本文關(guān)鍵詞：EV71感染患兒細(xì)胞免疫功能和外周血單個核細(xì)胞Toll樣受體的變化及臨床意義

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【摘要】：目的 檢測腸道病毒71型（Enterovirus71, EV71）感染患兒細(xì)胞免疫功能的變化及外周血單個核細(xì)胞（Peripheral blood mononuclear cell, PBMC） Toll樣受體（Toll-likereceptors, TLRs）3、4、7mRNA的表達(dá)。探討細(xì)胞免疫功能及Toll樣受體信號通路在EV71致病機(jī)制中的作用，為EV71致病機(jī)制的研究提供理論依據(jù)。 方法 第一部分收集確診為EV71感染的患兒55例，分為輕癥組、重癥組、危重癥組，其中輕癥組患兒20例，重癥組患兒25例，危重癥組患兒10例。對EV71感染患兒臨床資料進(jìn)行分析并應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測其外周血B細(xì)胞、T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞數(shù)量。 第二部分選擇同期門診體檢正常的兒童18例作為正常對照組。應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）方法檢測EV71感染患兒及正常對照組兒童PBMC TLR3、TLR4、TLR7mRNA的表達(dá)，通過TLR3基因=TLR3基因表達(dá)/β-actin表達(dá)、TLR4基因=TLR4基因表達(dá)/β-actin表達(dá)和TLR7基因=TLR7基因表達(dá)/β-actin表達(dá)計算檢測基因的表達(dá)水平。應(yīng)用ELISA方法檢測EV71感染患兒及正常對照組兒童外周血血漿細(xì)胞因子IL-6、IL-10、TNF-α的水平。 結(jié)果 1.臨床資料分析：55例EV71感染患兒中輕癥組患兒20例，男11例，女9例，平均年齡（月）29.2±17.8；重癥組患兒25例，男9例，女16例，平均年齡（月）30.7±16；危重癥組患兒10例，男6例，女4例，平均年齡（月）26.1±18.7。三組性別、年齡比較無統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=2.393，p=0.331；F=0.149，p0.05）。25例重癥組患兒中合并急性馳緩性麻痹4例。輕癥組及重癥組患兒均痊愈出院，10例危重癥患兒因腦干腦炎、神經(jīng)源性肺水腫、呼吸衰竭需機(jī)械通氣6例，死亡3例，放棄治療1例，痊愈出院6例。入院前發(fā)熱天數(shù)三組之間比較無差異(F=2.39, p0.05)。患兒病程中最高體溫三組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義，重癥組、危重癥組患兒最高體溫明顯高于輕癥組（p0.05）�；純喝朐簳r測血糖、白細(xì)胞數(shù)量、中性粒細(xì)胞數(shù)量、血小板數(shù)量危重癥患兒比重癥患兒、輕癥患兒明顯增高，有統(tǒng)計學(xué)意義（p0.05）。 2.外周血T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞、B細(xì)胞數(shù)量變化：EV71感染患兒CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量在重癥組、危重癥組均出現(xiàn)明顯下降。其中危重癥患兒CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量、NK細(xì)胞數(shù)量與輕癥組、重癥組相比明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0．05)。B淋巴細(xì)胞絕對計數(shù)在各組間無明顯差異。 3. Toll樣受體表達(dá)情況：EV71感染患兒（包括輕癥組、重癥組、危重癥組）PBMCTLR4、TLR7mRNA的表達(dá)較正常對照組顯著增高，而三組間比較發(fā)現(xiàn)重癥組患兒TLR4、TLR7mRNA表達(dá)較輕癥組、危重癥組患兒明顯增高。EV71感染輕癥組患兒TLR3mRNA表達(dá)明顯高于正常對照組、重癥組、危重癥組（p0.05），而危重癥組患兒與正常對照組及重癥組患兒相比明顯下降（p0.05）。 4.細(xì)胞因子水平變化：對EV71感染患兒進(jìn)行細(xì)胞因子檢測發(fā)現(xiàn)危重癥組患兒外周血中IL-6的水平明顯增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p0.05）。抗炎癥細(xì)胞因子IL-10的水平在各組間比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（p0.05），隨著病情加重，IL-10的水平不斷升高。促炎癥細(xì)胞因子TNF-α在危重癥患兒中出現(xiàn)明顯下降，與輕癥患兒、重癥患兒相比具有統(tǒng)計學(xué)意義（p0.05）。IL-10/TNF-α隨著病情嚴(yán)重不斷增高（p0.05）。 結(jié)論 1.EV71感染危重癥組患兒CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量、NK細(xì)胞數(shù)量明顯下降。B淋巴細(xì)胞數(shù)量在各組間無明顯差異。 2.EV71感染患兒存在明顯的免疫功能異常，，TLR3mRNA的表達(dá)在危重組患兒中出現(xiàn)明顯下降，而重癥組患兒TLR4mRNA、TLR7mRNA的表達(dá)出現(xiàn)明顯增高。提示TLRs異常活化可能參與EV71的致病機(jī)制，是導(dǎo)致病情變化的因素之一。 3. EV71感染患兒外周血血漿IL-6、IL-10的水平隨病情嚴(yán)重明顯增高，危重癥患兒TNF-α的水平明顯下降，提示細(xì)胞因子的改變可能是導(dǎo)致EV71感染不同臨床表現(xiàn)的因素之一。
【關(guān)鍵詞】：腸道病毒71型 細(xì)胞免疫 Toll樣受體 細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R725.1
【目錄】：

• 縮略語表4-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 文獻(xiàn)回顧15-27
• 第一部分 EV71 感染患兒病原學(xué)診斷及細(xì)胞免疫功能檢測27-36
• 1 材料27-28
• 2 方法28-30
• 3 結(jié)果30-33
• 4 討論33-36
• 第二部分 EV71 感染患兒外周血單個核細(xì)胞 Toll 樣受體的表達(dá)及細(xì)胞因子的檢測36-52
• 1 材料36-38
• 2 方法38-43
• 3 結(jié)果43-49
• 4 討論49-52
• 小結(jié)52-53
• 參考文獻(xiàn)53-61
• 個人簡歷和研究成果61-62
• 致謝62

【參考文獻(xiàn)】

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1 趙曉莉;潘凱麗;錢新宏;李迎俠;杜莉;王英娟;羅建峰;張W

本文編號：812347