本文關(guān)鍵詞：微小RNA在膿毒癥患兒外周血的表達(dá)的初步研究

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【摘要】：背景：膿毒癥是指由感染導(dǎo)致的全身性炎癥反應(yīng)綜合征（SIRS），病情往往進(jìn)展迅速，且患病人數(shù)逐年增加。如果不能采取有效措施控制早期持續(xù)的SIRS，尤其在兒童膿毒癥患者，可發(fā)展為膿毒性休克、多器官功能障礙綜合征（MODS），已成為兒科重癥監(jiān)護(hù)病房（PICU）危重患兒主要死亡原因，同時(shí)增加了患兒家庭的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。盡管目前膿毒癥的診斷和治療取得了很大進(jìn)展，但在過去的幾年里致死率仍然較高。所以對膿毒癥的早期診斷和治療顯得尤為重要。但是膿毒癥早期的臨床表現(xiàn)和非感染因素引起SIRS非常相似，很難鑒別。傳統(tǒng)的反應(yīng)感染的指標(biāo)如體溫、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞沉降率等的敏感性和特異性均難以滿足臨床需要。C反應(yīng)蛋白（CRP）、降鈣素原（PCT）等指標(biāo)也不能有效的把由非感染因素引起的SIRS與膿毒癥及其嚴(yán)重程度鑒別開，有必要找到一種理想的膿毒癥生物標(biāo)志物進(jìn)行早期診斷、判斷預(yù)后，并能夠區(qū)分感染以及非感染引起的SIRS。 微小RNA（miRNA）是一類小的非編碼RNA，廣泛參與調(diào)控細(xì)胞的生長、發(fā)育、分化及凋亡等各個(gè)環(huán)節(jié)，并與生理狀態(tài)的改變以及疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。既往研究表明，不同疾病人群的血清、血漿或者組織中miRNA表達(dá)不同，近年來已經(jīng)相繼在許多疾�。ㄈ缒[瘤、急性心肌梗死、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病、腎病、炎癥性腸病、藥物性肝損傷等）都證實(shí)了血清或血漿中的某種miRNA水平可以作為疾病的生物學(xué)標(biāo)志物。miRNA作為轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)基因，與膿毒癥相關(guān)信號途徑和免疫功能調(diào)控相關(guān)。本研究就是觀察在小兒膿毒癥的外周血中和炎癥有關(guān)的miRNA的表達(dá)水平。 目的：建立從血漿和外周血CD14+單核細(xì)胞（MC）中提取循環(huán)miRNA的方法。比較在小兒膿毒癥、其它非感染因素引起的SIRS、健康兒童三組人群中表達(dá)差異的循環(huán)miRNA水平。比較小兒膿毒癥表達(dá)差異的循環(huán)miRNA與其它炎性指標(biāo)TNF-α、IL-10水平的相關(guān)性。尋找敏感性和特異性較CRP、PCT更好的早期診斷小兒膿毒癥的生物學(xué)標(biāo)志物。 方法：選取2012年8月~2013年03月在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬深圳市兒童醫(yī)院PICU住院的35例膿毒癥患兒，男23例，女12例，平均年齡1.82±1.17歲。根據(jù)患兒病情嚴(yán)重程度分為一般膿毒癥（19例）和嚴(yán)重膿毒癥（16例）。選取同期住院的15例外科手術(shù)后患兒作為SIRS組及15例來醫(yī)院體檢的同齡健康兒童作為對照組。選擇與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)的6個(gè)miRNA （miR-21、miR-125b、miR-132、miR-146a、miR-155、miR-223）為目的miRNA，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)，，檢測并比較其在小兒膿毒癥患者、非感染SIRS病人和健康對照人群血漿和外周血CD14+MC中的表達(dá)水平。利用流式CBA技術(shù)檢測血漿中TNF-α和IL-10的水平。使用ROC曲線下面積（AUC）比較差異表達(dá)的miRNA與臨床廣泛開展的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)CRP、PCT的靈敏度和特異度。 結(jié)果：各組年齡、性別比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。本研究成功從外周血標(biāo)本的血漿及CD14+MC中提取出miRNA。相對于SIRS組和對照組，膿毒癥患兒血漿中miR146a、miR-223及外周血CD14+MC中miR-146a的表達(dá)上調(diào)，外周血CD14+MC中miR-223表達(dá)下調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。SIRS組血漿TNF-α水平較對照組升高；一般膿毒癥組患兒血漿中TNF-α水平較嚴(yán)重膿毒癥患兒升高。膿毒癥組血漿IL-10、IL-10/TNF-α水平較SIRS組和健康對照組均升高。IL-10、IL-10/TNF-α與CD14+MC中miR-223水平呈負(fù)相關(guān)；與血漿和CD14+MC中miR-146a水平呈正相關(guān)。CD14+MC中miR-223、血漿中miR-146a的AUC（0.750和0.813）均大于CRP（0.555）和PCT（0.683）。前者的靈敏度為62.86%，特異度為80%；后者的靈敏度為51.43%，特異度為100%。 結(jié)論：利用qRT-PCR方法能夠成功提取檢測外周血血漿和CD14+MC中的miRNA。相對于SIRS及健康兒童，膿毒癥患兒血漿和CD14+MC中miR-146a、miR-223差異表達(dá)，有可能作為小兒膿毒癥早期診斷的分子標(biāo)志物。
【關(guān)鍵詞】：膿毒癥 外周血 兒童 微小RNA
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R720.597
【目錄】：

• 符號說明5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-16
• 第一部分 微小 RNA 在膿毒癥患兒血漿和 CD14+單核細(xì)胞中的表達(dá)16-30
• 第一章 微小 RNA 在膿毒癥患兒血漿中的表達(dá)16-24
• 1 材料和方法16-21
• 2 結(jié)果21-23
• 3 小結(jié)23-24
• 第二章 微小 RNA 在膿毒癥患兒外周血 CD14+單核細(xì)胞中的表達(dá)24-30
• 1 材料和方法24-26
• 2 結(jié)果26-28
• 3 小結(jié)28-30
• 第二部分 TNF-α和 IL-10 在膿毒癥患兒血漿中的表達(dá)水平30-35
• 1 材料和方法30-32
• 2 結(jié)果32-34
• 3 小結(jié)34-35
• 討論35-39
• 全文小結(jié)39-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 文獻(xiàn)綜述42-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 致謝52-53
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文和參加科研情況53-54

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 楊燕文;王瑩;李璧如;趙醴;錢娟;任宏;;兒童嚴(yán)重膿毒癥死亡危險(xiǎn)因素分析[J];臨床兒科雜志;2009年01期

2 劉娟;錢素云;;小兒膿毒癥和嚴(yán)重膿毒癥發(fā)病情況單中心調(diào)查[J];臨床兒科雜志;2010年01期

本文編號：539574