本文關(guān)鍵詞：CD133-2在兒童B系急性淋巴細胞性白血病發(fā)病中的作用及其機制初步研究

  更多相關(guān)文章： CD133-2 兒童B系急性淋巴細胞白血病 預(yù)后 白血病干細胞 信號通路

【摘要】：目的：探究CD133-2在兒童B系急性淋巴細胞白血病（B-ALL）發(fā)病中的表達規(guī)律、CD133-2+白血病細胞的生物學(xué)特性和調(diào)控該群細胞的信號通路相關(guān)分子，為鑒定CD133-2是否為兒童B-ALL白血病干細胞（LSC）的一項標志和闡明其調(diào)控的分子機制奠定實驗基礎(chǔ)。 方法： 1、流式細胞術(shù)檢測42例初診和復(fù)發(fā)的B-ALL患兒及10例對照組兒童的骨髓（BM）單個核細胞（MNCs）的CD133-1、CD133-2表達，并觀察其與臨床預(yù)后指標的相關(guān)性。 2、選取6例CD133-2陽性表達(表達比例≥20%)的B-ALL患兒的新鮮骨髓標本，用磁珠分選（MACS）分離純化出CD133-2+CD19+、CD133-2+CD19-、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-四組亞群細胞，進行體外含血清懸浮培養(yǎng)，觀察其增殖能力，RT-PCR檢測融合基因的表達。對其中3例磁珠分選的四組亞群細胞行甲基纖維素半固體培養(yǎng)，觀察其集落形成能力。 3、采用實時定量PCR技術(shù)對3例B-ALL患兒的CD133-2+CD19-、CD133-2+CD19+、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-細胞亞群分別進行干細胞相關(guān)信號通路的基因表達篩查，并重點分析CD133-2+CD19-細胞群的相關(guān)信號通路分子。 結(jié)果： 1、流式細胞術(shù)結(jié)果顯示：CD133-1、CD133-2在B-ALL中的表達水平明顯高于正常對照骨髓中的表達水平，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.01）；在B-ALL中，CD133-2的陽性表達率和表達水平均較CD133-1高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；兒童B-ALL中CD133-2的表達與患兒發(fā)病時的性別、年齡、初診白細胞數(shù)、危險等級、融合基因、細胞遺傳學(xué)改變及完全緩解率等臨床預(yù)后指標均無相關(guān)性。 2、體外懸浮培養(yǎng)結(jié)果顯示：CD133-2+CD19-細胞群在培養(yǎng)中呈倍數(shù)增長趨勢，在第6周時擴增了（117.9±72.51）倍（有10倍到226倍的擴增），，而其他三組細胞未出現(xiàn)明顯的增殖，差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.01）。一例初診時E2A/PBX1融合基因陽性的患兒，其分選后的細胞亞群經(jīng)懸浮培養(yǎng)4周后，RT-PCR檢測到E2A/PBX1基因陽性仍存在于CD133-2+CD19-細胞群。 3、體外半固體集落培養(yǎng)結(jié)果顯示：CD133-2+CD19-細胞群在培養(yǎng)后第7天時混合集落（細胞數(shù)≥40）增長到（55±5.57）個，培養(yǎng)到第14天時達到（215±18.68）個；CD133-2+CD19+細胞在培養(yǎng)第7天時混合集落為（11±2.65）個，之后未再增多。而其他兩組細胞培養(yǎng)2周均未出現(xiàn)集落。各群細胞差異具有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。 4、實時定量PCR檢測結(jié)果顯示： CD133-2+CD19-細胞群為實驗組與CD133-2+CD19+、CD133-2-CD19+、CD133-2-CD19-三組對照組細胞相比，基因表達差異主要分布于Wnt、TGFβ、FGF、Hedgehog（Hh）及Notch信號通路，主要涉及TGF-β、Wnt和FGF信號通路中的BMPR1B、SMAD6、SMAD9、RGMA、TCF7L2、FZD8及FGFR2等分子。 結(jié)論： 1、兒童B-ALL中CD133-2異常高表達，它與患兒初診時的性別、年齡、初診白細胞數(shù)、危險等級、融合基因、細胞遺傳學(xué)改變及完全緩解率等臨床預(yù)后指標均無相關(guān)性。 2、兒童B-ALL中CD133-2+CD19-細胞群體外培養(yǎng)顯示，其具有長期增殖和多向分化能力，具備LSC生物學(xué)特性，可能是兒童B-ALL的LSC表型標志。 3、兒童B-ALL的CD133-2+CD19-細胞群的調(diào)控可能與Wnt、TGFβ、FGF、Hedgehog（Hh）及Notch信號通路的異常密切相關(guān)，主要涉及TGF-β、Wnt和FGF信號通路中的BMPR1B、SMAD6、SMAD9、RGMA、TCF7L2、FZD8及FGFR2等分子。
【關(guān)鍵詞】：CD133-2 兒童B系急性淋巴細胞白血病 預(yù)后 白血病干細胞 信號通路
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R733.71
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-7
• 目錄7-8
• 序言8-10
• 第一部分 CD133-2 在兒童 B 系急性淋巴細胞性白血病的表達及其生物學(xué)特性10-31
• 一、材料和方法10-18
• 二、結(jié)果18-25
• 三、討論25-28
• 四、結(jié)論28
• 參考文獻28-31
• 第二部分 兒童 B 系急性淋巴細胞性白血病 CD133-2+白血病細胞的信號通路初步研究31-46
• 一、材料和方法31-35
• 二、結(jié)果35-39
• 三、討論39-43
• 四、結(jié)論43
• 參考文獻43-46
• 全文結(jié)論46-47
• 綜述47-56
• 參考文獻52-56
• 中英文對照縮略詞表56-58
• 攻讀學(xué)位期間公開發(fā)表的論文58-59
• 致謝59-60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 姚晨姣;范自力;;環(huán)氧化酶-2和血管內(nèi)皮生長因子在急性白血病中的表達及意義[J];中國全科醫(yī)學(xué);2008年17期

2 唐文玨;劉壯;劉紅艷;韋紅英;雷永紅;張鵬;;CD133在兒童急性淋巴細胞白血病中的表達及意義[J];山東醫(yī)藥;2011年01期

3 呂鴻雁;張金巧;王金鎧;;急性髓性白血病VEGF、bFGF的表達及意義[J];山東醫(yī)藥;2011年01期

本文編號：530983