發(fā)布時間：2017-09-11 11:22

  本文關(guān)鍵詞：內(nèi)毒素耐受幼鼠肝臟S100A8及血清TREM-1表達變化的研究

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【摘要】：目的：通過預先進行小劑量內(nèi)毒素刺激,建立幼鼠內(nèi)毒素耐受模型,研究經(jīng)內(nèi)毒素耐受后幼鼠肝臟S100A8/TLR4(Toll樣受體4)通路相關(guān)正性因子鈣結(jié)合蛋白S100A8及血清炎性介質(zhì)髓樣細胞觸發(fā)受體-1(triggering receptor expressed on myeloid cells-1, TREM-1)的表達變化。方法：1、實驗動物的分組：將96只ICR幼鼠分為生理鹽水刺激組、非預先內(nèi)毒素刺激組和預先內(nèi)毒素刺激組,按照隨機數(shù)字表法將96只幼鼠隨機分配到三組中,每組32只幼鼠。2、實驗動物的適應性喂養(yǎng)：將實驗動物分組后,模擬幼鼠的自然生存條件適應性喂養(yǎng)一周,三組幼鼠飼養(yǎng)于相同環(huán)境中。3、實驗動物的模型建立：(1)采用經(jīng)幼鼠腹腔注入藥物的方法,對預先內(nèi)毒素刺激組幼鼠注入脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS),劑量為0.5μg/g,同時給予非預先內(nèi)毒素刺激組和生理鹽水刺激組幼鼠腹腔注入相同體積的無菌生理鹽水。(2)在上述注射結(jié)束24小時后,再次對預先內(nèi)毒素刺激組注入LPS,此次劑量為5μg/g,而非預先內(nèi)毒素刺激組則同樣給予腹腔注入5μg/g LPS,生理鹽水刺激組則仍給予相同體積的無菌生理鹽水刺激以形成空白對照。4、標本的留取與指標的檢測：(1)分別在第二次注射前(0h),注射后3h,10h,24h每組幼鼠按照隨機數(shù)字表法各選取8只,然后采用摘除眼球法得到幼鼠外周血,立即分離血清,然后采用酶聯(lián)免疫分析法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)檢測各組幼鼠在各時間點血清炎性介質(zhì)TREM-1的表達情況。(2)取血后,立即處死幼鼠,迅速在無菌操作下取下完整的肝臟組織,置于多聚甲醛液中固定保存,石蠟切片,在光鏡下觀察各組幼鼠肝臟組織病理變化情況,并采用免疫組織化學法檢測幼鼠肝臟S100A8的表達情況。結(jié)果：1、幼鼠日常行為改變：預先內(nèi)毒素刺激組32只幼鼠經(jīng)小劑量LPS (0.5μg/g)刺激后均不同程度地出現(xiàn)少吃、少動、離群和毛發(fā)散亂表現(xiàn),這種表現(xiàn)在注射后1小時左右出現(xiàn),持續(xù)至12小時左右逐漸消失。注射等體積生理鹽水的兩組幼鼠(非預先內(nèi)毒素刺激組和生理鹽水刺激組)無上述表現(xiàn)出現(xiàn)。預先內(nèi)毒素刺激組及非預先內(nèi)毒素刺激組各24只幼鼠經(jīng)大劑量LPS (5μig/g)刺激后,均不同程度地出現(xiàn)少吃、少動、離群和毛發(fā)散亂表現(xiàn),這種表現(xiàn)在注射大劑量LPS后3小時左右出現(xiàn),12小時左右達高峰,并持續(xù)至本次觀察結(jié)束(注射大劑量LPS 24小時)。而且上述表現(xiàn)較小劑量LPS刺激后更加明顯,非預先內(nèi)毒素刺激組有兩只小鼠還有過抽搐表現(xiàn)。而生理鹽水刺激組小鼠行為仍無明顯改變。2、TREM-1的表達：(1)在大劑量LPS注射前(即Oh),對幼鼠TREM-1表達量進行組間比較,預先內(nèi)毒素刺激組與非預先內(nèi)毒素刺激組相比,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.01),預先內(nèi)毒素刺激組及生理鹽水刺激組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),說明小劑量LPS (0.5μg/g)也會造成幼鼠體內(nèi)炎癥因子的釋放；非預先內(nèi)毒素刺激組與生理鹽水刺激組相比,差異無統(tǒng)計學意義(P0.5)。(2)在大劑量LPS注射后3h、10h及24h,對幼鼠TREM-1表達量進行組間比較,預先內(nèi)毒素刺激組與非預先內(nèi)毒素刺激組及生理鹽水刺激組兩兩相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01),且非預先內(nèi)毒素刺激組表達量高于預先內(nèi)毒素刺激組,預先內(nèi)毒素刺激組表達量高于生理鹽水刺激組,說明內(nèi)毒素耐受模型建立是成功的。(3)在大劑量LPS注射前(0h)、注射后3h、10h、24h,對幼鼠TREM-1表達量進行組內(nèi)比較,預先內(nèi)毒素刺激組與非預先內(nèi)毒素刺激組在實驗各時刻表達量差異均有統(tǒng)計學意義,而生理鹽水刺激組在各時刻表達量差異無統(tǒng)計學意義。3、肝臟組織病理變化：預先內(nèi)毒素刺激組各時刻肝臟組織病理損傷程度明顯低于非預先內(nèi)毒素刺激組,提示內(nèi)毒素耐受模型建立是成功的。4、S100A8的表達：；(1)在大劑量LPS注射前(即0h),對幼鼠S100A8表達量進行組間比較,預先內(nèi)毒素刺激組與非預先內(nèi)毒素刺激組及生理鹽水刺激組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),說明小劑量LPS(0.5μg/g)也能激活S100A8/TLR4通路,造成S100A8的釋放；非預先內(nèi)毒素刺激組與生理鹽水刺激組相比,差異無統(tǒng)計學意義。(2)在大劑量LPS注射后10h,對幼鼠S100A8表達量進行組間比較,預先內(nèi)毒素刺激組、非預先內(nèi)毒素刺激組與生理鹽水刺激組三組之間兩兩比較,差異均有統(tǒng)計學意義,說明內(nèi)毒素耐受模型成功建立；(3)在大劑量LPS注射后3h、24h,對幼鼠S100A8表達量進行組間比較,預先內(nèi)毒素刺激組與非預先內(nèi)毒素刺激組相比,差異無統(tǒng)計學意義,而預先內(nèi)毒素刺激組、非預先內(nèi)毒素刺激組分別與生理鹽水刺激組相比,差異均有統(tǒng)計學意義；(4)在大劑量LPS注射前(Oh)、注射后3h、10h、24h,對幼鼠S100A8表達量進行組內(nèi)比較,預先內(nèi)毒素刺激組在Oh和10h表達量差別有統(tǒng)計學意義,非預先內(nèi)毒素刺激組在10h和24h表達水平無差別,生理鹽水刺激組在各時刻表達水平均無差別。結(jié)論：1、通過預先注射小劑量LPS (0.5μg/g),24小時后再次注入大劑量LPS(5μg/g)來建立幼鼠內(nèi)毒素耐受模型的方法是可行的；2、相對于非預先內(nèi)毒素刺激組而言,預先內(nèi)毒素刺激組幼鼠的行為改變程度輕,肝臟病理損傷程度明顯減輕,炎性介質(zhì)的釋放明顯減少,由此可見,作為S100A8/TLR4通路上的正性因子,S100A8可能在內(nèi)毒素耐受中發(fā)揮著重要的作用。
【關(guān)鍵詞】：TREM-1 S100A8 內(nèi)毒素耐受 脂多糖
【學位授予單位】：四川醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R720.597
【目錄】：

• 摘要3-7
• abstract7-13
• 前言13-17
• 材料與方法17-25
• 結(jié)果25-31
• 討論31-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻39-45
• 英漢縮略詞對照表45-46
• 致謝46-47
• 鈣結(jié)合蛋白S100A8及其臨床應用前景綜述47-60
• 參考文獻56-60

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本文編號：830446