本文關(guān)鍵詞：CITED2基因突變及甲基化與先天性心臟病關(guān)系的研究

  更多相關(guān)文章： CITED2 先天性心臟病 基因突變 甲基化

【摘要】：目的：探討先天性心臟病中CITED2基因突變的致病機制即對轉(zhuǎn)錄因子HIF-1α的表達的影響，，同時檢測先天性心臟病患兒CITED2基因啟動子區(qū)CpG島的甲基化情況,并進一步研究CITED2基因的轉(zhuǎn)錄水平的改變，探討其與先天性心臟病的發(fā)生的相關(guān)性。 方法：將成功構(gòu)建的CITED2（c.573-578del6）突變重組質(zhì)粒及CITED2野生型質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染到HepG2及H9C2細(xì)胞中，置于低氧培養(yǎng)條件下培養(yǎng)24小時，分別提取RNA，檢測HIF-1α的mRNA的表達差異。同時48小時后提取蛋白，檢測HIF-1α蛋白的表達差異。收集31例先天性心臟病患兒及2例意外死亡兒童的右心耳組織，分別提取組織基因組DNA，采用亞硫酸氫鹽修飾試劑盒對基因組DNA進行亞硫酸氫鹽的修飾后并保存。利用生物信息學(xué)軟件分析篩選其中兩段，分別采用亞硫酸氫鹽修飾結(jié)合測序法（BSP法）及甲基化特異性PCR法（MSP法）進行甲基化的檢測。提取甲基化組及未甲基化組RNA，并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，運用實時熒光定量PCR法檢測兩組CITED2基因mRNA水平的表達差異。 結(jié)果： 1.HepG2及H9C2細(xì)胞中均存在，HIF-1α的mRNA的表達：野生組與空載體組相比，表達量明顯降低（P0.05）；突變組表達量高于野生組(P0.05)；而空載體組與未轉(zhuǎn)染組相比，未見明顯差異。 2.HepG2及H9C2細(xì)胞中均存在，HIF-1α蛋白的表達：野生組與空載體組相比，表達量明顯降低(P0.05)；突變組均高于野生組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；空載體組與未轉(zhuǎn)染組相比，未見明顯差異。 3.采用BSP法檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在克隆測序成功的12例先天性心臟病心肌組織中，有10例發(fā)現(xiàn)存在甲基化,甲基化陽性率為83%（10/12）。 4.采用MSP法檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在19例先天性心臟病心肌組織中發(fā)現(xiàn)16例存在甲基化，甲基化陽性率為84%（16/19）。 5.對照組甲基化檢測陽性率均為0%。 6.實時熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示甲基化組與對照組相比 CITED2基因mRNA表達水平明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： 1.CITED2能反饋的抑制HIF-1α的表達。 2.CITED2突變后使得CITED2對HIF-1α的負(fù)反饋抑制作用減弱。 3. CITED2基因突變引起的HIF-1α的過表達可能是促進先天性心臟病的發(fā)生的因素之一。 4.先天性心臟病中存在CITED2基因啟動子區(qū)CpG島的異常甲基化的改變,且CITED2基因的異常甲基化下調(diào)了其mRNA的表達水平。 5.CITED2基因異常甲基化的改變可能是促進人類先天性心臟病發(fā)生的又一因素。
【關(guān)鍵詞】：CITED2 先天性心臟病 基因突變 甲基化
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R725.4
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 第一部分 CITED2 基因突變對轉(zhuǎn)錄因子 HIF-1α表達的影響13-22
• 1 材料與方法13-18
• 2 結(jié)果18-19
• 3 討論19-21
• 4 小結(jié)21-22
• 第二部分 CITED2 基因 CpG 島甲基化與先天性心臟病的關(guān)系22-28
• 1 材料與方法22-25
• 2 結(jié)果25-26
• 3 討論26-27
• 4 小結(jié)27-28
• 全文圖片28-35
• 全文總結(jié)35-36
• 參考文獻36-39
• 文獻綜述39-45
• 參考文獻43-45
• 致謝45-46
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄46-47

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本文編號：595453