發(fā)布時(shí)間：2017-08-02 15:33

  本文關(guān)鍵詞：過(guò)表達(dá)ICAM-1間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀腺炎作用的機(jī)制研究

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【摘要】：目的:1.建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀腺炎(Experimental autoimmune thyroiditis,EAT)模型,給予不同MSC治療,通過(guò)檢測(cè)各種指標(biāo),觀察各組MSC對(duì)EAT的療效。2.用氯甲基苯甲酰氨(CM-Dil)染色各組MSC,觀察輸注的MSC在體內(nèi)的分布。3.提取各組脾細(xì)胞蛋白,western blot檢測(cè)各組ERK及P38通路改變,探討MSC發(fā)揮作用的機(jī)制。方法:1.訂購(gòu)6周齡雌性C57BL/6小鼠60只,于動(dòng)物中心喂養(yǎng)1周后,建立自身免疫性甲狀腺炎(EAT)模型。共分為6組,每組10只,除正常組外,其他各組均于第0天和第14天用豬甲狀腺免疫球蛋白(Porcine Thyroglobulin,PTg)分別與完全弗氏佐劑(Freund’s adjuvant complete,CFA)及非完全弗式佐劑(Freund’s adjuvant incomplete,IFA)等體積充分混勻乳化后,皮下多點(diǎn)免疫小鼠,建立EAT模型;治療組于第0天和第14天給予3×105MSC/只相應(yīng)細(xì)胞治療,正常組及模型組尾靜脈注射等量生理鹽水作為對(duì)照,第28天稱(chēng)取各組小鼠體重,摘眼球取血,測(cè)血清TT3、TT4、TSH、TGAb、TPOAb、TMAb水平,并分離甲狀腺組織,行HE染色,觀察各組甲狀腺破壞嚴(yán)重程度,取各組小鼠脾臟,并稱(chēng)重,計(jì)算脾臟指數(shù)(脾臟重量mg/體重g),碾碎脾臟,裂解紅細(xì)胞、洗滌,得到單個(gè)核細(xì)胞,加入TRIzol試劑,提取RNA,逆轉(zhuǎn)錄成為c DNA后進(jìn)行q-PCR檢測(cè)炎性因子IL-4、IL-10、IL-17、INF-γ的表達(dá)水平;另外,取模型小鼠的脾細(xì)胞,體外與各組MSC共培養(yǎng),檢測(cè)上述炎性因子的表達(dá)水平。2.訂購(gòu)6周齡雌性C57BL/6小鼠60只,運(yùn)用豬甲狀腺球蛋白及弗式佐劑建立模型后,于第0天及第14天給予相應(yīng)治療,治療前用CM-Dil染色各組MSC細(xì)胞,尾靜脈注射3×105個(gè)MSC/只相應(yīng)細(xì)胞,第28天收集標(biāo)本,麻醉小鼠,心臟灌流,取甲狀腺及肺臟組織,制作冰凍切片,熒光顯微鏡下觀察各組MSC在甲狀腺及肺臟的分布。3.取上述的各組小鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞5×106,加入細(xì)胞裂解液80ul,提取胞漿蛋白,BCA法測(cè)蛋白濃度,western blot檢測(cè)各組MAPK信號(hào)通路中的P38及ERK通路有無(wú)改變。結(jié)果:1.血清甲狀腺相關(guān)激素及抗體檢測(cè)結(jié)果顯示,模型組TPOAb、TGAb、TMAb、TSH均較正常組高,治療組較模型組均有所下降,但C3H10T1/2-ICAM-1/MSC組較C3H10T1/2-MIGR1/MSC組下降明顯,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),模型組TT4的水平較正常組低,治療組均較模型組有所上升,C3H10T1/2-ICAM-1/MSC組較C3H10T1/2-MIGR1/MSC組上升明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。甲狀腺HE染色結(jié)果顯示模型組甲狀腺濾泡破壞,大小不均,上皮細(xì)胞增生,炎性細(xì)胞浸潤(rùn),C3H10T1/2-ICAM-1/MSC組及原代MSC組甲狀腺破壞明顯減輕,上皮增生減少,炎性浸潤(rùn)減少,其他治療組炎性浸潤(rùn)的改善不明顯。模型組脾臟指數(shù)明顯高于正常組(P0.01),C3H10T1/2-ICAM-1/MSC組較C3H10T1/2-MIGR1/MSC組脾臟指數(shù)下降,(P0.01),而其他治療組脾臟指數(shù)改善不明顯。體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)q-PCR檢測(cè)炎癥因子,模型組IL-10及IL-4水平均較正常組低,IL-17及INF-γ均較正常高,C3H10T1/2-ICAM-1/MSC組較C3H10T1/2-MIGR1/MSC組IL-10及IL-4的水平明顯增加,IL-17及INF-γ的分泌明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.MSC歸巢研究顯示C3H10T1/2-ICAM-1/MSC歸巢到甲狀腺最明顯,而原代MSC在肺部滯留最多。3.western blot顯示模型組ERK及P38較正常組磷酸化增強(qiáng),而C3H10T1/2-ICAM-1/MSC組ERK及P38去磷酸化最明顯。結(jié)論:1.給予C3H10T1/2-ICAM-1/MSC治療組,無(wú)論從病理、血清抗體指標(biāo)、炎性因子的改善、脾臟指數(shù)下降情況均說(shuō)明C3H10T1/2-ICAM-1/MSC組療效最佳。2.MSC歸巢實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,C3H10T1/2-ICAM-1/MSC治療組歸巢到甲狀腺最多。故ICAM-1促進(jìn)MSC的體內(nèi)遷移能力。3.C3H10T1/2-ICAM-1/MSC通過(guò)使小鼠免疫細(xì)胞內(nèi)P38、ERK的去磷酸化,調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞內(nèi)的相關(guān)基因的表達(dá),從而影響免疫細(xì)胞的分化、增殖、遷移等。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)胞間粘附分子-1 間充質(zhì)干細(xì)胞 實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀腺炎 歸巢MAPK 信號(hào)通路 western blot
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R725.8
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明11-13
• 前言13-16
• 研究現(xiàn)狀、成果13-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、建立EAT小鼠模型，給予各組MSC治療，并觀察療效16-36
• 1.1 對(duì)象和方法16-24
• 1.1.1 主要試劑和儀器16-17
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物17
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞17
• 1.1.4 相關(guān)引物序列17-18
• 1.1.5 方法18-23
• 1.1.6 統(tǒng)計(jì)分析23-24
• 1.2 結(jié)果24-33
• 1.2.1 血清中TT3、TT4、TSH、TPOAb、TMAb、TGAb水平24-29
• 1.2.2 甲狀腺組織病理比較29-30
• 1.2.3 q-PCR檢測(cè)炎性因子水平30-31
• 1.2.4 脾臟指數(shù)31-32
• 1.2.5 體外共培養(yǎng)，，q-PCR檢測(cè)炎性因子32-33
• 1.3 討論33-35
• 1.4 小結(jié)35-36
• 二、ICAM-1 分子促進(jìn)MSC歸巢36-41
• 2.1 對(duì)象和方法36-37
• 2.1.1 主要試劑及儀器36
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物36
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞36-37
• 2.1.4 方法37
• 2.2 結(jié)果37-39
• 2.3 討論39-40
• 2.4 小結(jié)40-41
• 三、ICAM-1 通過(guò)抑制MAPK通路發(fā)揮治療作用41-47
• 3.1 對(duì)象和方法41-44
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)主要試劑及儀器41-42
• 3.1.2 主要試劑的配制42
• 3.1.3 方法42-44
• 3.1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理44
• 3.2 結(jié)果44-45
• 3.3 討論45-46
• 3.4 小結(jié)46-47
• 結(jié)論47-48
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明51-52
• 綜述 MSC與多種疾病的關(guān)系及其臨床應(yīng)用前景52-60
• 綜述參考文獻(xiàn)55-60
• 致謝60

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 劉強(qiáng),彭莉,杜藝,李宓,賈寧,鄒和群;新型人工肝單純白蛋白透析治療肝衰竭的臨床研究[J];中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué);2005年10期

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本文編號(hào)：609996