本文關(guān)鍵詞：銀杏內(nèi)酯B對缺氧缺血新生大鼠腦細(xì)胞凋亡及神經(jīng)發(fā)生的影響

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【摘要】：目的 新生兒缺氧缺血性腦損傷(Hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)是指各種圍生期疾患導(dǎo)致腦組織不同程度缺氧及血流減少甚至停止,從而導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷,是新生兒死亡及兒童癲癇、智力低下和腦性癱瘓的重要原因。神經(jīng)發(fā)生是指神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cell, NSCs)在特定條件下發(fā)生增殖、遷移及進(jìn)一步分化成有特定表型的神經(jīng)細(xì)胞,并參與神經(jīng)功能修復(fù)的過程。自從證實成體腦組織中存在NSCs以來,研究進(jìn)展很大。生理情況下NSCs微量增殖,一定條件下如腦缺血、癲癇等可誘導(dǎo)增加,但由于增殖數(shù)量較少、遷移過程中發(fā)生凋亡及分化為神經(jīng)元的比例小等原因而不足以修復(fù)受損的神經(jīng)功能。因此,了解腦損傷誘導(dǎo)神經(jīng)發(fā)生機(jī)制,尋找促進(jìn)神經(jīng)發(fā)生增加的措施,將為治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病帶來新的希望。銀杏內(nèi)酯(ginkgolides)是從銀杏葉中提取的一類萜內(nèi)酯類化合物,藥理作用廣泛,在中樞神經(jīng)系統(tǒng),可通過降低損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡促進(jìn)新生血管形成等機(jī)制保護(hù)并修復(fù)受損的神經(jīng)功能。近年研究發(fā)現(xiàn),銀杏內(nèi)酯B(ginkgolides B, GB)可促進(jìn)體外培養(yǎng)的NSCs增殖、遷移及定向分化。本課題通過制作HIBD新生大鼠模型,應(yīng)用GB進(jìn)行干預(yù),觀察新生大鼠HIBD后細(xì)胞凋亡情況及內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的改變,研究GB對其發(fā)生的影響,為NSCs定向誘導(dǎo)分化研究及臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法 清潔級新生7日齡SD大鼠200只,隨機(jī)分為假手術(shù)組48只、HIBD組52只、GB低劑量組50只及GB高劑量組50只,最終納入數(shù)據(jù)分析的大鼠每組均為48只。經(jīng)典Rice法制作HIBD動物模型,在造模過程中及造模后觀察動物行為學(xué)改變。GB低劑量組與GB高劑量組分別按5mg/kg、10mg/kg腹腔注射GB,其它兩組注射等量生理鹽水(10ml/kg體重體積注射量),每天一次共5天。各組隨機(jī)選取6只分別在造模后3d,7d,14d,28d處死：(1)規(guī)定時間點斷頭取腦處死大鼠,熒光定量PCR法檢測各時間點Caspase-3、VEGF、Foxgl mRNA的表達(dá)水平,2-△△CT法計算相對表達(dá)量,比較各組表達(dá)差異；(2)按規(guī)定時間點處死前給予腹腔注射溴脫氧尿嘧啶核苷(Bromodeoxyuridine BrdU)標(biāo)記新生細(xì)胞,劑量50mg/kg,1次/12h,共5次,最后一次腹腔注射BrdU4h后處死；分別以巢蛋白(Nestin)神經(jīng)元烯醇化酶(neuron special enolase, NSE)和膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic portein, GFAP)標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞、神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細(xì)胞,免疫組化檢測各時間點海馬齒狀回BrdU陽性細(xì)胞數(shù),免疫熒光雙標(biāo)法檢測各時間點皮層BrdU+Nestin+、BrdU+/GFAP+、BrdU+/NSE+細(xì)胞數(shù),觀察各組陽性細(xì)胞的定位及半定量結(jié)果的差異。定量結(jié)果數(shù)據(jù)以x±s表示,采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析,多組間計量資料比較采用單因素方差分析,差異有統(tǒng)計學(xué)意義者進(jìn)一步以LSD-t法進(jìn)行兩兩比較,以a=0.05為檢驗水準(zhǔn)。 結(jié)果 1.各組大鼠Caspase-3mRNA的表達(dá)：Caspase-3在3d時表達(dá)最高,此后逐漸下降,28d時接近正常水平,兩治療組較HIBD組基因表達(dá)明顯降低,GB高劑量組較GB低劑量組降低明顯； 2.各組大鼠VEGF mRNA的表達(dá)：在3d明顯增加,此后漸降,兩治療組增加較HIBD組顯著,其中GB高劑量組表達(dá)較GB低劑量組表達(dá)增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 3.各組大鼠Foxgl mRNA的表達(dá)：HIBD后3d表達(dá)開始增加,7d達(dá)高峰,7d后逐漸下降；兩治療組表達(dá)高于HIBD組,其中,GB高劑量組在造模后7d、14d、28d表達(dá)均高于GB低劑量組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 4.海馬BrdU+細(xì)胞：假手術(shù)組海馬可見少量BrdU+細(xì)胞,HIBD后BrdU+細(xì)胞數(shù)增加,7d最多,此后逐漸下降；兩治療組在各時間點BrdU+細(xì)胞數(shù)高于HIBD組,其中,GB高劑量組的BrdU+細(xì)胞數(shù)在各時間點高于GB低劑量組。 5.皮層BrdU+/nestin+細(xì)胞：HIBD后3d開始增加,7d時細(xì)胞數(shù)最多,14d、28d逐漸減少；兩治療組陽性細(xì)胞數(shù)高于HIBD組；此外,GB高劑量組在7d、14d及28d時細(xì)胞數(shù)較GB低劑量組增多。 6.皮層BrdU+/NSE+細(xì)胞：HIBD后3d開始增加,14d達(dá)高峰,28d逐漸下降；3d時,兩治療組和HIBD組細(xì)胞數(shù)無明顯差異,7d后前者較后者顯著增多；GB高劑量組在28d時較GB低劑量組增多,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 7.皮層BrdU+/GFAP+細(xì)胞：HIBD后3d時細(xì)胞數(shù)無明顯增多,7d開始增加,14d最多,28d時降低；在7d,14d及28d時,兩治療組比HIBD組細(xì)胞數(shù)增多,其中GB高劑量組又較GB低劑量組細(xì)胞數(shù)增多,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論 1.HIBD后Caspase-3mRNA表達(dá)上調(diào),腦細(xì)胞凋亡增加,上調(diào)VEGF mRNA表達(dá),促新生血管形成修復(fù)損傷,上調(diào)Foxgl表達(dá),誘導(dǎo)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化增加； 2.GB可降低HIBD后神經(jīng)細(xì)胞凋亡,可進(jìn)一步上調(diào)VEGF及Foxgl表達(dá),減輕神經(jīng)系統(tǒng)損傷,促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖并向神經(jīng)元方向分化,從而減輕神經(jīng)系統(tǒng)損傷并促進(jìn)受損神經(jīng)功能的修復(fù)； 3.GB高劑量組較GB低劑量組治療作用更顯著。
【關(guān)鍵詞】：缺氧缺血性腦損傷 神經(jīng)干細(xì)胞 銀杏內(nèi)酯B Caspase-3 血管內(nèi)皮生長因子 Foxg1
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R722.1
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 目錄11-12
• 中英文縮略詞對照12-13
• 引言13-15
• 1 實驗材料15-18
• 2 實驗方法18-28
• 3 結(jié)果28-38
• 4 討論38-45
• 5 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 綜述51-65
• 參考文獻(xiàn)60-65
• 個人簡介及攻讀碩士期間發(fā)表的論文65-66
• 致謝66

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：834920