本文關(guān)鍵詞：孟德爾遺傳易感分枝桿菌病篩查方法的優(yōu)化與應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分孟德爾遺傳易感分枝桿菌病篩查方法的優(yōu)化目的:改進(jìn)IL-12/IFN-g軸功能完整性檢測(cè)試驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)IFN-gR1和IL-12Rb1蛋白表達(dá)的試驗(yàn),提高其準(zhǔn)確性、敏感性和穩(wěn)定性,縮短試驗(yàn)時(shí)間。方法:1.取正常人全血分為4組:(1)無刺激組;(2)BCG單獨(dú)刺激組;(3)BCG與IL-12p70聯(lián)合刺激組;(4)BCG與IFN-g聯(lián)合刺激組。分別培養(yǎng)不同時(shí)間(24h,36h,48h)后,Q-RT-PCR檢測(cè)IFN-g和IL-12B的m RNA表達(dá)水平。不同來源的正常人全血標(biāo)本重復(fù)3次,選取最適培養(yǎng)時(shí)間。2.提取正常人全血PBMC加入不同濃度的PHA(7.5mg/ml,10mg/ml),刺激培養(yǎng)不同時(shí)間(48h,72h,88h)后流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)IFN-gR1和IL-12Rb1的蛋白表達(dá)。不同來源的正常人全血標(biāo)本重復(fù)3次,選取最適刺激濃度與培養(yǎng)時(shí)間。1.IL-12/IFN-g軸功能完整性試驗(yàn)的最佳刺激培養(yǎng)時(shí)間為36h。2.FCM檢測(cè)IFN-gR1和IL-12Rb1蛋白表達(dá)的PHA刺激最佳濃度為10mg/ml,最佳刺激培養(yǎng)時(shí)間為72h。結(jié)果:結(jié)論:本研究在前期建立Q-RT-PCR檢測(cè)IL-12/IFN-g軸功能完整性和FCM檢測(cè)IFN-gR1及IL-12Rb1蛋白表達(dá)的試驗(yàn)基礎(chǔ)上,進(jìn)一步優(yōu)化,選取最佳刺激條件和細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間,提高了試驗(yàn)的準(zhǔn)確性,靈敏性和穩(wěn)定性,縮短了為臨床提供信息的時(shí)間。第二部分孟德爾遺傳易感分枝桿菌病篩查方法的應(yīng)用目的:對(duì)臨床23例新診斷的孟德爾遺傳易感分枝桿菌病(Mendelian susceptibility to mycobacterial disease,MSMD)疑似病例進(jìn)行篩查試驗(yàn);并隨訪篩查方法優(yōu)化前結(jié)果異常的病例;對(duì)篩查試驗(yàn)結(jié)果異�；純旱南嚓P(guān)基因進(jìn)行測(cè)序分析。方法:1.Q-RT-PCR檢測(cè)23例疑似MSMD患兒的IL-12/IFN-g軸的功能完整性,FCM檢測(cè)IFN-gR1和IL-12Rb1蛋白的表達(dá)。2.對(duì)MSMD篩查方法優(yōu)化前的試驗(yàn)結(jié)果異常但未確診的患兒進(jìn)行隨訪,取得家長同意后進(jìn)行復(fù)查。3.收集整理篩查試驗(yàn)優(yōu)化后試驗(yàn)結(jié)果異常的9例患兒,和優(yōu)化前未確診的高度疑似MSMD的1例患兒的臨床資料,結(jié)合篩查試驗(yàn)結(jié)果,對(duì)相關(guān)基因進(jìn)行測(cè)序分析。結(jié)果:1.對(duì)臨床23例新診斷MSMD疑似患兒進(jìn)行Q-RT-PCR檢測(cè)IL-12/IFN-g軸功能完整性及FCM檢測(cè)IFN-gR1和IL-12Rb1蛋白表達(dá)試驗(yàn)(篩查試驗(yàn)),結(jié)果異常的患兒有9例,5男4女,平均起病年齡5.41m,其中6例有BCG接種后不良反應(yīng),另外3例中1例未接種BCG,2例無BCG接種不良反應(yīng),此3例均是女孩,有反復(fù)發(fā)熱或感染及外胚層發(fā)育不良表型。2.MSMD篩查方法優(yōu)化前,篩查結(jié)果異常但未確診的患兒有6例,其中1例死亡,1例失訪,其余4例恢復(fù)較好,有1例前來復(fù)查,功能完整性檢測(cè)和蛋白表達(dá)試驗(yàn)結(jié)果均正常。3.對(duì)新篩查的23例MSMD疑似病例中9例篩查試驗(yàn)結(jié)果異常的患兒,以及隨訪病例中死亡的1例患兒(高度懷疑MSMD)共10例進(jìn)行測(cè)序分析,發(fā)現(xiàn)NEMO基因新型錯(cuò)義突變1例,CYBB基因、IL12RB1基因和IL12B基因的大片段缺失各1例。結(jié)論:MSMD篩查方法優(yōu)化后,可更快速為臨床疑似MSMD患兒提供診斷依據(jù),試驗(yàn)結(jié)果更加穩(wěn)定,準(zhǔn)確。臨床疑似MSMD的患兒,90%以BCG的感染為首發(fā)癥狀,約40%有IL-12/IFN-g軸的功能損傷,但其中仍有60%未找到致病基因,提示可能存在更多的致病基因未被發(fā)現(xiàn)。第三部分NEMO基因新突變致少汗型外胚層發(fā)育不良伴免疫缺陷病1例目的:探討1例少汗型外胚層發(fā)育不良伴免疫缺陷(EDA-ID)患兒的臨床特征、基因突變,提高臨床醫(yī)生對(duì)本病的早期認(rèn)識(shí)。方法:1.收集整理患兒臨床資料,根據(jù)其臨床表現(xiàn)及家族史,常規(guī)免疫學(xué)篩查除外常見原發(fā)性免疫缺陷病(PID)。2.Q-RT-PCR在m RNA水平檢測(cè)患兒與對(duì)照IL-12/IFN-γ通路的完整性,并對(duì)患兒及其家系的NEMO基因進(jìn)行測(cè)序分析。結(jié)果:患兒男,1m9d,反復(fù)發(fā)熱,皮膚蒼白干燥,頭發(fā)稀疏,前額輕微突出,無牙胚發(fā)育,有真菌和BCG感染。全血經(jīng)BCG與IFN-γ聯(lián)合刺激后,與單獨(dú)的BCG刺激比較,患兒IL12B的m RNA表達(dá)水平降低(P(27)0.05),而健康對(duì)照組IL12B表達(dá)水平明顯增加�；驕y(cè)序分析發(fā)現(xiàn)患兒NEMO基因第10外顯子一個(gè)半合錯(cuò)義突變c.1241T(29)A,p.V414D,其母親與二姨為相同位點(diǎn)的雜合突變。結(jié)論:反復(fù)發(fā)熱伴BCG感染的男性患兒合并皮膚蒼白無汗,毛發(fā)稀疏,無牙等外胚層發(fā)育不良表型時(shí),應(yīng)考慮NEMO基因突變,母系家族色素失禁的病史有助于診斷,結(jié)合IL-12/IFN-γ軸的功能完整性檢測(cè)和基因分析,可以早期診斷X連鎖EDA-ID。
【關(guān)鍵詞】：孟德爾遺傳易感分枝桿菌病 熒光實(shí)時(shí)定量PCR IL-12/IFN-g軸 流式細(xì)胞術(shù) 孟德爾遺傳分枝桿菌易感病 IL-12/IFN-g軸 卡介苗接種不良反應(yīng) 外胚層發(fā)育不良 NEMO基因 外胚層發(fā)育不良 原發(fā)性免疫缺陷 卡介苗感染
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R725.9
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照4-6
• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-16
• 第一部分 孟德爾遺傳易感分枝桿菌病篩查方法的優(yōu)化16-27
• 前言16-17
• 1 材料與方法17-22
• 2 結(jié)果22-25
• 3 討論25-26
• 4 小結(jié)26-27
• 第二部分 孟德爾遺傳易感分枝桿菌病篩查方法的應(yīng)用27-53
• 前言27-28
• 1 材料與方法28-35
• 2 結(jié)果35-48
• 3 討論48-52
• 4 小結(jié)52-53
• 第三部分NEMO基因新突變致少汗型外胚層發(fā)育不良伴免疫缺陷病1例53-60
• 前言53
• 1 材料與方法53-54
• 2 結(jié)果54-56
• 3 討論56-59
• 4 小結(jié)59-60
• 全文總結(jié)60-61
• 參考文獻(xiàn)61-65
• 文獻(xiàn)綜述65-77
• 參考文獻(xiàn)73-77
• 致謝77-78
• 攻讀碩士學(xué)位期間研究成果及發(fā)表學(xué)術(shù)論文目錄78

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  本文關(guān)鍵詞：孟德爾遺傳易感分枝桿菌病篩查方法的優(yōu)化與應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：494404