本文關(guān)鍵詞：普萘洛爾治療嬰兒血管瘤分子機制的研究

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【摘要】：目的:血管瘤是嬰兒最常見的良性腫瘤。2008年發(fā)現(xiàn)普萘洛爾治療血管瘤以來,已成為血管瘤的一線治療藥物,但其作用的機制仍然不清楚。本課題主要通過研究普萘洛爾對體外培養(yǎng)的血管瘤內(nèi)皮細胞(Hem EC)增殖及凋亡的影響;同時采用人表達譜芯片研究普萘洛爾干預(yù)前后血管瘤內(nèi)皮細胞基因表達差異,尋找普萘洛爾的作用靶點,從而探討普萘洛爾治療血管瘤的分子機制。方法:1、普萘洛爾的藥物作用效果實驗:體外培養(yǎng)嬰幼兒的Hem EC,同時培養(yǎng)臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(HUVEC)作為對照,以不同濃度的普萘洛爾處理兩種細胞(0 umol/L、25 umol/L、50umol/L、75umol/L、100umol/L、125umol/L),24、48、72h后以MTT細胞增殖試劑盒檢查兩種細胞的存活率。同時以同樣方法處理Hem EC后采用Annexin V法用流式細胞儀檢測細胞的凋亡率;2、c DNA芯片實驗:提取普萘洛爾干預(yù)組及空白對照組Hem EC的總RNA,安捷倫c DNA微陣列掃描儀掃描芯片收集數(shù)據(jù),經(jīng)分析得出藥物作用后差異表達的基因。挑選部分差異顯著的基因,用Real-time PCR進行驗證。結(jié)果:1、普萘洛爾濃度為25umol/L,作用24h、48h,可引起Hem EC輕微增殖(p0.05);普萘洛爾濃度≥100umol/L,作用時間≥24h可引起Hem EC存活率下降,且在一定范圍內(nèi)藥效與藥物濃度、作用時間呈正相關(guān)(p0.05)。普萘洛爾濃度≥100umol/L,作用時間≥48h可引起HUVEC存活率下降,且在一定范圍內(nèi)藥效與藥物濃度、作用時間呈正相關(guān)(p0.05);普萘洛爾濃度≥100umol/L,Hem EC與HUVEC相比對藥物的抑制作用更加敏感,存活率更低(p0.05);2、普萘洛爾濃度≥100 umol/L,能引起Hem EC的凋亡,且隨著藥物濃度增高及干預(yù)時間延長,細胞凋亡率越高(p0.05);3、c DNA芯片篩選普萘洛爾干預(yù)Hem EC前后基因表達差異倍數(shù)≥1.5倍的共有186個,其中表達明顯上調(diào)的基因有128個,表達明顯下調(diào)的基因58個;其中PCSK9、FABP3基因表達顯著上調(diào),分別達到3.22倍與10.54倍;經(jīng)Real-time PCR驗證,普萘洛爾干預(yù)后,Hem EC的PCSK9、FABP3m RNA表達顯著提高,分別達到干預(yù)前的9.88土2.19倍,21.9土8.18倍;結(jié)論:1、低濃度普萘洛爾對Hem EC的增殖有促進作用;高濃度普萘洛對Hem EC及HUVEC的增殖有抑制作用,且呈一定的濃度與時間依賴性;Hem EC與HUVEC相比對普萘洛爾抑制作用更加敏感。2、普萘洛爾抑制血管瘤的增長可能與抑制Hem EC增殖及促進其凋亡有關(guān)。3、普萘洛爾干預(yù)Hem EC前后存在明顯的差異基因表達,這些基因與細胞凋亡、細胞代謝、細胞周期、生長調(diào)控、信號傳導(dǎo)、類固醇合成、脂類生物合成等有關(guān)。4、普萘洛爾引起Hem EC凋亡可能與上調(diào)PCSK9、FABP3m RNA的表達有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：嬰兒血管瘤 普萘洛爾 基因芯片 PCSK9 FABP3
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R732.2
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 英文縮略詞表11-12
• 前言12-16
• 第一章 普萘洛爾對體外培養(yǎng)血管瘤內(nèi)皮細胞增殖和凋亡的影響16-42
• 1.1 實驗一、體外血管瘤內(nèi)皮細胞的培養(yǎng)、鑒定16-24
• 1.1.1 實驗儀器、材料16-17
• 1.1.2 實驗試劑17-18
• 1.1.3 實驗方法18-21
• 1.1.4 實驗結(jié)果21-24
• 1.2 實驗二、普萘洛爾干預(yù)后血管瘤內(nèi)皮細胞的存活率24-31
• 1.2.1 實驗材料、儀器24
• 1.2.2 實驗試劑24
• 1.2.3 實驗方法24-25
• 1.2.4 統(tǒng)計分析25
• 1.2.5 實驗結(jié)果25-31
• 1.3 實驗三、普萘洛爾干預(yù)后血管瘤內(nèi)皮細胞的凋亡率31-37
• 1.3.1 實驗材料、儀器31
• 1.3.2 實驗試劑31
• 1.3.3 實驗方法31-32
• 1.3.4 統(tǒng)計分析32
• 1.3.5 實驗結(jié)果32-37
• 1.4 討論37-40
• 1.4.1 血管瘤內(nèi)皮細胞體外培養(yǎng)37-38
• 1.4.2 普萘洛爾抑制血管瘤內(nèi)皮細胞增殖、促進其凋亡38-40
• 1.5 結(jié)論40-42
• 第二章 采用基因芯片技術(shù)研究普萘洛爾治療血管瘤機制42-66
• 2.1 實驗一、普萘洛爾干預(yù)血管瘤內(nèi)皮細胞后的cDNA芯片檢測42-54
• 2.1.1 實驗材料、儀器42
• 2.1.2 主要試劑42-43
• 2.1.3 實驗方法43-47
• 2.1.4 實驗結(jié)果47-54
• 2.2 實驗二普萘洛爾干預(yù)血管瘤內(nèi)皮細胞前后PCSK9、FABP3 mRNA的表達差異54-61
• 2.2.1 實驗材料、儀器54
• 2.2.2 實驗方法54-57
• 2.2.3 實驗結(jié)果57-61
• 2.3 討論61-64
• 2.4 結(jié)論64-66
• 參考文獻66-72
• 綜述72-80
• 參考文獻77-80
• 攻讀碩士期間的主要研究成果80-82
• 致謝82

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