第一部分早產(chǎn)鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞分離、純化及原代培養(yǎng) 目的 探討早產(chǎn)鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(AECⅡ)的分離、純化和培養(yǎng)的方法,為研究內(nèi)皮素-1(ET-1)干預(yù)對高氧暴露AECⅡ的影響及其作用機(jī)制提供細(xì)胞模型。 方法 水合氯醛麻醉孕19天Sprague-Dawley(SD)大鼠,剖宮產(chǎn)取出胎鼠,分離肺組織,采用胰酶結(jié)合膠原酶的方法消化肺組織細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液,用差速離心和反復(fù)貼壁的方法純化AECⅡ,用含10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞。臺(tái)盼藍(lán)染色檢測細(xì)胞活力,改良巴氏染色檢測細(xì)胞純度,透射電鏡鑒定細(xì)胞,倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況。 結(jié)果 每只孕鼠可獲得19天胎齡的早產(chǎn)鼠數(shù)量為8¹1只(95% CI),每只早產(chǎn)鼠可獲得AECⅡ細(xì)胞數(shù)為(7.7±0.9)×10⁶,細(xì)胞的活力為(95.5±1.6)%,純度為(95.0±1.5)%。透射電鏡觀察細(xì)胞表面有短小的微絨毛,胞質(zhì)內(nèi)有特征性的板層小體。倒置相差顯微鏡下觀察AECⅡ原代培養(yǎng)12¹8h左右已經(jīng)貼壁生長,培養(yǎng)24⁴8h細(xì)胞處于對數(shù)生長期,72h...

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1臺(tái)盼藍(lán)染色(×100)

內(nèi)皮素-1對高氧暴露早產(chǎn)鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的影響及其機(jī)制研究

圖1各組AECⅡ形態(tài)學(xué)變化（×100）

2實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1高氧暴露24小時(shí)及ET-1干預(yù)后AECⅡ的形態(tài)學(xué)變化倒置相差顯微鏡觀察顯示，空氣組細(xì)胞呈圓形或立方形，緊貼于瓶底，細(xì)胞之間連接緊密，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)顆粒較多(圖1A)；高氧組AECⅡ細(xì)胞皺縮，胞內(nèi)顆粒數(shù)目減少，間隙增大，生長不良(圖1B)；高氧+ET-....

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