發(fā)布時(shí)間：2017-07-14 03:20

  本文關(guān)鍵詞：P47phox介導(dǎo)氧暴露后單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)活性氧簇產(chǎn)生的機(jī)制

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【摘要】：目的:觀察32周以下早產(chǎn)兒不同濃度氧暴露后,外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMCs)內(nèi)p47phox與活性氧簇產(chǎn)生的變化;以及運(yùn)用NADPH氧化酶抑制劑二苯基碘(DPI)和夾竹桃麻素(apocynin)聯(lián)合高濃度氧處理PBMCs后,p47phox與活性氧簇水平的改變,來(lái)探討NADPH氧化酶亞單位p47phox調(diào)節(jié)PBMCs內(nèi)活性氧簇升高的機(jī)制,為臨床中減輕早產(chǎn)兒氧化應(yīng)激損傷尋找新的靶點(diǎn)。方法:實(shí)驗(yàn)分兩部分進(jìn)行。第一,以臨床中32周以下早產(chǎn)兒為對(duì)象,將其中入院時(shí)診斷為新生兒呼吸窘迫綜合征(Neonatal respiratory distress syndrom,NRDS)且需要吸氧的患兒作為氧暴露組,根據(jù)吸氧濃度不同分為三組:FiO230%為低濃度吸氧組、FiO2在(30-40)%為中濃度吸氧組、FiO240%為高濃度吸氧組,每組患兒各10例,其中男18例,女12例。胎齡(28-32)周,體重(1350±138)g,組間患兒胎齡、出生體重?zé)o顯著性差異。同期選擇10例32周以下暫未吸氧的早產(chǎn)兒作為空氣組,其中男5例,女5例。胎齡(30-32)周,體重(1347±116)g。氧暴露組與空氣組間患兒胎齡、出生體重?zé)o顯著性差異,具有可比性。該實(shí)驗(yàn)通過(guò)四川醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn),所有患兒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前均征得家屬同意并簽署知情同意書(shū)�？諝饨M及氧暴露組患兒不同濃度氧療48小時(shí)后,均經(jīng)橈動(dòng)脈采血3ml。分離取得PBMCs及血清標(biāo)本用于檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)第二部分,出生后即入我科的32周以下早產(chǎn)兒,尚未吸氧前,征得家屬同意并簽署知情同意書(shū)后經(jīng)橈動(dòng)脈采血2 ml,經(jīng)Ficoll密度梯度離心法,分離純化PBMCs,以PBMCs為對(duì)象,將其分為以下四組:常規(guī)培養(yǎng)組,置于37℃、50ml/l的co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h;高氧處理組,按3l/min通入950ml/l的o2與50ml/l的co2混合氣體,10min后,立即用封口膠密封培養(yǎng)瓶,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h;高氧聯(lián)合dpi處理組與高氧聯(lián)合夾竹桃麻素(apocynin)處理組根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道和預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,分別選擇5μmol/l、100μmol/l處理細(xì)胞后再按上述方法建立高氧損傷模型并培養(yǎng)48h;高氧及相應(yīng)處理組培養(yǎng)48h后,均用cys-1數(shù)字式測(cè)氧儀檢測(cè)培養(yǎng)瓶中o2的濃度,將低于900ml/lo2的標(biāo)本棄去。離心采集pbmcs和培養(yǎng)液作為標(biāo)本。將兩部分實(shí)驗(yàn)中所獲得的標(biāo)本,均采用mitosoxred標(biāo)記結(jié)合激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)pbmcs內(nèi)ros的生成量、硫代巴比妥酸比色法檢測(cè)血清/培養(yǎng)液中丙二醛含量、免疫熒光檢測(cè)p47phox在細(xì)胞內(nèi)的定位及移位率、westernblot檢測(cè)p47phox的蛋白表達(dá)量。結(jié)果:第一,臨床樣本中,隨著早產(chǎn)兒吸氧濃度的升高,pbmcs內(nèi)活性氧與血清丙二醛明顯升高,p47phox由包質(zhì)向包膜移位的細(xì)胞數(shù)增多,p47phox的移位率明顯增加,p47phox的蛋白表達(dá)量也隨之增加(p均0.05);第二,培養(yǎng)pbmcs各組中,pbmcs經(jīng)高氧及相應(yīng)藥物處理48h后,與高氧處理組相比,其余三組活性氧和丙二醛明顯減少,p47phox移位率與表達(dá)量也顯著降低(p均0.05);與常規(guī)培養(yǎng)組相比,高氧聯(lián)合dpi處理組及高氧聯(lián)合apocynin處理組中ros、丙二醛、p47phox移位率與表達(dá)量并無(wú)顯著差異(p均0.05)。結(jié)論:早產(chǎn)兒和pbmcs經(jīng)氧暴露后,p47phox可增加向胞膜移位,上調(diào)其表達(dá)量,這與ros和丙二醛增加是一致的。而對(duì)pbmcs運(yùn)用nadph氧化酶抑制劑dpi和apocynin處理后,p47phox移位率、表達(dá)量出現(xiàn)減少,此時(shí),ros和丙二醛也相應(yīng)減少。這提示p47phox可增加向胞膜移位,上調(diào)其表達(dá)量來(lái)調(diào)節(jié)PBMCs內(nèi)活性氧簇的升高,而DPI和apocynin能通過(guò)降低p47phox移位與表達(dá)來(lái)減少高氧誘導(dǎo)的PBMCs內(nèi)活性氧簇的產(chǎn)生。
【關(guān)鍵詞】：早產(chǎn)兒 外周血單個(gè)核細(xì)胞 高氧暴露 p47phox 二苯基碘 夾竹桃麻素
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R722.6
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-27
• 結(jié)果27-31
• 附圖31-35
• 討論35-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-50
• 英文縮寫(xiě)及中英文對(duì)照50-51
• 致謝51-52
• P47phox 介導(dǎo)活性氧產(chǎn)生與疾病的關(guān)系 綜述52-64
• 參考文獻(xiàn)60-64
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表和撰寫(xiě)的論文64-65

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 金鷹,唐玫,李國(guó)明;實(shí)用淋巴細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)[J];激光生物學(xué)報(bào);2000年01期

2 盧美燕;董文斌;;氧化應(yīng)激在高體積分?jǐn)?shù)氧肺損傷中的作用[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2012年22期

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本文編號(hào)：539479