本文關(guān)鍵詞：長(zhǎng)鏈非編碼RNAs在低出生體重大鼠腎單位發(fā)育障礙中的作用探討

  更多相關(guān)文章： 長(zhǎng)鏈非編碼RNAs 低出生體重 腎單位發(fā)育障礙 絲裂原活化蛋白激酶

【摘要】：背景與目的:近年來(lái),長(zhǎng)鏈非編碼RNAs(long noncoding RNAs,lncRNAs)調(diào)節(jié)多種重大疾病發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制研究已經(jīng)逐漸成為各個(gè)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。lncRNAs在器官發(fā)育和疾病進(jìn)程中發(fā)揮著重要的基因調(diào)控功能,但是lncRNAs在腎臟發(fā)育過(guò)程中作用的研究罕有報(bào)道。本研究通過(guò)lncRNA生物芯片技術(shù)篩選低出生體重和正常對(duì)照大鼠腎臟組織差異表達(dá)的lncRNAs,探討lncRNAs在低出生體重大鼠腎單位發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)規(guī)律,分析lncRNAs在低出生體重大鼠腎單位發(fā)育障礙中的作用。方法:選擇育齡期健康雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠孕期常規(guī)飼料(22%蛋白)喂養(yǎng),建立正常出生體重(Control)組對(duì)照大鼠模型,孕期全程低蛋白飼料(6%蛋白)喂養(yǎng),建立低出生體重(low birth weight,LBW)大鼠模型。選取雄性新生大鼠作為研究對(duì)象。隨機(jī)選擇兩組10日齡雄鼠各3只,通過(guò)lncRNA生物芯片技術(shù)篩選出兩組大鼠腎臟差異表達(dá)的lncRNAs;進(jìn)一步選出其中差異高表達(dá)的lncRNAs 3個(gè)和差異低表達(dá)的13個(gè)經(jīng)qReal-time PCR技術(shù)在1天、10天雄鼠腎臟進(jìn)行驗(yàn)證,同時(shí)觀察其在肝、肺、腦組織中的表達(dá);Western Blot檢測(cè)腎臟組織MAPK10(絲裂原激活蛋白激酶10)、ERK1/2(細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2)、p38MAPK(p38絲裂原活化蛋白激酶)、磷酸化p38MAPK(磷酸化p38絲裂原活化蛋白激酶)蛋白的表達(dá)量;利用酸消化法觀察兩組大鼠生后10天腎單位數(shù)目的變化;TUNEL法檢測(cè)兩組大鼠生后1天、10天腎臟組織中的腎小球細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果:(1)LBW組大鼠生后1天、10天體重和腎重均明顯低于Control組(P0.05)。(2)LBW組大鼠生后10天腎單位數(shù)目較Control組明顯減少(P=0.001),腎單位數(shù)目與出生體重呈正相關(guān)(r=0.718,P=0.009)。(3)LBW組大鼠生后1天、10天腎小球凋亡細(xì)胞較control組明顯增多。(4)基因芯片篩選出差異表達(dá)的lncrnas42個(gè)(高表達(dá)17個(gè),低表達(dá)25個(gè))、mrnas129個(gè)(高表達(dá)41個(gè),低表達(dá)88個(gè))。(5)差異表達(dá)的lncrnas和mrnas相關(guān)性分析顯示,6個(gè)差異表達(dá)的lncrnas與mapk10mrna表達(dá)密切相關(guān),其中tcons_00031111表達(dá)與mapk10mrna表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.951,p=0.004)。(6)qreal-timepcr驗(yàn)證差異表達(dá)的16個(gè)lncrnas,有11個(gè)lncrnas的表達(dá)結(jié)果與芯片實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本一致;且大部分經(jīng)驗(yàn)證的lncrnas在腎單位發(fā)育期隨著大鼠日齡的增加其表達(dá)逐漸上調(diào)。(7)經(jīng)驗(yàn)證的16個(gè)lncrnas在各臟器中均有表達(dá),在腎臟組織中顯著高表達(dá)的lncrnas3個(gè)(tcons_00031111、tcons_00134056和tcons_00014139)。在腎臟組織高表達(dá)、兩組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異且與芯片結(jié)果一致的lncrna僅有tcons_00031111(p0.05)。(8)腎臟組織中tcons_00031111的表達(dá)與腎單位數(shù)目呈正相關(guān)(r=0.888,p0.001)。(9)生后1天、10天,lbw組大鼠腎臟組織erk1/2蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化(p0.05);lbw組大鼠生后1天腎臟組織mapk10蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化,生后10天腎臟組織mapk10蛋白表達(dá)有所上調(diào),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);生后1天、10天,lbw組大鼠腎臟組織磷酸化p38mapk蛋白表達(dá)量較control組均顯著上調(diào)(p=0.004,p=0.025)。(10)生后10天大鼠腎臟中磷酸化p38mapk蛋白表達(dá)與tcons_00031111的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.851,p0.001)。結(jié)論:(1)lbw組大鼠腎臟組織中存在lncrnas和mrnas差異表達(dá)譜,經(jīng)驗(yàn)證的大部分lncrnas在腎單位發(fā)育期隨著大鼠日齡的增加其表達(dá)逐漸上調(diào)。(2)lncrnatcons_00031111在正常腎臟組織中高表達(dá),在lbw大鼠腎臟顯著下調(diào),且其在腎臟組織中的表達(dá)與腎單位數(shù)目呈顯著正相關(guān),提示lncrnatcons_00031111可能與lbw大鼠腎單位發(fā)育障礙有關(guān)。(3)lncrnatcons_00031111的表達(dá)與腎臟組織中磷酸化p38mapk的蛋白表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān),提示lncrnatcons_00031111可能通過(guò)p38mapk信號(hào)通路在腎單位發(fā)育障礙中發(fā)揮作用。(4)lncrnas可能是lbw大鼠腎單位發(fā)育障礙新的分子機(jī)制之一,而lncrnatcons_00031111可作為腎單位發(fā)育程度的參考指標(biāo)和發(fā)育障礙的研究靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：長(zhǎng)鏈非編碼RNAs 低出生體重 腎單位發(fā)育障礙 絲裂原活化蛋白激酶
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R726.9
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-24
• 結(jié)果24-41
• 討論41-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 綜述51-59
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 英漢雙解縮略詞59-60
• 攻讀學(xué)位期間公開(kāi)發(fā)表的論文60-61
• 本課題資助基金項(xiàng)目61-62
• 攻讀學(xué)位期間所獲獎(jiǎng)項(xiàng)62-63
• 致謝63-64

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本文編號(hào)：535450