本文關鍵詞：NKX2-5基因突變與室間隔缺損及房間隔缺損關系研究

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【摘要】：研究背景及目的室間隔缺損(Ventricular Septal Defect,VSD)是最常見的先天性心臟病,總發(fā)病率占先天性心臟病的20%左右,房間隔缺損(Atrial Septal Defect,ASD)的發(fā)病率僅次于室間隔缺損,總發(fā)病率占6-10%。若心房或心室水平持續(xù)存在左向右分流,將引起不可逆的肺動脈高壓(pulmonary hypertension)、心房心室的擴大、心功能衰竭、艾森曼格綜合征(Eisenmenger's Syndrome)、心律失常,甚至猝死,給社會及家庭帶來嚴重的經濟負擔。NKX2-5是人類心臟發(fā)育早期最早表達的轉錄因子,其突變將導致先天性心臟病及房室傳導阻滯的發(fā)生。本研究以先天性室間隔缺損及房間隔缺損患兒為研究對象,以排除先天性心臟病的外科手術病人為對照,篩查NKX2-5基因的突變及單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNP),為NKX2-5在室間隔缺損及房間隔缺損中的相關性提供理論依據(jù)。研究方法根據(jù)Genbank數(shù)據(jù)庫中NKX2-5序列,發(fā)現(xiàn)NKX2-5除已驗證的3個亞型之外,有一電腦預測亞型,為驗證該亞型在心肌組織中是否表達,取兩名在蘇州大學附屬兒童醫(yī)院心胸外科行心臟外科手術患兒的病變心肌組織,用Trizol法提取RNA、逆轉錄聚合酶鏈式反應(Reverse Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)驗證該亞型的表達。同時取抽在蘇州大學附屬兒童醫(yī)院心臟內科或心臟外科就診的單純室間隔缺損患兒50名,單純房間隔缺損患兒51名以及50名排除先天性心臟病、血液系統(tǒng)疾病及染色體疾病的外科患兒的外周靜脈血,用DNA試劑盒提取DNA,PCR擴增,DNA測序儀直接測序NKKX2-5外顯子序列,與NCBI中NKX2-5基因序列進行比對,并與對照組比較,觀察該基因突變情況。結果1.預測亞型在兩個患兒心肌組織中無表達。2.在一例單純性房間隔缺損患兒中發(fā)現(xiàn)一罕見SNP突變位點(c.104GT,rs376790353),該突變位點在其他患兒及對照組中均未發(fā)現(xiàn)。3.在51例單純房間隔缺損,50例單純室間隔缺損及50例對照樣本的外顯子中,均找到已報道的三個常見SNP(c.63GC,rs2277923,c.606AG,rs3729753及c.195GC,rs3131915),在實驗組及對照組中基因型分布及等位基因頻率無統(tǒng)計學差異(P0.05)。4.在一例房間隔缺損的患兒外顯子2(NM_004387.3)中還發(fā)現(xiàn)了一處同義突變(c.460CG,p.Ser264 Ser)。結論1.預測亞型在本研究樣本患兒的心肌組織中無表達。2.SNP位點rs376790353可能與房間隔缺損的發(fā)生有關,而SNP位點rs2277923,rs3729753及rs3131915可能跟房間隔缺損及室間隔缺損無相關性。
【關鍵詞】：先天性心臟病 房間隔缺損 室間隔缺損 NKX2-5 基因突變 單核苷酸多態(tài)性
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R725.4
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-11
• 第一部分：NKX2-5 預測亞型的驗證11-16
• 1. 材料11-12
• 2. 實驗方法12-13
• 3. 實驗步驟13-15
• 4. 結果15
• 5. 結論15-16
• 第二部分：VSD及ASD患兒NKX2-5 基因的突變篩查16-27
• 1. 材料16-17
• 2. 實驗方法17-18
• 3. 實驗步驟18-21
• 4. 實驗結果21-27
• 討論27-32
• 結論32-33
• 實驗的局限性33-34
• 參考文獻34-38
• 綜述38-50
• 參考文獻43-50
• 英文縮略詞表50-52
• 在校期間成果52-53
• 致謝53-54

【參考文獻】

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1 石琳,申阿東,李曉峰,柏松,關曉蕾,李仲智;中國先天性心臟病Nkx2.5基因突變篩查及關聯(lián)研究[J];首都醫(yī)科大學學報;2005年05期

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本文編號：772292