮質(zhì)中CaMKII蛋白的表達(dá)明顯低于CON組（P＜0.05）；與RS相比，RS+MEL組CaMKII在海馬和大腦皮層的表達(dá)均明顯升高（P＜0.05）。RS+MEL組與CON組相比無(wú)明顯差異（P＞0.05），CON組與MEL組相比無(wú)明顯差異（P＞0.05）。 結(jié)論：1、三氟乙醚誘導(dǎo)新生期反復(fù)長(zhǎng)程驚厥能夠?qū)е律窠?jīng)行為及學(xué)習(xí)能力損傷，同時(shí)造成海馬齒狀回及CA3區(qū)苔蘚纖維異常發(fā)芽增強(qiáng)，并使大腦皮質(zhì)及海馬急性期Beclin-1表達(dá)上調(diào)、Bcl-2表達(dá)下調(diào)，并使遠(yuǎn)期ZnT3、 ACAT-1、Cathepsin E表達(dá)升高，CaMKII蛋白表達(dá)下降。 2、驚厥發(fā)作前應(yīng)用MEL進(jìn)行干預(yù)，能顯著改善驚厥所致神經(jīng)行為及學(xué)習(xí)能力損傷。 3、驚厥發(fā)作前應(yīng)用MEL進(jìn)行干預(yù)，能明顯抑制反復(fù)驚厥所致海馬齒狀回及CA3區(qū)苔蘚纖維發(fā)芽程度，并可調(diào)節(jié)海馬及大腦皮層急性期自噬/凋亡標(biāo)記蛋白Beclin-1、Bcl-2和遠(yuǎn)期ZnT3、CaMKII、ACAT-1、Cathepsin E蛋白的表達(dá)。 4、本研究提示，急性期自噬/凋亡通路分子和遠(yuǎn)期ZnT3、CaMKII、ACAT-1、Cathepsin E表達(dá)參與MEL對(duì)新生期驚厥性腦損傷神經(jīng)保護(hù)作用的調(diào)節(jié)機(jī)制，上述分子的內(nèi)在聯(lián)系和相互作用有待進(jìn)一步探討。
【關(guān)鍵詞】：驚厥 新生期 褪黑素 苔蘚纖維發(fā)芽 Beclin-1 Bcl-2 ZnT3 CaMKII ACAT-1 Cathepsin E
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R720.597
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 引言12-14
• 實(shí)驗(yàn)流程圖14-15
• 第一部分 褪黑素預(yù)處理對(duì)新生期反復(fù)驚厥大鼠急性期 Beclin-1、Bcl-2 表達(dá)的干預(yù)15-25
• 材料與方法15-20
• 結(jié)果20-22
• 小結(jié)22
• 討論22-25
• 第二部分 褪黑素預(yù)處理對(duì)新生期反復(fù)驚厥大鼠遠(yuǎn)期神經(jīng)行為改變及基因表達(dá)的干預(yù)25-50
• 第一節(jié) 神經(jīng)行為學(xué)的觀察研究25-34
• 材料與方法25-28
• 結(jié)果28-34
• 小結(jié)34
• 第二節(jié) Neo-Timm’S 染色的觀察研究34-37
• 材料與方法34-36
• 結(jié)果36-37
• 小結(jié)37
• 第三節(jié) 遠(yuǎn)期 ZnT3、CaMKII、ACAT-1、CathepsinE 的表達(dá)研究37-44
• 材料與方法37-38
• 結(jié)果38-43
• 小結(jié)43-44
• 討論44-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 附圖57-62
• 綜述62-73
• 參考文獻(xiàn)69-73
• 本課題資助項(xiàng)目73-74
• 中英文對(duì)照縮略詞表74-75
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文75
• 會(huì)議發(fā)言75-76
• 致謝76-77

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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本文編號(hào)：921449