本文關(guān)鍵詞：部分細(xì)胞因子與重型地中海貧血移植后GVHD的關(guān)系研究

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【摘要】：研究背景重型β地中海貧血(β-thalassemia major)又稱(chēng)珠蛋白生成障礙性貧血,為進(jìn)行性溶血性貧血,以特殊地中海貧血面容、肝脾腫大及血紅蛋白F明顯升高為特征的一種血液系統(tǒng)疾病。重型β地中海貧血患者必需定期輸血及應(yīng)用去鐵藥物。異基因造血干細(xì)胞移植是目前根治地中海貧血的唯一方法。但是因?yàn)橹匦蚿地中海貧血患者因本身的骨髓富細(xì)胞特性及反復(fù)輸血的致敏效應(yīng),使得骨髓移植相對(duì)于其他疾病而言具有更大的難度,GVHD是目前造成移植失敗和移植相關(guān)死亡的重要因素。預(yù)處理、感染等引起胃腸道黏膜上皮細(xì)胞損傷,使細(xì)菌的降解產(chǎn)物如脂多糖進(jìn)入血液,引發(fā)“細(xì)胞因子風(fēng)暴”,是GVHD致靶器官各種病理?yè)p害的重要原因之一。相關(guān)研究顯示細(xì)胞因子在GVHD的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。IL-2和TNF-α是研究最多的細(xì)胞因子。Miyamoto等率先報(bào)道了移植后第3天sIL-2R水平可預(yù)測(cè)急性GVHD, Mathias等報(bào)道sIL-2R水平與急性GVHD的發(fā)病及嚴(yán)重程度有關(guān)。Choi等測(cè)量438名采用清髓預(yù)處理患者移植后第7天可溶性的TNFR1水平增加超過(guò)原來(lái)的2.5倍,與Ⅱ-Ⅵ度急性GVHD發(fā)生存在相關(guān)性,增加了移植相關(guān)死亡率。Berger等報(bào)道含有較高的TNF時(shí)則預(yù)示發(fā)生GVHD的風(fēng)險(xiǎn)率增高。眾多研究提示IL-10升高可能降低GVHD的發(fā)生。盡管相關(guān)研究表明細(xì)胞因子與GVHD關(guān)系密切,但還有很多細(xì)胞因子與GVHD的關(guān)系尚不清楚,同時(shí)地中海貧血為非腫瘤性疾病,重型p地中海貧血患者發(fā)生GVHD可能存在其特殊性。因此,了解重型β地中海貧血患者造血干細(xì)胞移植后發(fā)生GVHD時(shí)細(xì)胞因子的變化,為臨床防治重型β地中海貧血造血干細(xì)胞移植后GVHD,提高重型p地中海貧血患者的生存質(zhì)量,具有重要意義。本研究采用液相芯片技術(shù)檢測(cè)重型β地中海貧血患者造血干細(xì)胞移植后發(fā)生GVHD前后IL-6、IL-8、IL-12 TNF-α、MIF的變化,評(píng)估其是否可以作為GVHD發(fā)生及療效的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。研究對(duì)象與方法對(duì)象：選取南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院兒科病房2011年7月～2015年3月52例接受造血干細(xì)胞移植治療患兒,其中47例為重型地貧患兒,5例非地貧發(fā)生aGVHD為對(duì)照。重型地貧患兒均作了地貧基因檢查,基因型為β地貧基因純合子或雙重雜合子,其中男27例,女20例,中位年齡6.28歲(年齡范圍在2-14歲)。移植前47例重型β-地貧患兒都按國(guó)內(nèi)地貧臨床分度(根據(jù)年齡、肝大情況和鐵蛋白水平分為三度),類(lèi)似于Pesaro分度,其中4例為Ⅰ度,42例為Ⅱ度,1例為Ⅲ度。親緣干細(xì)胞移植24例,非親緣干細(xì)胞移植23例,骨髓干細(xì)胞移植2例,外周干細(xì)胞移植29例,臍血干細(xì)胞移植7例,骨髓+臍血干細(xì)胞移植4例,骨髓+外周干細(xì)胞移植1例,外周+臍血干細(xì)胞移植4例。41例為HLA配型全相合(6/6,8/8或10/10),3例患者符合HLA 8/10相合,1例患者符合HLA 7/8相合,2例半相合。16例地貧發(fā)生GVHD中,Ⅰ度2例,Ⅱ度4例,Ⅲ度8例,Ⅵ度2例。預(yù)處理方案：對(duì)大部分采用環(huán)磷酰胺/白消安為基礎(chǔ)的清髓性方案：環(huán)磷酰胺(50～60mg/kg/d,-10d～-9d);白消安(2.8～4.4mg/kg/d,-8d～-6d);氟達(dá)拉濱(40mg/m2/d,-6d--2d);噻替哌(10mg/kg/d,-5d);加或不加抗T-淋巴細(xì)胞兔免疫球蛋白(5～10mg/kg/d,-3d～-1d)或兔抗人胸腺細(xì)胞免疫球蛋白(2.5mg/kg/d,-3d～-1d)。預(yù)防治療GVHD:采用環(huán)孢霉素A、霉酚酸酯聯(lián)合甲氨蝶呤常規(guī)預(yù)防GVHD, GVHD診斷按照西雅圖診斷標(biāo)準(zhǔn)。GVHD的治療：僅有局部皮疹的aGVHD,可不治療或局部涂用可的松軟膏控制。但如果有如皮疹面積迅速擴(kuò)大,皮膚損害程度加重,出現(xiàn)發(fā)熱、流感樣癥狀,或懷疑有腸道或肝臟GVHD等情況時(shí)給予全身性治療。急性GVHD的一線(xiàn)治療：甲基潑尼松龍2mg/kg/d分次給予或地塞米松；二線(xiàn)治療：霉酚酸酯,普樂(lè)可復(fù),人T-淋巴細(xì)胞兔免疫球蛋白,CD25單抗,抗淋巴細(xì)胞球蛋白等。慢性GVHD一線(xiàn)治療：甲基強(qiáng)的松龍和環(huán)孢素交替使用；二線(xiàn)治療：硫唑嘌呤、普樂(lè)可復(fù)、霉酚酸酯、環(huán)磷酰胺、甲氨蝶呤治療等。造血干細(xì)胞的采集與輸注：在預(yù)處理完成后,次日行造血干細(xì)胞移植物輸注,骨髓干細(xì)胞+臍血干細(xì)胞移植則在移植當(dāng)天先將供者體內(nèi)采集的骨髓造血干細(xì)胞直接從中心靜脈盡快輸入,次日上午輸注臍血干細(xì)胞。輸注的CD34+干細(xì)胞數(shù)的均值為7×106/kg。并發(fā)癥的防治：(1) GVHD預(yù)防：環(huán)孢霉素A移植前-10天至-2天予1.5mg/kg/d靜脈滴注,移植前-1至移植后+25天劑量增至3mg/kg/d靜脈滴注,1月后靜脈滴注改為口服,根據(jù)濃度調(diào)整環(huán)孢素A口服量,維持血藥濃度200±50ng/ml,移植2月后開(kāi)始減量至停藥；霉酚酸酯移植后+1天予15mg/kg/d連續(xù)口服至30天停藥；甲氨蝶呤移植后+1、+3、+6天分別予10-15mg/m2靜脈滴注,一旦發(fā)生GVHD,根據(jù)GVHD程度加用激素或(和)免疫抑制劑。(2)肝靜脈閉塞癥預(yù)防：給予肝素和熊去氧膽酸預(yù)防VOD,肝素通常劑量為100-200u/kg/d持續(xù)靜注,在無(wú)出血傾向的情況下維持部分凝血活酶時(shí)間輕度大于正常,發(fā)肝靜脈閉塞癥時(shí),給予利尿劑等支持治療。(3)出血性膀胱炎預(yù)防：預(yù)處處理前6小時(shí)開(kāi)始水化,保證尿量大于60～100ml/m2,靜脈輸注環(huán)磷酰胺的同時(shí)運(yùn)用美司鈉解毒,必要時(shí)膀胱沖洗。(4)感染預(yù)防：移植前清除齲齒等感染灶,進(jìn)入層流病房前靜脈應(yīng)用更昔洛韋預(yù)防巨細(xì)胞病毒感染,及口服腸道除菌藥物等處理。預(yù)防真菌感染采用伊曲康唑從+5天開(kāi)始口服至粒細(xì)胞大于0.5×109/L后3天停藥。出現(xiàn)發(fā)熱等感染癥狀時(shí),根據(jù)經(jīng)驗(yàn)及早選擇有效足量的廣譜抗生素。觀察指標(biāo)和定義：(1)造血重建：中性粒細(xì)胞植入為連續(xù)三天中性粒細(xì)胞數(shù)0.5×109/L；血小板植入為在沒(méi)有輸注血小板情況下連續(xù)7天血小板20x109/L；(2)移植相關(guān)并發(fā)癥。GVHD診斷按照Glucksberg和Przepiorka的分級(jí)系統(tǒng)；VOD的診斷按照Baltimore診斷標(biāo)準(zhǔn)；植入證據(jù)用原位免疫熒光雜交法檢測(cè)性染色體的轉(zhuǎn)變(供受者性別相同)、短串重復(fù)序列聚合酶鏈反應(yīng)(供受者性別不同),并定期復(fù)查；原發(fā)性植入失敗定義為供者移植物輸注28天后無(wú)供者來(lái)源的造血重建；移植物排斥指移植后的重型地貧患者在任何時(shí)候恢復(fù)地貧狀態(tài)。細(xì)胞因子檢測(cè)：入組病例清晨空腹時(shí)抽取外周靜脈血3 mL(EDTA抗凝),室溫靜置1 h后,放入4℃冰箱1 h,普通離心機(jī)3000 r/min離心10 min,取離心后上清液0.5 mL凍存-80℃冰箱待測(cè)。液相芯片技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞因子：嚴(yán)格按照美國(guó)Bio.Pad公司的實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行操作,使用其公司購(gòu)買(mǎi)的檢測(cè)儀器及Bio. Plex human cytokinemulti-plex試劑盒、Bio-Plex cytokine reagent試劑盒,同時(shí)檢測(cè)200μL血清標(biāo)本中的IL-6、IL-8、IL-12、TNF-α、MIF水平,樣品數(shù)據(jù)分析應(yīng)用了Bio-Plex的管理軟件(version 4.0),可檢測(cè)的細(xì)胞因子水平范圍為1-32000 ng/L,敏感性10 ng/L。統(tǒng)計(jì)分析：采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,數(shù)據(jù)以x-±s表示,各組間比較采用Friedman M檢驗(yàn),兩指標(biāo)間比較采用Spearman相關(guān)分析。P0.05為顯著性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果納入52例接受造血干細(xì)胞移植患兒,47例為重型地中海貧血患兒,其中發(fā)生GVHD16例為地貧患兒,5例為非地貧患兒,5例為地貧患兒未發(fā)生GVHD,均留取GVHD出現(xiàn)前細(xì)胞因子水平基礎(chǔ)值(T0)、GVHD出現(xiàn)時(shí)(T1)、GVHD出現(xiàn)第4天(T2)、GVHD出現(xiàn)第7天(T3)、GVHD癥狀完全消失(T4)標(biāo)本,測(cè)不同時(shí)相IL-6、IL-8、IL-12、TNF-α、MIF水平變化。其余26例留取移植前細(xì)胞因子。1、地貧患兒GVHD出現(xiàn)前后各時(shí)相細(xì)胞因子變化水平：各時(shí)相IL-6水平相比較差異有顯著性意義(P=0.001),GVHD出現(xiàn)時(shí)最高。各時(shí)相IL-8水平相比有差異有顯著性意義(P=0.001),GVHD出現(xiàn)第4天最高。各時(shí)相IL-12水平相比較差異有顯著性意義(P=0.003),GVHD出現(xiàn)時(shí)最高,GVHD出現(xiàn)第7天次之。各時(shí)相TNFa相比差異有顯著性意義(P=0.005),GVHD出現(xiàn)時(shí)最高,GVHD出現(xiàn)時(shí)最高,GVHD出現(xiàn)第7天次之。各時(shí)相MIF水平相比差異有顯著性意義(P=0.006),GVHD出現(xiàn)時(shí)最高,GVHD出現(xiàn)時(shí)最高,GVHD出現(xiàn)第7天次之。2、地貧患兒未發(fā)生GVHD各時(shí)相細(xì)胞因子變化水平各時(shí)相IL-6、IL-8、IL-12、TNF-α、MIF水平相比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、非地貧患兒GVHD出現(xiàn)前后各時(shí)相細(xì)胞因子變化水平各時(shí)相IL-6水平相比較差異有顯著性意義(P=0.005),GVHD出現(xiàn)時(shí)最高。各時(shí)相IL-8水平相比差異有顯著性意義(P=0.017),GVHD出現(xiàn)第4天最高。各時(shí)相IL-12水平相比較差異有顯著性意義(P=0.05),GVHD出現(xiàn)時(shí)最高,GVHD出現(xiàn)第7天次之。各時(shí)相TNF-a相比差異有顯著性意義(P=0.01),GVHD出現(xiàn)時(shí)最高,GVHD出現(xiàn)第7天次之。各時(shí)相MIF水平相比差異有顯著性意義(P=0.01),GVHD出現(xiàn)時(shí)最高,GVHD出現(xiàn)時(shí)最高,GVHD出現(xiàn)第7天次之。4、相關(guān)性分析：4.1、T0時(shí)相：IL-6、IL-8、IL-12 TNF-α、MIF兩組間均無(wú)明顯相關(guān)性(P0.05),4.2、T1時(shí)相：IL-6 與IL-12有顯著正相關(guān)性(r=0.962,P=0.001),IL-12與TNF-a有顯著正相關(guān)性(r--0.73,P=0.01),IL-12與MIF有顯著正相關(guān)性(r=0.724,P=0.012),TNF-a與MIF有顯著正相關(guān)性(r=0.804,P=0.003)。4.3、 T2時(shí)相：IL-12與TNF-a有顯著正相關(guān)性(r=0.661,P=0.027)4.4、T3時(shí)相：IL-12與TNF-a有顯著正相關(guān)性(r=0.981,P=0.001),IL-12與MIF有顯著正相關(guān)性(r=0.835,P=0.001),TNF-a與MIF有顯著正相關(guān)性(r=0.782,P=0.004),4.5、T4時(shí)相：IL-6與IL-12有顯著正相關(guān)性(r=0.895,P=0.001),IL-12與TNF-a有顯著正相關(guān)性(r=0.816,P=0.002),IL-12與MIF有顯著正相關(guān)性(r=0.608,P=0.047),TNF-a與MIF有顯著正相關(guān)性(r=0.734,P=0.01)結(jié)論1.GVHD發(fā)生前后IL-6、IL-8、IL-12 TNF-α、MIF動(dòng)態(tài)水平變化在一定程度上反映移植后患者的免疫狀態(tài),可作為輔助診斷GVHD的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。2.曾發(fā)生嚴(yán)重aGVHD可能導(dǎo)致cGVHD更易發(fā)生,相關(guān)細(xì)胞因子峰值越高,下降越慢,提示GVHD,靶器官損傷越嚴(yán)重,預(yù)后差。3.細(xì)胞因子的產(chǎn)生和分泌具有相互調(diào)控的作用,IL-6、IL-8、IL-12 TNF-α、 MIF在GVHD的不同時(shí)間具有相關(guān)性。
【關(guān)鍵詞】：造血干細(xì)胞移植 重型β地中海貧血 移植物抗宿主疾病 細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R725.5
【目錄】：

• 摘要3-10
• ABSTRACT10-22
• 第一章 前言22-27
• 第二章 研究對(duì)象27-32
• 2.1 研究對(duì)象納入標(biāo)準(zhǔn)27
• 2.2 研究指標(biāo)27
• 2.3 基本情況27-30
• 2.4 移植前治療情況30-31
• 2.5 分度標(biāo)準(zhǔn)31-32
• 第三章 研究方法32-41
• 3.1 病人移植前準(zhǔn)備32
• 3.2 造血干細(xì)胞采集32-33
• 3.3 造血干細(xì)胞移植33-38
• 3.4 植活標(biāo)準(zhǔn)38
• 3.5 細(xì)胞因子檢測(cè)38-40
• 3.6 統(tǒng)計(jì)分析40-41
• 第四章 結(jié)果41-55
• 4.1 地貧患兒GVHD出現(xiàn)前后各時(shí)相細(xì)胞因子變化水平41-45
• 4.2 地貧患兒未發(fā)生GVHD各時(shí)相細(xì)胞因子變化水平45
• 4.3 非地貧患兒GVHD出現(xiàn)前后各時(shí)相細(xì)胞因子變化水平45-46
• 4.4 地貧患兒GVHD出現(xiàn)前后各時(shí)相細(xì)胞因子相關(guān)性分析46-53
• 4.5 地貧患兒總體生存結(jié)果53-55
• 第五章 結(jié)論55-56
• 第六章 討論56-63
• 6.1 GVHD發(fā)生的發(fā)病機(jī)制56-58
• 6.2 GVHD的影響因素58-59
• 6.3 cGVHD與aGVHD的區(qū)別59-60
• 6.4 液相芯片技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞因子的優(yōu)勢(shì)60
• 6.5 細(xì)胞因子與重型地中海貧血移植后GVHD的關(guān)系60-63
• 參考文獻(xiàn)63-68
• 中英文縮略詞表68-70
• 成果70-71
• 致謝71-73

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 華佳葉;周旭紅;龐纓;黃仁魏;;供受體血清白介素-2、腫瘤壞死因子-α水平與急性移植物抗宿主病的關(guān)系[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年04期

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本文編號(hào)：862852