發(fā)布時(shí)間：2024-07-07 01:52

　　目的：研究輪狀病毒腸炎患兒腸道菌群的變化并和同年齡同性別的健康兒童進(jìn)行比較。從微生態(tài)的角度分析輪狀病毒腸炎的發(fā)生與腸道菌群變化的相互關(guān)系。為微生態(tài)制劑用于輪狀病毒腸炎患兒的預(yù)防和治療提供依據(jù)。并探討熒光定量PCR技術(shù)在該領(lǐng)域應(yīng)用的實(shí)用性和可行性，以便推廣應(yīng)用。 方法：收集輪狀病毒腸炎患兒及健康對(duì)照組兒童的糞便標(biāo)本提取目標(biāo)細(xì)菌DNA。應(yīng)用細(xì)菌的16SrRNA序列設(shè)計(jì)雙歧桿菌、大腸桿菌及乳酸桿菌的引物，行常規(guī)PCR完成細(xì)菌的定性，然后取準(zhǔn)確定量的三種細(xì)菌DNA經(jīng)系列稀釋后做熒光定量PCR，制作出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，待測(cè)樣品同時(shí)進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)并和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行比較，獲得各樣品中三種細(xì)菌的量。 結(jié)果：輪狀病毒腸炎患兒的腸道菌群與健康兒童比較發(fā)生了明顯的變化，其腸道中雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而大腸桿菌的數(shù)量無(wú)顯著性變化(P＞0.05)。用本方法所得結(jié)果與其他文獻(xiàn)報(bào)道的用傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)方法所得結(jié)果相近。 結(jié)論：輪狀病毒腸炎患兒腸道中益生菌的數(shù)量較正常對(duì)照組明顯減少。在輪狀病毒腸炎的治療過(guò)程中，應(yīng)避免或清除可能加重腸道菌群紊亂的因素，采用微生態(tài)制...

【文章頁(yè)數(shù)】：38 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1電泳結(jié)果

95℃15s,55℃1min,72℃45s共30個(gè)循環(huán),最后以72℃10min延伸后結(jié)束。擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)PAGE電泳顯示各細(xì)菌的擴(kuò)增片段。如圖1所示�！　∽�1~3道為乳酸桿菌,4~6道為雙岐桿菌,7~9道為大腸桿菌,10道為標(biāo)準(zhǔn)分子量Mark圖1　電泳結(jié)果1.2.4　....

圖2雙岐桿菌的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

標(biāo)準(zhǔn)樣品通過(guò)PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化獲得。將三種細(xì)菌的標(biāo)準(zhǔn)樣品按上述條件進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)作為標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),見(jiàn)圖2(所示為雙歧桿菌標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)),以不同拷貝數(shù)的陽(yáng)性模板的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),以PCR反應(yīng)過(guò)程中出現(xiàn)熒光信號(hào)的初始循環(huán)數(shù)(Ct)為縱坐標(biāo)繪制而成。待測(cè)樣品同時(shí)進(jìn)行熒光定量PCR并和標(biāo)準(zhǔn)....

圖1電泳結(jié)果，其中左1一3道為乳酸桿菌，4一6道為雙歧桿菌，7一9道為大腸桿菌，10道為標(biāo)準(zhǔn)分子量Mark

在80V的電壓下電泳90分鐘使藍(lán)色指示帶走到膠孔中間偏下的位置，取下電泳膠，放入顯色液N(aH07.59，甲醛5.4ml，加蒸餾水至500m)l中顯色30分鐘后將電泳膠放置在凝膠成像儀中照相，即可顯示各細(xì)菌的擴(kuò)增片段，圖1所示。3.4熒光定量PCR反應(yīng):同樣的方法配制混合液，反應(yīng)....

圖210份標(biāo)本所得雙歧桿菌的溶解曲線(xiàn)，顯示產(chǎn)物的TM值為88℃一91℃

M盯k02〕bb圖1電泳結(jié)果，其中左1一3道為乳酸桿菌，4一6道為雙歧桿菌，7一9道為大腸桿菌10道為標(biāo)準(zhǔn)分子量Mark

本文編號(hào)：4002971