本文關(guān)鍵詞：CD40siRNA對(duì)EAM大鼠外周血IL-22、IL-6及TNF-α表達(dá)的影響

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【摘要】：研究背景：病毒性心肌炎(viral myocarditis, VMC)是指病毒感染引起心肌細(xì)胞變性、壞死,間質(zhì)中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維滲出的疾病,是引起青少年突然死亡的重要原因,心內(nèi)膜心肌活組織檢查是確診的金標(biāo)準(zhǔn)[1]。目前心肌炎的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,但有確鑿證據(jù)表明,病毒感染后,心臟抗原表位暴露引起的自身免疫反應(yīng),是心肌炎重要的發(fā)病機(jī)制,其中T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)發(fā)揮重要作用。實(shí)驗(yàn)性自身免疫性心肌炎(experimental autoimmune myocarditis, EAM)大鼠是目前研究心肌炎自身免疫反應(yīng)機(jī)制公認(rèn)的動(dòng)物模型[2]。白細(xì)胞介素-22(interleukin 22, IL-22)主要由新近發(fā)現(xiàn)的CD4+T細(xì)胞亞型Th22細(xì)胞分泌。IL-22根據(jù)其參與免疫反應(yīng)的途徑不同,發(fā)揮促炎或抗炎作用。IL-22可作為促炎性細(xì)胞因子,增加滑膜成纖維細(xì)胞中單核細(xì)胞趨化蛋白的表達(dá),促進(jìn)結(jié)腸上皮下成纖維細(xì)胞外周炎性因子和趨化因子的聚集。在心肌組織,IL-22可下調(diào)EAM大鼠免疫細(xì)胞1mRNA和蛋白的表達(dá),減輕心肌組織炎癥,發(fā)揮抗炎作用。IL-22在VMC小鼠中明顯升高[3],應(yīng)用Anti-IL-22Ab治療VMC小鼠可降低IL-22的表達(dá)、增加心肌組織中炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)。Hanawa等將IL-22-Ig融合基因作用于EAM大鼠,可上調(diào)IL-22的表達(dá),減輕EAM大鼠心肌炎癥[4]。RNA干擾(RNA interference, RNAi)技術(shù)通過siRNA(small interfering RNA, siRNA)參與真核細(xì)胞抵抗感染的防御機(jī)制,在轉(zhuǎn)錄水平,調(diào)節(jié)任何目的基因的表達(dá)。我們前期應(yīng)用CD40小分子干擾RNA(CD40siRNA)下調(diào)EAM大鼠CD40基因的表達(dá),阻斷CD40/CD40L共刺激通道,證實(shí)CD40siRNA可減輕EAM大鼠心肌炎癥15-6],但其具體作用機(jī)制尚未完全闡明。目的：探討IL-22在EAM大鼠中的變化規(guī)律及CD40siRNA對(duì)EAM大鼠外周血IL-22、IL-6及TNF-a表達(dá)的影響及其臨床意義。研究方法：將48只6-8周雄性Lewis大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、EAM組、CD40siRNA組及siRNA組。免疫第0天與第7天,對(duì)正常對(duì)照組大鼠雙后肢足墊區(qū)注射PBS緩沖液0.2m1,對(duì)EAM組、CD40siRNA組和siRNA組大鼠雙后肢足墊區(qū)注射已混勻的豬心肌球蛋白與完全弗氏佐劑的混懸液0.2m1。免疫第7天,對(duì)CD40siRNA組、siRNA組大鼠尾靜脈分別注射CD40siRNA慢病毒表達(dá)載與siRNA慢病毒表達(dá)載體0.2m1,病毒量為5×107TU。在免疫第21天,每組處死6只大鼠,免疫第56天,處死剩余全部大鼠,光鏡與電鏡下觀察各組大鼠心肌組織病理及超微結(jié)構(gòu)的改變,計(jì)算心肌組織病理積分,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清cTnT、 BNP、IL-22、IL-6及TNF-α的濃度。結(jié)果：1.EAM組、CD40siRNA組和siRNA組大鼠心肌炎發(fā)病率均為100%,至免疫第56天,CD40siRNA組和正常對(duì)照組大鼠無(wú)死亡,EAM組與siRNA組大鼠分別死亡2只,各組大鼠死亡率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2.在急性期與慢性期,CD40siRNA組大鼠心肌組織病理積分均較EAM組顯著減(P均0.05),siRNA組與EAM組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均0.05)。CD40siRNA組慢性期心肌組織病理積分較急性期明顯降低(P0.05), EAM組急性期與慢性期無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3.在急性期與慢性期,CD40siRNA組大鼠外周血cTnT和BNP的水平均較EAM組明顯降低(P0.05),siRNA組與EAM組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05)。CD40siRNA組和EAM組大鼠慢性期cTnT和BNP的水平均較急性期顯著降低(P均0.05)。EAM組大鼠外周血cTnT和BNP的水平與心肌組織病理積分之間均存在顯著的正相關(guān)關(guān)系(r=0.732,r=0.869,P均0.05)。4.在急性期與慢性期,CD40siRNA組、EAM組及siRNA組大鼠外周血IL-22的水平均較正常對(duì)照組顯著升高(P均0.05),CD40siRNA組均明顯高于EAM組(P均0.05),siRNA組與EAM組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。CD40siRNA組和EAM組大鼠慢性期IL-22的水平均較急性期顯著升高(P均0.05)。5.在急性期與慢性期,CD40siRNA組、EAM組及siRNA組大鼠外周血IL-6和TNF-a的水平均較正常對(duì)照組明顯升高(P均0.05),CD40siRNA組IL-6和TNF-a的水平均明顯低于EAM組(P均0.05),siRNA組與EAM組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。CD40siRNA組和EAM組大鼠慢性期IL-6、TNF-α的水平均較急性期顯著降低(P均.05)。6.EAM組大鼠外周血IL-22的水平與心肌組織病理積分、cTnT及BNP之間不存在相關(guān)關(guān)系(r=0.104, r=-0.507, r=-0.039, P均0.05),IL-6、TNF-α的水平與心肌組織病理積分、cTnT及BNP之間均呈正相關(guān)關(guān)系(IL-6:r=0.764, r=0.962, r=0.810; TNF-α:r=0.697, r=0.946, r=0.750, P均0.05)。結(jié)論：1.CD40siRNA能顯著減輕EAM大鼠心肌炎癥,降低心肌損傷程度,改善心功能,對(duì)EAM大鼠有治療作用。2.EAM組大鼠外周血IL-22的表達(dá)明顯升高,其慢性期水平顯著高于急性期。3.EAM組大鼠外周血IL-6與TNF-α的表達(dá)均明顯升高,且其水平與心肌組織病理積分、cTnT及BNP呈正相關(guān)關(guān)系,可作為評(píng)估心肌炎嚴(yán)重程度的臨床指標(biāo)。4.CD40siRNA對(duì)EAM大鼠的治療作用可能與上調(diào)IL-22的表達(dá),下調(diào)IL-6和TNF-α的水平有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：自身免疫性心肌炎 大鼠 CD40小分子干擾RNA 肌鈣蛋白T 腦鈉肽 白細(xì)胞介素-22 白細(xì)胞介素-6 腫瘤壞死因子-α
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R725.4
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 符號(hào)說明12-13
• 前言13-16
• 材料與方法16-19
• 結(jié)果19-21
• 討論21-26
• 結(jié)論26-27
• 附圖表27-32
• 參考文獻(xiàn)32-36
• 綜述36-48
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 致謝48-49
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文49-50
• 附件50

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文編號(hào)：735742