發(fā)布時(shí)間：2017-09-01 16:44

  本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞干預(yù)急性閉塞性細(xì)支氣管炎小鼠的療效及機(jī)制

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【摘要】：第一部分 閉塞性細(xì)支氣管炎小鼠急性期模型的建立目的：探討閉塞性細(xì)支氣管炎(Bonchiolitis Oliterans, BO)小鼠急性期模型的建立方法。方法：將C57BL/6小鼠(6-8w,雄性,SPF級(jí))隨機(jī)分兩組：對(duì)照組(n6)和BO組(n=6)。BO組小鼠氣管內(nèi)滴注2,3-丁二酮(DA)(490mg/mL即500 mg/kg)1次,對(duì)照組的氣管內(nèi)滴注消毒ddH2O,其余的實(shí)驗(yàn)條件、方法均相同。小鼠飼養(yǎng)于動(dòng)物房(SPF級(jí)),至第3d和第7d收集支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar Lavage Fluid, BALF)、左肺組織。觀察小鼠一般狀態(tài)、體質(zhì)量,檢測(cè)氣道反應(yīng)性(Airway Hyper Reactivity, AHR)。BALF進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)、分類計(jì)數(shù),左肺行HE染色。結(jié)果：BO組小鼠給予DA后1d可出現(xiàn)喘息、呼吸增快等表現(xiàn),監(jiān)測(cè)體質(zhì)量顯著較對(duì)照組降低(P0.05)。與對(duì)照組相比,BO組小鼠霧化Mch(濃度為50 mg/mL)時(shí)增強(qiáng)呼氣間歇(Enhanced Pause, Penh)值明顯升高(P0.05)。BO組小鼠的BALF中的炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示：第3d時(shí)中性粒細(xì)胞的總數(shù)較對(duì)照組明顯升高(P0.05),第7d時(shí)巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的總數(shù)較對(duì)照組顯著升高(P0.05)。HE染色顯示,3d時(shí)BO組小鼠的細(xì)支氣管腔內(nèi)、管腔周圍浸潤(rùn)了大量的炎性細(xì)胞,管腔閉塞嚴(yán)重,急性期組織出血較嚴(yán)重；7d BO組小鼠的基底細(xì)胞嚴(yán)重壞死,氣道上皮細(xì)胞(Airway epithelial cells, AEC)雖然附著于基底,但可見細(xì)胞明顯有增生肥大,細(xì)胞核丟失較嚴(yán)重,管腔內(nèi)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn),管腔壁增厚,類似纖維化的表現(xiàn)。結(jié)論：C57BL/6小鼠給予氣管內(nèi)滴注DA(500 mg/kg)1次,可于第7d觀察到典型的急性期BO改變,建立BO小鼠急性期模型成功。第二部分人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞干預(yù)急性閉塞性細(xì)支氣管炎小鼠的療效及機(jī)制目的：觀察人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(HUC-MSCs)干預(yù)BO小鼠模型的療效及其可能機(jī)制。方法：將C57BL/6小鼠分為5組(n=8):①Control+NaCl(空白對(duì)照)組,②Control+HUC-MSC(安全性對(duì)照)組,③BO+NaCl(實(shí)驗(yàn))組,④BO+HUC-MSCs(于細(xì)胞治療)組,⑤BO+HUC-MSCs-CM(條件培養(yǎng)基治療)組。每組于造模后1h分別尾靜脈注入NaCl、 HUC-MSCs、HUC-MSCs-CM(總體積均為200ul)等。Dil標(biāo)記HUC-MSCs,尾靜脈注入,并示蹤其在小鼠肺組織的分布及轉(zhuǎn)移。觀察一般情況,監(jiān)測(cè)體質(zhì)量,并于第3天和第7天收集小鼠的BALF、氣管和左肺；監(jiān)測(cè)肺功能；進(jìn)行HE染色。組織熒光檢測(cè)氣管內(nèi)E-cadherin、CK-5表達(dá)；細(xì)胞熒光檢測(cè)HUC-MSCs中E-cadherin、CK-5的表達(dá)；Dil體外標(biāo)記HUC-MSCs及體內(nèi)示蹤。結(jié)果:HUC-MSCs干預(yù)BO小鼠后可明顯降低其死亡率(P0.05)。肺組織病理學(xué)可見BO+HUC-MSCs組、BO+HUC-MSCs-CM組于第3、7dAEC、基底細(xì)胞明顯修復(fù),肺泡及支氣管周圍的炎癥細(xì)胞明顯減少、肺泡間隔縮小,急性出血減少。氣管內(nèi)熒光顯示：AEC的E-cadherin、 CK-5表達(dá)較實(shí)驗(yàn)組明顯升高(P0.05)。HUC-MSCs細(xì)胞熒光可以看出其自身并不表達(dá)E-cadherin、CK-5。Dil可以在體外高效的標(biāo)記HUC-MSCs, HUC-MSCs在氣管內(nèi)2d、肺組織4d后消失。結(jié)論：HUC-MSCs可以修復(fù)BO急性期小鼠的AEC。我們推測(cè),可能是與其免疫調(diào)節(jié)作用相關(guān)；亦或是抑制了體內(nèi)某種炎癥因子的表達(dá),干預(yù)了受損部位的微環(huán)境。
【關(guān)鍵詞】：BO DA 小鼠 模型 HUC-MSCs BO AEC 炎癥因子
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R725.6
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-16
• 參考文獻(xiàn)15-16
• 第一部分 急性閉塞性細(xì)支氣管炎小鼠模型的建立16-26
• 前言16
• 1 材料與方法16-19
• 2 結(jié)果19-23
• 3 討論23-25
• 參考文獻(xiàn)25-26
• 第二部分 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞干預(yù)急性閉塞性細(xì)支氣管炎小鼠的療效及機(jī)制26-42
• 前言26
• 1 材料與方法26-32
• 2 結(jié)果32-38
• 3 討論38-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 全文總結(jié)42-43
• 文獻(xiàn)綜述43-49
• 參考文獻(xiàn)47-49
• 致謝49-50
• 攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果及發(fā)表的學(xué)位論文50

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