本文關(guān)鍵詞：葉酸代謝途徑相關(guān)基因多態(tài)性與先天性心臟病的關(guān)聯(lián)研究

  更多相關(guān)文章： 先天性心臟病 高分辨率熔解曲線 亞甲基四氫葉酸還原酶 基因多態(tài)性

【摘要】：研究目的 1.以先天性心臟�。╟ongenital heart disease，CHD）的患兒與健康對照兒童為研究對象。建立高分辨率熔解曲線法（high resolution melting，HRM）檢測胱硫醚β-合酶（Cystathionine beta synthase，CBS）基因多態(tài)性的最佳反應(yīng)體系和條件，并對其與先天性心臟病的關(guān)系進(jìn)行初步探討。 2.利用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（polymerase chain reaction andrestriction fragment length polymorphism analysis，PCR-RFLP）法檢測兩組人群5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶（Methylenetetrabydrofolate reductase，MTHFR）基因的若干單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（Single nucleotide polymorphism，SNP），探討其多態(tài)性與單純性先天性心臟病的發(fā)生是否存在關(guān)聯(lián)，為先天性心臟病的病因研究提供進(jìn)一步的理論基礎(chǔ)。 研究方法 1.選擇流行病學(xué)病例對照研究方法，選取患有先天性心臟�。ǚ蔷C合征型）的患兒150例作為病例組；以150例性別年齡均具有可比性的正常兒童作為對照組。 2.提取研究人群靜脈血基因組DNA，對CBS基因，建立HRM檢測突變的條件并進(jìn)行SNP分型。 3.對由HRM方法檢測的CBS基因型進(jìn)行測序驗(yàn)證。 4.對CBS基因SNP基因型及等位基因進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，初步探討其與先心病的關(guān)聯(lián)。 5.通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（PCR-RFLP）檢測MTHFR基因的三個(gè)SNP位點(diǎn)：MTHFR C677T（rs1801133）、A1298C（rs1801131）、G1793A（rs2274976）的多態(tài)性。 6.應(yīng)用Hardy-weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)、x2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)、相對危險(xiǎn)度分析等方法計(jì)算MTHFR在病例組和對照組各基因型及等位基因頻率的差異，并對三個(gè)位點(diǎn)的不同基因型組合進(jìn)行分析。探討三個(gè)位點(diǎn)的單獨(dú)效應(yīng)及聯(lián)合作用對于CHD發(fā)生的意義及其大小。 結(jié)果 1.對照組人群的各位點(diǎn)基因型符合Hardy-weinberg遺傳平衡。 2. HRM檢測CBS基因目的片段的最佳退火溫度為62℃，qPCR-HRM最佳反應(yīng)體系為20μl，引物濃度為0.2μmol/L，Mg2+為2.5μmol/L，模板DNA為60ng。在優(yōu)化的體系條件下篩選出的突變型樣本經(jīng)測序驗(yàn)證與實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。 3.利用HRM檢測出CBS基因SNP位點(diǎn)（rs75616587），但其突變基因型和等位基因在病例和對照組中分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 4.677位CC、CT、TT基因型頻率病例組為20.67%、52.00%、27.33%；對照組為39.33%、44.00%、16.67%。與野生型純合子CC比較，雜合子CT個(gè)體患先心病的風(fēng)險(xiǎn)較高（OR＝2.249，95%CI:1.305-3.877，Ρ=0.003），突變純合子TT個(gè)體患先心病的風(fēng)險(xiǎn)是野生型的3.121倍（95%CI:1.612-6.043，，P=0.001）。攜帶突變等位基因T個(gè)體的患病風(fēng)險(xiǎn)是野生型C的1.813倍（95%CI:1.310-2.508，P=0.000）。1298位基因型AA、AC頻率病例組為76.00%、24.00%，對照組為87.33%、12.67%，未發(fā)現(xiàn)基因型CC。攜帶雜合子AC個(gè)體的患病風(fēng)險(xiǎn)是野生純合子AA的的2.177倍（95%CI:1.183-4.077，P=0.011）。攜帶突變等位基因C個(gè)體的患病風(fēng)險(xiǎn)是野生型A的2.017倍（95%CI:1.128-3.604，P=0.016）。1793位GG、GA基因型頻率病例組為91.33%、8.67%；對照組為86.00%、14.00%，未發(fā)現(xiàn)基因型AA。兩組突變雜合子GA與野生純合子GG頻率分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.145），等位基因G、A分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ρ=0.158）。組合基因型分析顯示677與1298位點(diǎn)，1298與1793位點(diǎn)組合較單獨(dú)作用時(shí)對先心病的致病力增加，可能對先心病存在聯(lián)合作用。 結(jié)論 1.利用高分辨率熔解曲線檢測CBS基因片段SNP位點(diǎn)特異性良好，是CBS基因篩選突變的有效方法。 2.未發(fā)現(xiàn)CBS基因SNP位點(diǎn)rs75616587多態(tài)性與先天性心臟病存在統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)。 3. MTHFR C677T、MTHFR A1298C突變是先心病的危險(xiǎn)因素。 4. MTHFR C677T與MTHFR A1298C，MTHFR A1298C與MTHFR G1793A對先心病存在聯(lián)合作用
【關(guān)鍵詞】：先天性心臟病 高分辨率熔解曲線 亞甲基四氫葉酸還原酶 基因多態(tài)性
【學(xué)位授予單位】：泰山醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R725.4
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-11
• 符號說明11-12
• 前言12-16
• 第一部分16-33
• 研究對象與方法18-24
• 結(jié)果24-26
• 討論26-28
• 結(jié)論28-29
• 附圖29-31
• 參考文獻(xiàn)31-33
• 第二部分33-64
• 研究對象與方法36-46
• 結(jié)果46-51
• 討論51-56
• 結(jié)論56-57
• 附圖57-58
• 參考文獻(xiàn)58-64
• 綜述64-72
• 參考文獻(xiàn)69-72
• 致謝72-75
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文75

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1 蔣曉蓉,仇萬山,徐嘉昌,馮麗;幾種先天性心臟病患兒一氧化氮水平觀察[J];中國全科醫(yī)學(xué);2000年03期

2 李閣,蘇芬;先天性心臟病妊娠時(shí)的護(hù)理[J];實(shí)用醫(yī)技;2000年12期

3 ;先天性心臟病何時(shí)手術(shù)最好[J];醫(yī)藥世界;2000年05期

4 席時(shí)珍;張麗婭;陳原玲;;先天性心臟病搶救1例成功報(bào)告[J];工企醫(yī)刊;2000年04期

5 王亞利,劉曉芹,閆迎軍,郝桂蘭;先天性心臟病患兒手術(shù)后行為問題探討[J];濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年02期

6 鐘秋安;先天性心臟病的病因研究進(jìn)展[J];中國兒童保健雜志;2003年04期

7 王麗娟,劉喜梅,劉冰,胡永梅,房小惠;嬰幼兒先天性心臟病圍術(shù)期護(hù)理體會[J];解放軍護(hù)理雜志;2003年07期

8 陳力,沈?qū)W遠(yuǎn),湯文,洪斌;基層醫(yī)院開展先天性心臟病診治體會(附14例)[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2003年05期

9 崔崇瑜;常見先天性心臟病的診斷與治療[J];實(shí)用診斷與治療雜志;2003年06期

10 張艷華;先天性心臟病手術(shù)患兒及家長的健康教育[J];天津護(hù)理;2004年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 龔方戚;汪偉;;先天性心臟病介入治療進(jìn)展[A];2008年浙江省兒科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

2 秦玉明;曹黎明;錢建華;趙乃錚;龔曉平;朱善良;周凱;楊士偉;王鳳鳴;王大為;;介入治療兒童先天性心臟病586例隨訪[A];第六屆江浙滬兒科學(xué)術(shù)會議暨兒科學(xué)基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展學(xué)術(shù)班論文匯編[C];2009年

3 儲晨;桂永浩;嚴(yán)英榴;;先天性心臟病圍孕期危險(xiǎn)因素的前瞻性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十五次全國兒科學(xué)術(shù)大會論文匯編（上冊）[C];2010年

4 嚴(yán)秋萍;汪yN;;先天性心臟病患兒家屬的醫(yī)學(xué)應(yīng)對方式的調(diào)查分析[A];全國兒科護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2005年

5 魏文瓊;;呼吸理療在嬰幼兒先天性心臟病術(shù)后的運(yùn)用[A];全國第四屆重癥監(jiān)護(hù)護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會議論文匯編[C];2007年

6 ;先天性心臟病的遺傳[A];中國優(yōu)生優(yōu)育協(xié)會第四屆全國學(xué)術(shù)論文報(bào)告會暨基因科學(xué)高峰論壇論文專輯[C];2008年

7 李榮;彭璐婷;曹佳;陳銀花;趙衛(wèi)華;李曉南;莫緒明;;先天性心臟病住院患兒營養(yǎng)不良和風(fēng)險(xiǎn)評估的調(diào)查[A];2012年江浙滬兒科學(xué)術(shù)年會暨浙江省醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會學(xué)術(shù)年會、兒內(nèi)科疾病診治新進(jìn)展國家級學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2012年

8 張生光;俞靜;陳愛;楊歌;汪榮金;;彩色多普勒超聲診斷228例嬰兒先天性心臟病[A];2004年浙江省超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2004年

9 蔡君兒;鐘祖愛;;2例成人先天性心臟病合并燒傷的護(hù)理體會[A];浙江省第十六屆燒傷外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

10 瞿中成;杜永松;何正華;;先天性心臟病118例手術(shù)臨床分析[A];貴州省醫(yī)學(xué)會小兒外科分會第四屆第二次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 云南心血管病醫(yī)院;早診早治先天性心臟病[N];云南日報(bào);2005年

2 本報(bào)記者 陳志迅 通訊員 鄭月星 陳琪偉;先天性心臟病應(yīng)早診斷早治療[N];湛江日報(bào);2008年

3 劉文勇邋特約記者 鐘友國;10名患先天性心臟病軍人子女救治免單[N];解放軍報(bào);2008年

4 ;兩名先天性心臟病患者 斬?cái)嗖「鵞N];雅安日報(bào);2010年

5 許永杰;孩子先天性心臟病能盡早發(fā)現(xiàn)嗎？[N];華夏時(shí)報(bào);2001年

6 湖南省兒童醫(yī)院心胸外科主治醫(yī)師 馬樂龍;先天性心臟病發(fā)病的原因是什么？ 可以預(yù)防嗎？[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2002年

7 銀春林 專家指導(dǎo) 何建新;先天性心臟病宜早治[N];家庭醫(yī)生報(bào);2009年

8 記者 袁英;市領(lǐng)導(dǎo)探望鼓勵(lì)被救助先天性心臟病患兒[N];盤錦日報(bào);2007年

9 本報(bào)記者 尼瑪潘多　曉勇;大愛佑童心[N];西藏日報(bào)(漢);2011年

10 記者 曹繼軍 顏維琦;國內(nèi)首個(gè)小兒專病專委會成立[N];光明日報(bào);2012年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 許晶;基因區(qū)域多態(tài)性與先天性心臟病發(fā)病關(guān)系研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

2 黃燦;綜合征型先天性心臟病與拷貝數(shù)變異遺傳學(xué)研究[D];中南大學(xué);2012年

3 楊學(xué)勇;先天性心臟病的預(yù)防[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

4 羅成;先天性心臟病伴肢體畸形相關(guān)基因突變分析和拷貝數(shù)變異研究[D];中南大學(xué);2012年

5 陳光明;先天性心臟病患兒的免疫和甲狀旁腺功能狀態(tài)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2002年

6 王首正;先天性心臟病患兒中染色體22q11.2拷貝數(shù)變異的研究[D];中南大學(xué);2013年

7 張坤;先天性心臟病兒童心理學(xué)特點(diǎn)及其不同治療方式對患兒心理行為影響的研究[D];山東大學(xué);2010年

8 呂小東;先天性心臟病相關(guān)基因研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

9 胡喜紅;64排螺旋CT評價(jià)兒童先天性心臟病的方法學(xué)及應(yīng)用研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

10 葉明;基質(zhì)金屬蛋白酶及抑制劑在先天性心臟病圍術(shù)期的表達(dá)及干預(yù)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 于俠;先天性心臟病患兒血管緊張素轉(zhuǎn)換酶基因多態(tài)性的研究[D];吉林大學(xué);2004年

2 馬超;廣西117例先天性心臟病家系調(diào)查與分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

3 俞勁;28772例先天性心臟病構(gòu)成比的研究[D];浙江大學(xué);2009年

4 溫巧蓮;先天性心臟病和先天性雙側(cè)輸精管缺如的分子遺傳學(xué)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

5 王冀;新疆5-14歲維吾爾族與柯爾克孜族兒童先天性心臟病患病率調(diào)查[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2012年

6 倪志紅;授權(quán)教育在兒童先天性心臟病術(shù)后照顧者中的應(yīng)用研究[D];蘇州大學(xué);2012年

7 張靜;葉酸代謝相關(guān)酶基因多態(tài)性與先天性心臟病的風(fēng)險(xiǎn)關(guān)聯(lián)[D];中南大學(xué);2007年

8 馮青青;廣西先天性心臟病家系調(diào)查研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

9 金婷;骨橋蛋白在先天性心臟病心肌中的表達(dá)及相關(guān)研究[D];中南大學(xué);2010年

10 郭彥孜;先天性心臟病危險(xiǎn)因素的病例對照初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

本文編號：734376