本文關(guān)鍵詞：氨溴索聯(lián)合萬(wàn)古霉素對(duì)表皮葡萄球菌生物膜的殺滅作用及調(diào)控系統(tǒng)影響

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【摘要】：第一部分氨溴索聯(lián)合萬(wàn)古霉素對(duì)表皮葡萄球菌生物被膜的殺菌作用 【目的】建立聚乙烯材料表面表皮葡萄球菌（Staphylococcusepidermidis）生物被膜（biofilm, BF）的體外模型，研究氨溴索聯(lián)合萬(wàn)古霉素對(duì)表皮葡萄球菌RP62A菌株生物被膜的殺菌作用。 【方法】在無(wú)菌聚乙烯片表面建立表皮葡萄球菌RP62A菌株的成熟BF模型，運(yùn)用快速銀染法觀察和鑒定成熟BF的結(jié)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)分為4個(gè)組，空白對(duì)照組，萬(wàn)古霉素（1MIC）組，氨溴索（1.875mg/l）組，萬(wàn)古霉素（1MIC）+氨溴索（1.875mg/l）組，空白對(duì)照組僅加TSB培養(yǎng)基，萬(wàn)古霉素，氨溴索作用24小時(shí)。分組干預(yù)后，利用二甲氧唑黃（XTT）比色法檢測(cè)生物被膜內(nèi)的活菌數(shù)量，結(jié)合多功能酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值，定量分析比較各個(gè)干預(yù)組中BF內(nèi)的細(xì)菌活力。 【結(jié)果】經(jīng)過(guò)24小時(shí)的連續(xù)培養(yǎng)后表皮葡萄球菌RP62A菌株形成成熟BF。經(jīng)銀染后，倒置顯微鏡下可見(jiàn)膜表面呈灰黑色著色，視野內(nèi)有大量成團(tuán)聚集的管狀、團(tuán)塊狀物質(zhì)，即認(rèn)為是被染色的BF。 XTT法測(cè)BF中細(xì)菌活力結(jié)果顯示空白對(duì)照組、萬(wàn)古霉素組、氨溴索組、氨溴索+萬(wàn)古霉素組OD450值分別為2.867±0.425，2.869±0.325，1.812±0.210,0.875±0.191；萬(wàn)古霉素組與空白組相比，P0.05；氨溴索組、氨溴索組+萬(wàn)古霉素與空白對(duì)照組相比, P㩳0.05；氨溴索組+萬(wàn)古霉素與氨溴索組相比，P㩳0.05。 【結(jié)論】單獨(dú)萬(wàn)古霉素對(duì)成熟的表皮葡萄球菌BF內(nèi)細(xì)菌無(wú)殺滅效果，1.875mg/l濃度的氨溴索對(duì)表皮葡萄球菌BF有一定的殺滅效果，當(dāng)萬(wàn)古霉素與氨溴索聯(lián)合使用時(shí)，能明顯殺滅表皮葡萄球菌BF內(nèi)的細(xì)菌，表明氨溴索與萬(wàn)古霉素有協(xié)同清除作用。 第二部分氨溴索聯(lián)合萬(wàn)古霉素對(duì)表皮葡萄球菌生物被膜結(jié)構(gòu)的影響 【目的】探討氨溴索聯(lián)合萬(wàn)古霉素干預(yù)表皮葡萄球菌BF結(jié)構(gòu)的影響，驗(yàn)證兩者聯(lián)合運(yùn)用可以起到協(xié)同清除作用。 【方法】在無(wú)菌聚乙烯片表面建立表皮葡萄球菌RP62A菌株的成熟BF模型，分為4個(gè)組，空白對(duì)照組，萬(wàn)古霉素（1MIC）組，氨溴索（1.875mg/l）組，萬(wàn)古霉素（1MIC）+氨溴索（1.875mg/l）組；用熒光染料SYTO9/PI對(duì)BF內(nèi)的細(xì)菌染色后，置于激光共聚焦顯微鏡(confocal laser scanning microscopy，CLSM)觀察，利用圖像結(jié)構(gòu)分析(image structure analyer，ISA)軟件對(duì)各不同干預(yù)組BF結(jié)構(gòu)進(jìn)行定量分析。 【結(jié)果】單用萬(wàn)古霉素時(shí)，CLSM圖片活菌(綠色熒光)占多數(shù)，死菌(紅色熒光)較少，結(jié)構(gòu)變化不大，與對(duì)照組無(wú)明顯差異；氨溴索組可見(jiàn)死菌（紅色信號(hào)）增多，結(jié)構(gòu)變稀疏。氨溴索聯(lián)合萬(wàn)古霉素作用，與單獨(dú)用藥組相比BF的厚度進(jìn)一步減小，活菌減少，死菌比例增加，僅剩小的細(xì)菌團(tuán)塊。ISA分析數(shù)據(jù)顯示，萬(wàn)古霉素組與空白對(duì)照組相比，區(qū)域孔率（Areal Porosity,AP）、平均擴(kuò)散距離（Average DiffusionDistance, ADD）、結(jié)構(gòu)熵（textual entropy，TE）無(wú)顯著差異，氨溴索組，萬(wàn)古霉素+氨溴索組與空白對(duì)照組相比BF厚度、ADD、TE、降低（P㩳0.05），AP增加（P㩳0.05）；且氨溴索組+萬(wàn)古霉素與氨溴索組相比作用效果更明顯。 【結(jié)論】單獨(dú)萬(wàn)古霉素?zé)o法破壞對(duì)成熟的表皮葡萄球菌BF結(jié)構(gòu)，氨溴索對(duì)表皮葡萄球菌BF結(jié)構(gòu)有一定的破壞，氨溴索與萬(wàn)古霉素存在協(xié)同作用，兩者聯(lián)用可使表皮葡萄球菌BF的結(jié)構(gòu)變得簡(jiǎn)單稀疏，對(duì)BF內(nèi)細(xì)菌有明顯的殺滅作用。 第三部分氨溴索聯(lián)合萬(wàn)古霉素對(duì)表皮葡萄球菌生物被膜調(diào)控系統(tǒng)相關(guān)基因的影響 【目的】探討氨溴索聯(lián)合萬(wàn)古霉素對(duì)表皮葡萄球菌BF調(diào)控系統(tǒng)中agr，icaR和icaA基因表達(dá)的影響。 【方法】建立表皮葡萄球菌RP62A菌株的成熟BF模型，分為4個(gè)組，空白對(duì)照組，萬(wàn)古霉素（1MIC）組，氨溴索（1.875mg/l）組，萬(wàn)古霉素（1MIC）+氨溴索（1.875mg/l）組；作用24小時(shí)后，應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)不同干預(yù)組的表皮葡萄球菌BF調(diào)控系統(tǒng)中agr，icaR和icaA基因表達(dá)量的變化。 【結(jié)果】通過(guò)RT-PCR檢測(cè)，萬(wàn)古霉素（1MIC）與空白對(duì)照組相比，agr，icaR、icaA基因表達(dá)均無(wú)明顯差異（P0.05）。萬(wàn)古霉素+氨溴索組agr、icaR基因相對(duì)于空白對(duì)照組表達(dá)量均有增加，agr由0.268±0.082變?yōu)?.507±0.131（p0.05），icaR由0.358±0.085變?yōu)?.892±0.146。單獨(dú)氨溴索組具有同樣趨勢(shì)，但效果不如萬(wàn)古霉素+氨溴索組明顯(P0.05)。萬(wàn)古霉素+氨溴索組與空白對(duì)照組相比icaA表達(dá)量降低，由0.702±0.098降為0.256±0.064（p0.05），單獨(dú)氨溴索組具有同樣趨勢(shì)，但效果不如萬(wàn)古霉素+氨溴索組明顯(P0.05)。 【結(jié)論】氨溴索可以對(duì)表皮葡萄球菌BF調(diào)控系統(tǒng)中agr，icaR和icaA基因表達(dá)產(chǎn)生影響，且氨溴索聯(lián)合萬(wàn)古霉素影響更明顯，，從而抑制表皮葡萄球菌BF。
【關(guān)鍵詞】：表皮葡萄球菌 生物被膜 氨溴索 萬(wàn)古霉素
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R722.1
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 第一部分 氨溴索聯(lián)合萬(wàn)古霉素對(duì)表皮葡萄球菌生物被膜的殺菌作用15-20
• 前言15
• 1 材料與方法15-17
• 2 結(jié)果17-18
• 3 討論18-20
• 第二部分 氨溴索聯(lián)合萬(wàn)古霉素對(duì)表皮葡萄球菌生物被膜結(jié)構(gòu)的影響20-25
• 前言20
• 1 材料與方法20-22
• 2 結(jié)果22
• 3 討論22-25
• 第三部分 氨溴索聯(lián)合萬(wàn)古霉素對(duì)表皮葡萄球菌生物被膜調(diào)控系統(tǒng)相關(guān)基因影響25-33
• 前言25
• 1 材料與方法25-29
• 2 結(jié)果29-31
• 3 討論31-33
• 全文總結(jié)33-35
• 參考文獻(xiàn)35-38
• 論文圖片38-41
• 文獻(xiàn)綜述41-48
• 參考文獻(xiàn)46-48
• 致謝48-49
• 攻讀碩士學(xué)位期間論文目錄49-50

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：910917