本文關鍵詞：戈謝病GBA基因突變分析

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【摘要】：研究背景 戈謝病是一種常染色體隱性遺傳引起的溶酶體貯積病。由于葡糖腦苷脂酶GBA基因突變，葡糖腦苷脂酶活性降低或喪失，造成葡糖腦苷脂在單核-巨噬細胞內(nèi)蓄積，臨床上以肝脾大、貧血、血小板減少、骨骼破壞、反復癲癇發(fā)作、共濟失調(diào)和生長發(fā)育落后為主。戈謝病預后不良，給病人及其家庭帶來巨大痛苦，同時也給社會增加了沉重負擔�？偨Y其臨床表現(xiàn)和骨髓穿刺結果，對疾病進行早期診斷。為了減少該類遺傳病的發(fā)生，基因診斷和遺傳咨詢漸提上日程。 目的 現(xiàn)總結我院住院2個家系中2名戈謝病患兒的臨床表現(xiàn)及骨髓穿刺結果，，通過基因測序研究分析其基因突變類型，為這2個家系提供產(chǎn)前診斷及遺傳咨詢。 方法 征得戈謝病患者家屬知情同意后，收集了2個無關的戈謝病家系的外周血標本和臨床資料，同時為了排除基因多態(tài)性，對10名無血緣關系的健康兒童的GBA基因進行測序。使用1ml血液基因組DNA提取試劑盒提取2名患者及其家屬的外周血基因組DNA。通過查閱人類基因組Genbank，可以獲取GBA基因序列，在GBA基因內(nèi)含子區(qū)域設計引物，在體外環(huán)境下，利用聚合酶鏈反應(PCR)技術對外顯子進行擴增，然后對PCR產(chǎn)物進行回收、純化，采用DNA直接測序的方法對GBA基因進行測序，最后將GBA基因測序結果與人類基因庫中的GBA基因序列進行對比分析，了解患兒的基因突變位點及其類型，采用TA克隆技術對發(fā)現(xiàn)的突變進一步驗證。 結果 1．家系1和10名正常兒童PCR擴增所得片段與預計擴增片段大小一致，可以進行純化和測序； 2．家系2先證者第9外顯子PCR擴增所得片段比預計擴增片段小，其他PCR擴增片段和其父母的所有PCR擴增片段與預計擴增片段大小一致，可以進行純化和測序； 3．家系1中先證者GBA基因第6外顯子發(fā)生4種突變，N188S（c.680A＞G）雜合突變，N188K（c.681T＞G）雜合突變，V191G（c.689T＞G）雜合突變，S196P（c.703T＞C）雜合突變，先證者父母、姐姐和10名健康兒童第6外顯子上述4種突變也以雜合形式存在； 4．家系2中先證者及其父母GBA基因第6外顯子也發(fā)生上述4種突變，同時先證者第9外顯子發(fā)現(xiàn)缺失突變c.1263_1317del55和D409H（c.1342G＞C）純合突變，而先證者父母第9外顯子未發(fā)現(xiàn)異常。 結論 1．2個家系中的先證者臨床表現(xiàn)及骨髓穿刺結果符合戈謝病的診斷標準，診斷明確； 2．家系1和家系2中發(fā)現(xiàn)的4種突變N188S（c.680A＞G），N188K（c.681T＞G），V191G（c.689T＞G），S196P（c.703T＞C），考慮為GBA基因與GBA假基因所致，若要進行進一步鑒別，需進一步對GBA基因第6外顯子重新設計引物并對家系1和家系2第6外顯子進行測序； 3．家系2中發(fā)現(xiàn)c.1263_1317del55和D409H（c.1342G＞C）純合突變?yōu)橄茸C者的分子遺傳學基礎，患兒父母未發(fā)現(xiàn)基因突變，考慮患兒這些突變不是來源于其父母，是患兒自身突變所致； 4．本研究從分子水平揭示了部分戈謝病的分子遺傳學基礎，豐富了國內(nèi)在戈謝病分子遺傳學領域的研究，在方法學上為該病的分子遺傳學研究提供了可行途徑。
【關鍵詞】：戈謝病 GBA基因 突變
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R725.8
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 符號說明11-12
• 1 引言12-15
• 2 研究對象與方法15-23
• 2.1 研究對象15
• 2.2 藥品和試劑15-17
• 2.3 主要儀器17
• 2.4 方法17-23
• 3 結果23-25
• 3.1 基因組 DNA 檢測結果23
• 3.2 PCR 反應擴增結果23
• 3.3 擴增產(chǎn)物 DNA 測序結果23-25
• 4 討論25-29
• 5 結論29-30
• 附圖表30-34
• 參考文獻34-36
• 綜述36-59
• 參考文獻50-58
• 附圖58-59
• 個人簡歷、在校期間發(fā)表的文章題錄59-60
• 致謝60

本文編號：810598