發(fā)布時間：2017-09-12 20:26

  本文關(guān)鍵詞：兒童化膿性腦膜炎臨床分析及發(fā)病機制初步探討

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【摘要】：研究背景與目的 化膿性腦膜炎(purulent meningitis),簡稱化腦,是小兒時期較為常見的神經(jīng)系統(tǒng)感染,在抗生素應用于臨床以前,本病大多為致死性的。隨著以抗生素為主的綜合治療措施的臨床應用,化腦的預后已大為改觀,但仍有較高的死亡率,神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥也較為常見。早期診斷和適當干預,是降低本病死亡率和后遺癥發(fā)生率的關(guān)鍵。 腦膜炎癥的刺激和血管炎均可引起腦實質(zhì)的水腫、壞死,促使細胞因子釋放和毛細血管通透性增加,加上廣泛炎癥性病變使腦脊液循環(huán)發(fā)生障礙,這些因素均可引起腦水腫和顱壓增高,重者可發(fā)生腦疝。 國外有文獻提到,化膿性腦膜炎的實質(zhì)是強烈的炎癥反應,在化膿性腦膜炎炎癥過程中,炎性細胞釋放出大量細胞因子,如腫瘤壞死因子α (tumor necrosis factor-α, TNF-a)等,其可以使炎癥反應進一步加劇,由細胞因子介導的炎癥反應在腦脊液細菌已清除后仍可繼續(xù)存在,這可能是化腦發(fā)生慢性炎癥后遺癥的原因之一。那么TNF-a又是怎么參與化膿性腦膜炎的炎癥過程的呢? 血腦屏障是一層連續(xù)覆蓋99%腦毛細血管腔表面的內(nèi)皮細胞膜,對于維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定具有重要的意義。腦微血管內(nèi)皮細胞(BMECs)之間的緊密連接是血腦屏障的結(jié)構(gòu)與功能的基礎(chǔ),各種內(nèi)、外源的信號通路通過調(diào)節(jié)這些蛋白達到對血腦屏障通透性的調(diào)節(jié)。研究表明外傷、缺血缺氧、感染、免疫及理化因素等均可能引起緊密連接結(jié)構(gòu)及功能發(fā)生改變,造成BBB損害,從而導致BBB通透性升高引起腦水腫。血腦屏障(Blood-brain barrier, BBB)通透性增加致血管源性腦水腫在其發(fā)病中起關(guān)鍵作用,有文獻報道,前炎性腫瘤壞死因子α (TNF-α)可以引起腸上皮細胞的通透性增高,那么,其是否也能引起腦微血管內(nèi)皮細胞通透性增加呢?本研究通過分析化膿性腦膜炎的臨床特征,及化膿性腦膜炎患兒腦脊液中TNF-α的變化,而后利用永生化小鼠Bend.3細胞建立腦微血管內(nèi)皮細胞屏障模型,用TNF-α處理后,觀察其對血腦屏障通透性的影響,初步探討了化膿性腦膜炎的發(fā)病機制。 研究方法 1對30例化膿性腦膜炎患兒及對照組進行臨床資料及診治分析確立診斷標準(入組條件),并根據(jù)患兒臨床資料總結(jié)分析患兒臨床表現(xiàn)、體征及神經(jīng)系統(tǒng)受累征象、腦脊液改變、影像學資料、腦電、易感因素、對治療的反應等臨床特征。 2對所有患兒及對照組腦脊液中的TNF-α進行測定病例組30名患兒,對照組10名,年齡性別差無統(tǒng)計學意義,分別以雙抗體酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)來測定實驗對象腦脊液標本中TNF-α含量,嚴格按照試劑盒說明書進行。記錄數(shù)值。 3Bend.3細胞培養(yǎng) 用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)Bend.3細胞,在5%C02,37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),約3d細胞基本融合。以1X10cells/L的密度將Bend.3細胞懸液0.3mL接種于細胞培養(yǎng)插入皿內(nèi)池,并于外池加入完全培養(yǎng)基1.2mL,保證內(nèi)外池兩側(cè)液面相等,倒置相差顯微鏡下每日觀察bEnd.3細胞形態(tài)變化。 4腦微血管內(nèi)皮細胞(BMECs)屏障模型的建立 Bend.3細胞的TEER隨培養(yǎng)時間的延長逐漸升高,在培養(yǎng)10d后,穩(wěn)定于一個較高的水平。細胞培養(yǎng)3d時,鏡下見細胞基本匯合,TEER值為37.33±3.05,繼續(xù)培養(yǎng)到第10d,細胞TEER值增加至82.33±6.03Ω·cm2,培養(yǎng)10d后,細胞TEER維持在與10d相近的讀數(shù),提示(BMECs)屏障模型的建立。 5TNF-α處理后對Bend.3細胞的通透性影響用TNF-α處理分別3、6、12、24h,觀察各組Bend.3細胞(BMECs屏障)TEER值的改變。 研究結(jié)果 1所選取的30例患兒均符合化膿性腦膜炎診斷 所選取的30例患兒均符合細菌性腦膜炎診斷標準,所有30例患兒病原學確診3例,占10.0%,臨床符合診斷23例,占76.6%,臨床可疑診斷4例,占13.3%,均符合化膿性腦膜炎診斷。 2化膿性腦膜炎患兒腦脊液TNF-α顯著升高,且與并發(fā)癥相關(guān)。化膿性腦膜炎患兒腦脊液中TNF-α較對照組病例顯著升高,差別有統(tǒng)計學意義(p0.001)。且化膿性腦膜炎病例組兩組患兒之間TNF-α水平比較,出現(xiàn)并發(fā)癥組較之未出現(xiàn)并發(fā)癥組也有明顯升高,兩者差別有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 3TNF-α導致Bend.3細胞的TEER降低,且具有時間依賴性加入10μg/L TNF-a作用3h后,Bend.3細胞TEER值下降至(68士1.5Ω·cm2),與對照組比較有統(tǒng)計學意義(P0.05),隨著TNF-a作用時間的延長,TEER值進一步下降,6h為(501.3Ω·cm2),12h為(41士0.3Ω·cm2),24h達到最低(36士2.0Ω·cm2),與對照組比較,差異均具有統(tǒng)計學意義。 研究結(jié)論 1.化膿性腦膜炎是重要的CNS感染性疾病,易導致并發(fā)癥。在抗生素為主的綜合臨床治療后,后遺癥的發(fā)生率仍高,本研究中并發(fā)癥率達30%。 2.TNF-a參與的炎癥瀑布性級聯(lián)反應,是化膿性腦膜炎患兒出現(xiàn)并發(fā)癥的主要原因之一。 3.TNF-a可以引起血腦屏障通透性增高,可能是化膿性腦膜炎的瀑布性炎癥反應的啟動機制。
【關(guān)鍵詞】：化膿性腦膜炎 腫瘤壞死因子-α 血腦屏障 Bend.3細胞 BMECs 通透性
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R725.1
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-13
• ~.略詞簡表13-14
• 第一部分 長沙地區(qū)30例兒童化膿性腦膜炎臨床分析14-23
• 第一章 前言14-16
• 第二章 研究對象及臨床資料及分析16-18
• 第三章 結(jié)果18-20
• 第四章 討論20-22
• 第五章 結(jié)論22-23
• 第二部分 兒童化膿性腦膜炎發(fā)病機制的初步探討23-36
• 第一章 前言23-25
• 第二章 材料與方法25-30
• 1 主要試劑25
• 2 主要儀器25-26
• 3 實驗方法與步驟26-30
• 第三章 結(jié)果30-32
• 1 化膿性腦膜炎患兒腦脊液中TNF-α顯著升高30
• 2 TNF-α能降低Bend.3細胞屏障的TEER30-32
• 第四章 討論32-35
• 第五章 結(jié)論35-36
• 參考文獻36-39
• 綜述39-54
• 參考文獻49-54
• 致謝54-55
• 攻讀學位期間已發(fā)表的論文55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 何芳;尹飛;彭鏡;李孔昭;吳麗文;鄧小鹿;;永生化小鼠Bend.3細胞株具有腦微血管內(nèi)皮細胞的屏障特性[J];中國當代兒科雜志;2010年06期

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本文編號：839356