本文關鍵詞：兒童B系急性淋巴細胞性白血病CD133-2的生物學特性及其分子機制初步研究

  更多相關文章： 兒童B系急性淋巴細胞白血病 CD133-2 白血病干細胞 TGF-β信號通路分子

【摘要】：目的：探究CD133-2在兒童B系急性淋巴細胞白血病（B-ALL）作為干細胞標志物表達的意義及其作用的分子機制，從而明確CD133-2是否為兒童B-ALL的白血病干細胞（LSC）標志，也為進一步研究兒童B-ALL的分子發(fā)病機制奠定實驗基礎。 方法： 1、流式細胞術檢測初診和復發(fā)兒童B-ALL（共38例，包含初診34例，復發(fā)4例）骨髓單個核細胞（BM-MNCs）CD133-2的表達（IgG1-PE為同型對照），并采集5例CD133-2陽性表達(比例≥20%)的B-ALL患兒（初診4例，復發(fā)1例）BM-MNCs，免疫磁珠分選法（MACS）分選純化出CD133-2+CD19+、CD133-2+CD19-、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-四組亞群細胞，體外甲基纖維素半固體集落培養(yǎng)（包含SCF、GM-CSF、G-CSF、IL-3、IL-6、EPO等成分），觀察各亞群集落形成能力，并對培養(yǎng)后形成的集落細胞瑞氏-姬薩姆染色做形態(tài)學鑒定。 2、6例CD133-2表達陽性的B-ALL（初診4例，復發(fā)2例）患兒BM-MNCs中MACS分選純化出CD133-2+CD19+、CD133-2+CD19-、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-四組亞群細胞，以CD133-2+CD19-亞群細胞為實驗組，CD133-2-CD19+亞群細胞為對照組，采用Real-time PCR法和基因芯片試劑盒，分析與TGF-β信號通路相關的84個基因分子在以上兩群細胞中的表達差異。 結果： 1、流式細胞儀檢測結果顯示：38例兒童B-ALL中，， CD133-2的陽性表達率為60.5%（比例≥20%為表達陽性）。其中5例兒童B-ALL的BM-MNCs經MACS分選純化后，體外甲基纖維素半固體集落培養(yǎng)14天，CD133-2+CD19-細胞群在第5天出現紅系集落，第7天后出現混合集落，第10天時集落較第5天增長10倍，增長速度明顯加快，第12天時集落狀態(tài)良好，第14天后集落未再增加。對生長狀態(tài)良好的集落細胞瑞氏-姬薩姆染色，CD133-2+CD19-形成的集落中可見紅系、粒系、巨噬和單核系細胞。其他亞群形成集落不明顯。比較各亞群細胞集落形成方面差異具有顯著的統(tǒng)計學意義（P0.001）。 2、Real-time PCR檢測結果顯示：初診兒童B-ALL中CD133-2+CD19-細胞亞群與TGFβ信號通路下游DCN、IGFBP3、THBS1、Smad6基因的上調有關，與SERPINE1基因的下調有關；復發(fā)組中CD133-2+CD19-細胞亞群與TGFβ信號通路下游TGFβ1、LTBP1基因的上調有關，與IGFBP3、 SERPINE1基因的下調有關。 結論： 1、體外半固體集落培養(yǎng)表明兒童B-ALL中CD133-2+CD19-細胞亞群具有多向分化能力，結合我們前期體外懸浮培養(yǎng)結果提示其具有長期增殖能力，說明此亞群具備了LSC的特性，由此CD133-2+CD19-亞群可能是兒童B-ALL來源的LSC免疫表型標志。 2、DCN、IGFBP3、THBS1、Smad6、SERPINE1以及TGFβ1、LTBP1、IGFBP3、SERPINE1等TGFβ信號通路的轉錄分子分別參與了初診和復發(fā)B-ALL患兒CD133-2+CD19-亞群細胞生物學特性的調控，這些分子的異常表達可能與兒童B-ALL的發(fā)病或復發(fā)有關。
【關鍵詞】：兒童B系急性淋巴細胞白血病 CD133-2 白血病干細胞 TGF-β信號通路分子
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R733.71
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言及基金資助9-11
• 第一部分 兒童 B 系急性淋巴細胞性白血病 CD133-2 的生物學特性11-34
• 一、材料和方法11-19
• 二、結果19-26
• 三、討論26-30
• 四、結論30
• 參考文獻30-34
• 第二部分 兒童 B-ALL 中 TGFΒ信號通路分子對 CD133-2~+CD19~-亞群細胞的調控機制初步研究34-51
• 一、材料與方法34-39
• 二、結果39-43
• 三、討論43-47
• 四、結論47
• 參考文獻47-51
• 全文結論51-52
• 綜述52-64
• 參考文獻61-64
• 中英文對照縮略詞表64-66
• 攻讀學位期間公開發(fā)表的論文66-67
• 致謝67-68

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本文編號：609529