第一部分Six1過(guò)表達(dá)對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化及纖維化的影響的研究目的:通過(guò)上調(diào)Six1在人支氣管上皮細(xì)胞(16HBE)的表達(dá),研究其過(guò)表達(dá)對(duì)16HBE細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化和纖維化的影響方法:將含有Six1(NM₀05982)-GV146質(zhì)粒的甘油菌擴(kuò)大培養(yǎng),去內(nèi)毒素后抽提質(zhì)粒并測(cè)定濃度。體外培養(yǎng)16HBE細(xì)胞株并設(shè)立實(shí)驗(yàn)組、陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染Six1(NM₀05982)-GV146質(zhì)粒,陰性對(duì)照組轉(zhuǎn)染GV146對(duì)照空載質(zhì)粒,空白對(duì)照組僅予轉(zhuǎn)染試劑。轉(zhuǎn)染48h后,采用倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)的變化;采用RT-PCR檢測(cè)Six1、E鈣蛋白、α肌動(dòng)蛋白、波形蛋白、角蛋白的m RNA的表達(dá);采用Western印跡技術(shù)測(cè)定Six1蛋白、E鈣蛋白、α肌動(dòng)蛋白、波形蛋白、角蛋白的表達(dá);采用RT-PCR及Western印跡技術(shù)檢測(cè)各組纖維黏連蛋白m RNA及蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果:(1)倒置顯微鏡下顯示:實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組和空白組相比,細(xì)胞從鋪路石樣向梭形改變,細(xì)胞間連接間隙增大;(2)Six1的m RNA及蛋白表達(dá)較陰性對(duì)照組和空白對(duì)照增高,差...

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要1
abstract1
摘要2
abstract2
第一部分 Six1過(guò)表達(dá)對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化及纖維化的影響的研究
    引言
    第1章 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 主要試劑及來(lái)源
        1.2 主要器械及來(lái)源
        1.3 主要溶液配制
    第2章 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 質(zhì)粒擴(kuò)增及抽提
        2.2 16HBE細(xì)胞的傳代與培養(yǎng)
        2.3 細(xì)胞鋪板及轉(zhuǎn)染
        2.4 RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞中Six1及EMT和纖維化相關(guān)m RNA表達(dá)
        2.5 Western bolt檢測(cè)各組細(xì)胞中Six1、EMT相關(guān)蛋白及纖維黏連蛋白的表達(dá)水平
        2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 各組16HBE細(xì)胞中Six1 的表達(dá)
        3.2 上調(diào)Six1對(duì)16HBE細(xì)胞形態(tài)的影響
        3.3 上調(diào)Six1對(duì)16HBE細(xì)胞表型標(biāo)志物m RNA及蛋白表達(dá)水平的影響
        3.4 上調(diào)Six1對(duì)16HBE細(xì)胞中纖維黏連蛋白表達(dá)的影響
    第4章 討論
    第5章 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 Six1通過(guò)TGFβ1/Smad信號(hào)通路調(diào)節(jié)人支氣管上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化及纖維化的研究
    引言
    第1章 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 主要試劑及來(lái)源
        1.2 主要器械及來(lái)源
        1.3 主要溶液配制
    第2章 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 質(zhì)粒擴(kuò)增及抽提
        2.2 16HBE細(xì)胞的傳代與培養(yǎng)
        2.3 細(xì)胞鋪板及轉(zhuǎn)染
        2.4 TGFβ1信號(hào)通路的抑制
        2.5 Western bolt檢測(cè)各組細(xì)胞中EMT、TGFβ1/Smad信號(hào)通路相關(guān)蛋白及纖維黏連蛋白的表達(dá)水平
        2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 上調(diào)Six1對(duì)16HBE細(xì)胞中TGFβ1/Smad信號(hào)通路的影響
        3.2 抑制TGFβ1 信號(hào)通路對(duì)Six1-16HBE細(xì)胞形態(tài)的影響
        3.3 TGFβ1 通路抑制劑對(duì)Six1-16HBE細(xì)胞中TGFβ1、phospho-Smad2 蛋白表達(dá)水平的影響。
        3.4 TGFβ1 通路抑制劑對(duì)Six1-16HBE細(xì)胞中E鈣蛋白和α肌動(dòng)蛋白表達(dá)水平的影響。
        3.5 抑制TGFβ1/Smad信號(hào)通路對(duì)Six1-16HBE細(xì)胞中纖維黏連蛋白表達(dá)水平的影響。
    第4章 討論
    第5章 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間研究成果
縮略詞表
致謝



本文編號(hào)：3895428