發(fā)布時(shí)間：2017-09-11 11:22

  本文關(guān)鍵詞：內(nèi)毒素耐受幼鼠肝臟S100A8及血清TREM-1表達(dá)變化的研究

  更多相關(guān)文章： TREM-1 S100A8 內(nèi)毒素耐受 脂多糖

【摘要】：目的：通過(guò)預(yù)先進(jìn)行小劑量?jī)?nèi)毒素刺激,建立幼鼠內(nèi)毒素耐受模型,研究經(jīng)內(nèi)毒素耐受后幼鼠肝臟S100A8/TLR4(Toll樣受體4)通路相關(guān)正性因子鈣結(jié)合蛋白S100A8及血清炎性介質(zhì)髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體-1(triggering receptor expressed on myeloid cells-1, TREM-1)的表達(dá)變化。方法：1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組：將96只ICR幼鼠分為生理鹽水刺激組、非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組和預(yù)先內(nèi)毒素刺激組,按照隨機(jī)數(shù)字表法將96只幼鼠隨機(jī)分配到三組中,每組32只幼鼠。2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的適應(yīng)性喂養(yǎng)：將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組后,模擬幼鼠的自然生存條件適應(yīng)性喂養(yǎng)一周,三組幼鼠飼養(yǎng)于相同環(huán)境中。3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的模型建立：(1)采用經(jīng)幼鼠腹腔注入藥物的方法,對(duì)預(yù)先內(nèi)毒素刺激組幼鼠注入脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS),劑量為0.5μg/g,同時(shí)給予非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組和生理鹽水刺激組幼鼠腹腔注入相同體積的無(wú)菌生理鹽水。(2)在上述注射結(jié)束24小時(shí)后,再次對(duì)預(yù)先內(nèi)毒素刺激組注入LPS,此次劑量為5μg/g,而非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組則同樣給予腹腔注入5μg/g LPS,生理鹽水刺激組則仍給予相同體積的無(wú)菌生理鹽水刺激以形成空白對(duì)照。4、標(biāo)本的留取與指標(biāo)的檢測(cè)：(1)分別在第二次注射前(0h),注射后3h,10h,24h每組幼鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法各選取8只,然后采用摘除眼球法得到幼鼠外周血,立即分離血清,然后采用酶聯(lián)免疫分析法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)檢測(cè)各組幼鼠在各時(shí)間點(diǎn)血清炎性介質(zhì)TREM-1的表達(dá)情況。(2)取血后,立即處死幼鼠,迅速在無(wú)菌操作下取下完整的肝臟組織,置于多聚甲醛液中固定保存,石蠟切片,在光鏡下觀察各組幼鼠肝臟組織病理變化情況,并采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)幼鼠肝臟S100A8的表達(dá)情況。結(jié)果：1、幼鼠日常行為改變：預(yù)先內(nèi)毒素刺激組32只幼鼠經(jīng)小劑量LPS (0.5μg/g)刺激后均不同程度地出現(xiàn)少吃、少動(dòng)、離群和毛發(fā)散亂表現(xiàn),這種表現(xiàn)在注射后1小時(shí)左右出現(xiàn),持續(xù)至12小時(shí)左右逐漸消失。注射等體積生理鹽水的兩組幼鼠(非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組和生理鹽水刺激組)無(wú)上述表現(xiàn)出現(xiàn)。預(yù)先內(nèi)毒素刺激組及非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組各24只幼鼠經(jīng)大劑量LPS (5μig/g)刺激后,均不同程度地出現(xiàn)少吃、少動(dòng)、離群和毛發(fā)散亂表現(xiàn),這種表現(xiàn)在注射大劑量LPS后3小時(shí)左右出現(xiàn),12小時(shí)左右達(dá)高峰,并持續(xù)至本次觀察結(jié)束(注射大劑量LPS 24小時(shí))。而且上述表現(xiàn)較小劑量LPS刺激后更加明顯,非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組有兩只小鼠還有過(guò)抽搐表現(xiàn)。而生理鹽水刺激組小鼠行為仍無(wú)明顯改變。2、TREM-1的表達(dá)：(1)在大劑量LPS注射前(即Oh),對(duì)幼鼠TREM-1表達(dá)量進(jìn)行組間比較,預(yù)先內(nèi)毒素刺激組與非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組相比,差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),預(yù)先內(nèi)毒素刺激組及生理鹽水刺激組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),說(shuō)明小劑量LPS (0.5μg/g)也會(huì)造成幼鼠體內(nèi)炎癥因子的釋放；非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組與生理鹽水刺激組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.5)。(2)在大劑量LPS注射后3h、10h及24h,對(duì)幼鼠TREM-1表達(dá)量進(jìn)行組間比較,預(yù)先內(nèi)毒素刺激組與非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組及生理鹽水刺激組兩兩相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),且非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組表達(dá)量高于預(yù)先內(nèi)毒素刺激組,預(yù)先內(nèi)毒素刺激組表達(dá)量高于生理鹽水刺激組,說(shuō)明內(nèi)毒素耐受模型建立是成功的。(3)在大劑量LPS注射前(0h)、注射后3h、10h、24h,對(duì)幼鼠TREM-1表達(dá)量進(jìn)行組內(nèi)比較,預(yù)先內(nèi)毒素刺激組與非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組在實(shí)驗(yàn)各時(shí)刻表達(dá)量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而生理鹽水刺激組在各時(shí)刻表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、肝臟組織病理變化：預(yù)先內(nèi)毒素刺激組各時(shí)刻肝臟組織病理?yè)p傷程度明顯低于非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組,提示內(nèi)毒素耐受模型建立是成功的。4、S100A8的表達(dá)：；(1)在大劑量LPS注射前(即0h),對(duì)幼鼠S100A8表達(dá)量進(jìn)行組間比較,預(yù)先內(nèi)毒素刺激組與非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組及生理鹽水刺激組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),說(shuō)明小劑量LPS(0.5μg/g)也能激活S100A8/TLR4通路,造成S100A8的釋放；非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組與生理鹽水刺激組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)在大劑量LPS注射后10h,對(duì)幼鼠S100A8表達(dá)量進(jìn)行組間比較,預(yù)先內(nèi)毒素刺激組、非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組與生理鹽水刺激組三組之間兩兩比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明內(nèi)毒素耐受模型成功建立；(3)在大劑量LPS注射后3h、24h,對(duì)幼鼠S100A8表達(dá)量進(jìn)行組間比較,預(yù)先內(nèi)毒素刺激組與非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而預(yù)先內(nèi)毒素刺激組、非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組分別與生理鹽水刺激組相比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；(4)在大劑量LPS注射前(Oh)、注射后3h、10h、24h,對(duì)幼鼠S100A8表達(dá)量進(jìn)行組內(nèi)比較,預(yù)先內(nèi)毒素刺激組在Oh和10h表達(dá)量差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組在10h和24h表達(dá)水平無(wú)差別,生理鹽水刺激組在各時(shí)刻表達(dá)水平均無(wú)差別。結(jié)論：1、通過(guò)預(yù)先注射小劑量LPS (0.5μg/g),24小時(shí)后再次注入大劑量LPS(5μg/g)來(lái)建立幼鼠內(nèi)毒素耐受模型的方法是可行的；2、相對(duì)于非預(yù)先內(nèi)毒素刺激組而言,預(yù)先內(nèi)毒素刺激組幼鼠的行為改變程度輕,肝臟病理?yè)p傷程度明顯減輕,炎性介質(zhì)的釋放明顯減少,由此可見(jiàn),作為S100A8/TLR4通路上的正性因子,S100A8可能在內(nèi)毒素耐受中發(fā)揮著重要的作用。
【關(guān)鍵詞】：TREM-1 S100A8 內(nèi)毒素耐受 脂多糖
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R720.597
【目錄】：

• 摘要3-7
• abstract7-13
• 前言13-17
• 材料與方法17-25
• 結(jié)果25-31
• 討論31-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 英漢縮略詞對(duì)照表45-46
• 致謝46-47
• 鈣結(jié)合蛋白S100A8及其臨床應(yīng)用前景綜述47-60
• 參考文獻(xiàn)56-60

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本文編號(hào)：830446