目的：應(yīng)用PCR限制性酶切法和DNA序列分析法對先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥患者和攜帶者進(jìn)行遺傳學(xué)檢測,探討其方法的優(yōu)劣性和可靠性,為臨床、產(chǎn)前診斷及遺傳咨詢提供可靠依據(jù)。 方法：收集7個家系的先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥患者及其家屬血樣,提取血液DNA。用特定引物特異性擴(kuò)增21羥化酶(CYP21A2)基因,用限制性內(nèi)切酶法鑒定常見致病突變工172N、i2g、Del、P30L、Q318X、V281L、E6Cluster、R356W、Exon3 Del8 bp。不能確診的病例進(jìn)一步用PCR測序分析方法檢測所有外顯子及其側(cè)翼序列。 結(jié)果：應(yīng)用PCR限制性酶切法對先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥家系的患者和攜帶者CYP21A2基因檢測,診斷常見的突變?yōu)閕2g、Q318X、Del、Exon3 Del8bp、R356W等。有部分等位基因未完全確切檢測出突變,進(jìn)一步應(yīng)用PCR測序分析法檢測發(fā)現(xiàn)i2g、I172N等突變。一例失鹽型患兒發(fā)現(xiàn)Q318X突變合并有CD387 AAC→AAA改變。 結(jié)論：測序分析法是對PCR限制性內(nèi)切酶法檢測先天性腎上腺皮質(zhì)增生癥的一個有益補(bǔ)充,對于常見的突變i2g、工17...

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.2一2:正常對照，2和3:129純合突變

電泳呈156bp片段，如有論g突變，被切成133和23bp長度。在電泳時雜合突變表現(xiàn)為156bp下多一條133bp帶，但并不能以此判斷129純合與雜合突變。因?yàn)榇嬖谄詳U(kuò)增，酶切不完全等問題。如圖2.2一1和2.2一2。圖2.2一1:正常對照;2和3:129雜合突變圖2.2一....

圖2.3.1一2CYP21^2基因片段DPCR擴(kuò)增結(jié)果1%TAE瓊脂糖圖

為引物擴(kuò)增CYPZIA2基因片段C，1%瓊脂糖凝膠電泳，澳化乙錠染色，紫外光照相結(jié)果顯示大小符合的特異性目的條帶。(見下圖)。圖2.3.1一IC丫P21A2基因片段CPCR擴(kuò)增結(jié)果1%TAE瓊脂糖圖圖2.3.1一2CYP21^2基因片段DPCR擴(kuò)增結(jié)果1%TAE瓊脂糖圖

圖2.3.1一IC丫P21A2基因片段CPCR擴(kuò)增結(jié)果1%TAE瓊脂糖圖

相結(jié)果顯示大小符合的特異性目的條帶。(見下圖)。圖2.3.1一IC丫P21A2基因片段CPCR擴(kuò)增結(jié)果1%TAE瓊脂糖圖圖2.3.1一2CYP21^2基因片段DPCR擴(kuò)增結(jié)果1%TAE瓊脂糖圖

圖2.4.2一1人類基因突變數(shù)據(jù)庫(HGMD)1172N突變

碩士學(xué)位論文結(jié)果2.4.2.172N突變測序結(jié)果:1172N突變也是常見的突變。測序分析方法比ACRS方法準(zhǔn)確。如圖2.4.2一2所示，測序發(fā)現(xiàn)ATC和AAC雜合突變顯示的套峰。Adren81CM880020ATCeeAACIle一Asn172NatlAeadSe....

本文編號：4029947