本文關(guān)鍵詞：嬰幼兒關(guān)節(jié)軟骨細胞的體外培養(yǎng)和表型研究及逆向誘導(dǎo)分化初探

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【摘要】：一、嬰幼兒關(guān)節(jié)軟骨細胞體外培養(yǎng)及其鑒定 目的探索體外培養(yǎng)嬰幼兒關(guān)節(jié)軟骨細胞的方法，并對其細胞表型進行鑒定，為下一步逆向誘導(dǎo)分化提供細胞。 方法取多指患兒指間關(guān)節(jié)的軟骨，經(jīng)過機械剪切、胰酶、膠原酶的消化獲得細胞后，用1640培養(yǎng)基進行體外培養(yǎng)。 倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)、生長情況，繪制關(guān)節(jié)軟骨細胞生長曲線；透射電子顯微鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu)； Alcian blue染色、蕃紅花“O”-亮綠染色檢驗細胞產(chǎn)生的蛋白聚糖；阿利新蘭法檢測不同代次細胞蛋白聚糖含量；免疫組織化學(xué)染色檢測細胞分泌的II型膠原。 結(jié)果嬰幼兒關(guān)節(jié)軟骨細胞貼壁生長。原代細胞生長緩慢，細胞10~15天長滿六孔培養(yǎng)板的一孔，進行傳代；第1代、2代、3代等細胞生長旺盛，3~5天長滿40ml培養(yǎng)瓶的一瓶；細胞在第12代、13代出現(xiàn)凋亡表現(xiàn)。 關(guān)節(jié)軟骨細胞的生長曲線呈倒“S”型，透射電子顯微鏡觀察到細胞具有軟骨細胞共性。Alcian blue染色陽性，蕃紅花“O”-亮綠染色陽性；第1、2、3代關(guān)節(jié)軟骨細胞蛋白聚糖含量逐漸增高，第5、6代后細胞蛋白聚糖含量逐漸減低；免疫組織化學(xué)染色證實細胞分泌II型膠原。 結(jié)論在體外成功建立了嬰幼兒關(guān)節(jié)軟骨細胞的培養(yǎng)方法，經(jīng)多種鑒定證實所培養(yǎng)出的細胞是關(guān)節(jié)軟骨細胞。 二、嬰幼兒關(guān)節(jié)軟骨細胞采用iPS技術(shù)逆向誘導(dǎo)分化的初步研究 目的嘗試采用iPS技術(shù)誘導(dǎo)嬰幼兒關(guān)節(jié)軟骨細胞逆向分化為多能分化狀態(tài)。 方法先培養(yǎng)胎鼠肌細胞并用絲裂霉素處理后做滋養(yǎng)層細胞，將體外培養(yǎng)的第1代、第2代人關(guān)節(jié)軟骨細胞分別用含4種轉(zhuǎn)錄因子的逆轉(zhuǎn)錄病毒進行感染，再轉(zhuǎn)至滋養(yǎng)層細胞進行培養(yǎng)。 結(jié)果第1代或第2代關(guān)節(jié)軟骨細胞經(jīng)逆向誘導(dǎo)培養(yǎng)一月后，由原來的梭形轉(zhuǎn)變?yōu)槎噙呅危士寺由L，但是此后細胞未見生長，逐漸死亡，此實驗未進行下去，現(xiàn)在相關(guān)研究人員還在不斷摸索中。 結(jié)論采用iPS技術(shù)誘導(dǎo)人關(guān)節(jié)軟骨細胞存在一定的技術(shù)障礙。
【關(guān)鍵詞】：人關(guān)節(jié)軟骨細胞 體外培養(yǎng) 鑒定 iPS 逆向誘導(dǎo)
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R726.8
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-11
• 第一部分：小兒關(guān)節(jié)軟骨細胞體外分離培養(yǎng)及鑒定11-19
• 材料與方法11-14
• 結(jié)果14-16
• 討論16-19
• 第二部分：小兒關(guān)節(jié)軟骨細胞采用 IPS 技術(shù)逆向誘導(dǎo)的初步研究19-23
• 材料與方法19-20
• 結(jié)果20
• 討論20-23
• 參考文獻23-31
• 附圖31-38
• 綜述38-48
• 參考文獻42-48
• 中英文雙解縮略詞表48-49
• 攻讀碩士期間公開發(fā)表的論文49-50
• 致謝50-52

【參考文獻】

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本文編號：714232