本文關(guān)鍵詞：特發(fā)性中樞性性早熟女童雌激素受體α基因Pvu Ⅱ和Xba Ⅰ多態(tài)性分析與血清骨形成標志物的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：1研究背景和目的1.1研究背景女童在8歲前,男童在9歲前出現(xiàn)第二性征即定義為性早熟,可分為中樞性性早熟(central precocious puberty,CPP)、不完全性或部分性性早熟、外周性性早熟三類,特發(fā)性中樞性性早熟(idiopathic central precocious puberty,ICPP)是下丘腦-垂體-性腺軸(Hypothalamic-pituitary-gonadal axis,HPGA)軸的提前啟動導(dǎo)致骨骺提前融合、造成終身高不足,但具體作用機制尚未明了。近年各地調(diào)查顯示性早熟發(fā)生率不斷升高,已上升至小兒內(nèi)分泌疾病的第2位,僅次于肥胖癥,90%以上為女童。青春發(fā)育年齡在過去一個世紀中呈現(xiàn)不斷提前的趨勢,乳腺發(fā)育年齡仍在提前,初潮年齡提前的趨勢在20世紀中葉以后已經(jīng)變緩或停滯。近期美國調(diào)查表明,在7周歲時有6.7%的白種女性兒童和27.3%的非裔女性兒童出現(xiàn)乳房發(fā)育和陰毛；中國九大城市女童的調(diào)查也顯示,8歲前出現(xiàn)乳房發(fā)育者超過10%,10歲組有1.65%的女性兒童出現(xiàn)初潮。青春期發(fā)育與HPGA軸功能的啟動相關(guān),各種環(huán)境因素如環(huán)境內(nèi)分泌干擾物、雌激素對食物、水源等污染,生活方式的改變,跨國收養(yǎng)兒童及營養(yǎng)過剩所致肥胖等,均可通過影響HPGA軸的啟動與功能,甚至通過對基因的影響而導(dǎo)致性早熟的發(fā)生。雌激素受體a(estrogen receptor,ER)在雌性個體第二性征發(fā)育和繁殖周期的維持及影響繁殖力方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。在ERa基因上游存在多種多態(tài)性位點,目前報道ERa基因多態(tài)性有2000多種,其中PvuII(rs2234693)和XbaⅠ (rs9340799)限制性片段長度多態(tài)性受到廣泛關(guān)注。這2處點突變位于ERa基因第1內(nèi)含子內(nèi)距第2外顯子上游約351kb和397kb兩處,正好發(fā)生在限制性內(nèi)切酶XbaⅠ和PvuⅡ識別位點上,PvuⅡ的T/C等位基因標記為p/P,XbaⅠ的A/G等位基因標記為x/X,其中P和X分別為缺乏PvuⅡ和XbaⅠ酶切位點的突變基因型。不同的基因型有可能影響不同個體之間ER的表達水平與功能差異,從而影響體內(nèi)雌激素生理作用。目前已有研究指出ERa基因PvuⅡ和XbaⅠ多態(tài)性與多種激素相關(guān)性疾病相關(guān),如乳腺癌、婦科腫瘤、骨質(zhì)疏松等[6],國內(nèi)外有少量報道ER多態(tài)性與性早熟的發(fā)生有關(guān),結(jié)論尚不統(tǒng)一。本研究擬檢測ICPP女童ERa基因PvuⅡ和XbaⅠ多態(tài)性,探討ERa基因PvuⅡ、XbaⅠ多態(tài)性與中樞性性早熟的關(guān)系,為進一步深入研究提供一定理論依據(jù)。中樞性性早熟是性腺提前發(fā)育同時伴有生長加速的一類生長發(fā)育疾病,體內(nèi)骨代謝旺盛,采用骨代謝檢測指標探討骨骼生長發(fā)育的研究日益增多。經(jīng)典的骨形成特異性標志物包括血鈣、磷、堿性磷酸酶等,但存在敏感性低、特異性不高等缺點。現(xiàn)代的反映成骨活性的特異性標志物包括：Ⅰ-型前膠原羧基端前肽、骨型堿性磷酸酶(bone alkaline phosphatase,BAP)、骨鈣素(osteocalcin,OC)等,彌補了經(jīng)典骨形成標志物的不足,測定這些產(chǎn)物可了解成骨細胞的功能狀態(tài),已廣泛應(yīng)用于成人骨骼疾病的診斷、療效監(jiān)測及發(fā)病機制的研究。C型利鈉肽氨基末端(amino-terminalpro-C-type natriuretic peptide,NT-proCNP)是C型利鈉肽(C-type natriuretic peptide,CNP)前體蛋白的催化裂解的一種穩(wěn)定產(chǎn)物,CNP是利鈉肽家族其中一員,利鈉肽家族主要包括三種結(jié)構(gòu)相關(guān)蛋白,分別為心房鈉尿肽(ANP)、腦鈉肽(BNP)和CNP。ANP和BNP主要分布在心血管系統(tǒng)中,而CNP主要存在于心外組織,如中樞神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉骨骼系統(tǒng)。與旁分泌因子的作用方式一致,CNP在調(diào)節(jié)生長板軟骨細胞的增殖分化和細胞外基質(zhì)合成中發(fā)揮著重要的作用,然而,CNP在血漿中濃度很低,一般生化檢測手段很難檢測到,生理與病理之間濃度變化很小,這限制了它在臨床上的應(yīng)用。NT-proCNP在體內(nèi)無生物活性,血漿濃度約為CNP的10-50倍,與CNP等摩爾產(chǎn)生,可更好地反映腎功能正常情況下組織CNP的合成。有研究指出NT-proCNP與骨骼生長有關(guān),目前有關(guān)骨形成標志物與性早熟關(guān)系的研究較少,尤其是NT-proCNP研究甚少,如骨鈣素(OC)、骨型堿性磷酸酶(BAP)及NT-proCNP與骨骼生長、性早熟之間的關(guān)系已逐漸受到生物學(xué)家和兒科內(nèi)分泌醫(yī)生的關(guān)注。本研究通過測定ICPP女童血清骨鈣素、骨型堿性磷酸酶及NT-proCNP等骨形成標志物的水平,同時探討ERa基因多態(tài)性對骨形成標志物的影響,以期對ICPP女童的評估提供一個良好的觀察指標。1.2研究目的通過觀察特發(fā)性中樞性性早熟女童ERa基因PvuⅡ和XbaⅠ多態(tài)性,探討其與中樞性性早熟發(fā)病的關(guān)系；測定ICPP女童血清骨鈣素、骨型堿性磷酸酶及NT-proCNP等骨形成標志物的水平,探討ERα基因多態(tài)性對骨形成標志物的影響,以期對ICPP女童的診斷和評估提供有用的分子生物學(xué)和生化觀察指標。2.材料與方法2.1研究對象選取2013年1月至2014年08月在深圳市婦幼保健院兒科內(nèi)分泌門診及住院的ICPP女童100例,初診年齡4～10.5歲,平均(6.690±1.580)歲,所有患兒經(jīng)詳細詢問病史、體格檢查、測定甲狀腺功能、肝腎功能、垂體MRI(平掃+增強)、盆腔(子宮、卵巢)、肝臟和腎上腺彩超及骨齡等檢查,經(jīng)過促性腺激素釋放激素(GnRH)激發(fā)試驗均符合ICPP的診斷標準,同時排除因誤服避孕藥等引起的外周性性早熟,排除顱內(nèi)及盆腔、肝臟、腎上腺等部位的占位病變和其他內(nèi)分泌疾病,如McCune-Albright綜合征等引起的性早熟,同時隨機選擇同一時期在我院體檢的健康女童100例為對照組,均未出現(xiàn)第二性征,生長發(fā)育正常,無慢性消耗性疾病,年齡在3.83～10.00歲,平均(5.81±1.12)歲,年齡的差異在兩組間無統(tǒng)計學(xué)意義(t=0.87,P0.05)。所有研究對象均知情同意并簽署知情同意書。2.2實驗方法(1)收集ICPP女童和正常健康對照組兒童肘靜脈血各6ml,其中3ml血用于分離血清后檢測血清骨形成標志物水平；另3ml靜脈血以待檢測ERa基因PvuⅡ和XbaⅠ多態(tài)性。(2)采用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-RFLP)方法檢測兩組女童ERα基因PvuⅡ和XbaⅠ限制性片段長度多態(tài)性,檢測ERα基因PvuⅡ和XbaⅠ的基因型分布及P等位基因和X等位基因的基因頻率。(3)采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法測定ICPP女童及正常對照組女童血清骨形成標志物及胰島素樣生長因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)含量,采用美國Beckman公司生產(chǎn)的Unicel DXI80全自動熒光免疫分析系統(tǒng)測定黃體生成素(LH)、促卵泡素(FSH),雌二醇(E2)等。(4)采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析,用χ2檢驗檢測病例組與對照組基因型頻率的分布情況,同時分析基因型之間的交互作用；計算OR值和95%CI,以表示它們之間關(guān)聯(lián)強度；計量資料以(X±s)表示,呈正態(tài)分布的數(shù)據(jù)組間比較采用t檢驗,呈非正態(tài)分布的用非參數(shù)t檢驗,多組間的計量資料比較采用協(xié)方差分析(ANCOVA)控制協(xié)變量,數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布且方差齊多組間的比較采用單因素分析,非正態(tài)分布或(和)方差不齊者采用Kruskal-Wills H檢驗。兩兩比較方差齊采用LSD檢驗,不齊者用非參數(shù)檢驗的Dunnett T3檢驗。以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。3結(jié)果3.1 PvuⅡ多態(tài)性分析PvuⅡ基因型及P等位基因頻率在兩組中分布差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=9.023,P=0.011；χ2=6.938,P=0.011),在ICPP組中,P等位基因頻率為40.5%,正常對照組中則為28.0%,OR值是1.750(95%CI1.152-2.659,P0.05)：基因型分布上ICPP組和對照組種分別是Pp基因型與pp基因型所占比例較高,各占特定人群的55%和53%。3.2 XbaI多態(tài)性分析XbaⅠ基因型及X等位基因頻率在兩組中分布差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=11.740,P=0.003；x2=11.408,=0.001)；在ICPP組中,X等位基因頻率為42.0%,正常對照組中則為26.5%,OR值是2.061(95%CI1.152-2.659,P0.05),在ICPP組和對照組種分別是Xx基因型與xx基因型所占比例較高,各占特定人群的48%和58%。3.3 PvuⅡ和XbaI多態(tài)性組合分析：9種單體型分布經(jīng)卡方檢驗在兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=31.388,P=0.001),ICPP組PpXX基因型構(gòu)成比(13%)高于對照組構(gòu)成比(3%),而ppxx基因型構(gòu)成比(11%)低于對照組(39%)。3.4 ICPP組血清骨鈣素、骨型堿性磷酸酶、NT-proCNP及IGF-1水平高于正常對照組。血清NT-proCNP與IGF-1水平分別在在Tanner Ⅱ期和Tanner Ⅳ期最高(P0.05),骨鈣素與骨型堿性磷酸酶水平均以Tanner Ⅲ期最高,但差異缺乏統(tǒng)計學(xué)意義。3.5 ICPP女童的ROC曲線特征顯示,血清骨形成標志物含量對中樞性性早熟有一定的診斷價值,其中血清IGF-1的敏感度及特異度較NT-proCNP、OC與BAP為高。3.6 在PvuⅡ基因型分布中,Pp基因型血清NT-proCNP水平高于pp基因型(P=0.011),BAP, OC, IGF-1各基因型中差異無統(tǒng)計學(xué)意義；血清NT-proCNP、 BAP、OC、及IGF-1水平在XbaⅠ各基因型中差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4結(jié)論4.1 ERa基因PvuII和XbaⅠ位點多態(tài)性與特發(fā)性中樞性性早熟可能有關(guān),攜帶PvuⅡ的P等位基因發(fā)生ICPP的相對風(fēng)險是p的1.750倍(95%CI：1.152-2.659,P0.05);攜帶XbaⅠ的X等位基因發(fā)生ICPP的相對風(fēng)險是x的2.061倍(95%CI：1.351-3.145,P0.05),P等位基因和X等位基因可能是ICPP女童遺傳易感性基因,Pp基因型或Xx基因型易于患病,PpXX基因型可能是影響中樞性性早熟的潛在危險因素。4.2 ICPP女童血清骨鈣素、骨型堿性磷酸酶、NT-proCNP及IGF-1水平增高,血清NT-proCNP與IGF-1水平分別在在Tanner Ⅱ期和Tanner Ⅳ期最高(P0.05),骨鈣素與骨型堿性磷酸酶水平均以Tanner Ⅲ期最高,但差異缺乏統(tǒng)計學(xué)意義。4.3血清骨形成標志物及IGF-1水平對中樞性性早熟均都有一定的診斷價值,其敏感度及特異度不一,血清IGF-1較NT-proCNP、OC與BAP其敏感度及特異度較高。4.4血清NT-proCNP水平在Pp基因型中的分布高于pp基因型(P=0.011),BAP, OC及IGF-1在PvuⅡ各基因型分布中差異無統(tǒng)計學(xué)意義；NT-proCNP、 BAP、OC、及IGF-1在XbaⅠ各基因型分布中差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。
【關(guān)鍵詞】：特發(fā)性中樞性性早熟 雌激素受體α基因 Pvu Ⅱ Xba Ⅰ 多態(tài)性 基因型 骨形成標志物 骨鈣素 骨型堿性磷酸酶 C型利鈉肽氨基末端
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R725.8
【目錄】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-19
• 前言19-23
• 第一章 特發(fā)性中樞性性早熟女童雌激素受體α基因PvuⅡ和XbaⅠ多態(tài)性分析23-34
• 引言23
• 1 材料與方法23-24
• 2 實驗方法24-27
• 3 結(jié)果27-30
• 4 討論30-34
• 第二章 血清骨形成標志物在特發(fā)性中樞性性早熟女童中的測定及意義34-42
• 引言34
• 1 材料與方法34-35
• 2 實驗方法35-37
• 3 結(jié)果37-38
• 4 討論38-42
• 第三章 特發(fā)性中樞性性早熟女童雌激素受體α基因Pvu Ⅱ和XbaⅠ多態(tài)性與骨形成標志物的關(guān)系42-48
• 引言42
• 1 材料與方法42-43
• 2 結(jié)果43-45
• 3 討論45-48
• 參考文獻48-57
• 中英文縮略詞對照表57-58
• 附錄58-59
• 成果59-60
• 綜述60-70
• 參考文獻65-70
• 致謝70-71

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 柯江維;楊玉;段榮;陳強;劉志強;楊利;謝理玲;;雌激素受體α基因多態(tài)性與女孩性早熟關(guān)系的研究[J];中國實驗診斷學(xué);2010年10期

  本文關(guān)鍵詞：特發(fā)性中樞性性早熟女童雌激素受體α基因Pvu Ⅱ和Xba Ⅰ多態(tài)性分析與血清骨形成標志物的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：395719