本文關(guān)鍵詞：鹽酸戊乙奎醚預(yù)先給藥對新生大鼠內(nèi)毒素性腎臟損傷的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：新生兒急性腎損傷是NICU的常見疾病之一。雖然關(guān)于新生兒腎損傷的研究還相對較少,但是新生兒急性腎損傷卻很常見。且由急性腎損傷造成的死亡也很常見,晚期極易造成腎功能不全,在極低體重新生兒以及合并其它疾病者更甚。近年來,對新生兒急性腎損傷的研究日漸增多。新生兒的血流動力學(xué)最突出的特點是血容量低下,腎臟的灌注量也低。因此,在休克、感染、低體溫等各種病理狀態(tài)下,新生兒的腎功能更易遭到損害,引起新生兒腎損傷。由內(nèi)毒素所致的急性腎功能衰竭的死亡率約占70%。目前,關(guān)于內(nèi)毒素性急性腎功能衰竭的病理機制還不明確。脂多糖(LPS)作為內(nèi)毒素,廣泛應(yīng)用于動物內(nèi)毒素性臟器損傷模型的制備過程中。內(nèi)毒素性腎損傷時腎臟的血流動力學(xué)發(fā)生改變,微循環(huán)障礙,使機體呈現(xiàn)缺血缺氧狀態(tài);且內(nèi)毒素性腎損傷時,腎臟谷氨酰胺的耗竭加速,腎小管上皮細(xì)胞的氧化代謝也發(fā)生障礙。有研究表明缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1α,作為低氧時發(fā)揮作用的調(diào)控基因,可在缺氧條件下產(chǎn)生核蛋白,與其靶基因結(jié)合,使機體對缺氧環(huán)境產(chǎn)生適應(yīng)性改變,且內(nèi)毒素性腎損傷時HIF-1α過表達(dá)。HIF-1α可通過NF-κB途徑促發(fā)炎性因子的釋放,加重腎臟的損害;另有研究表明,谷氨酰胺Gln作為腎臟糖異生的底物,以及腎小管細(xì)胞氧化代謝的燃料,在內(nèi)毒素血癥發(fā)生時可以抑制腎小管上皮細(xì)胞的凋亡,且可以減緩線粒體呼吸功能受抑制程度。鹽酸戊乙奎醚(PHC)是一種廣泛應(yīng)用于臨床麻醉中的新型抗膽堿藥。很多研究表明,其在改善休克患者的微循環(huán)、減輕內(nèi)臟多器官的損傷方面發(fā)揮著重要作用,可視為糾正內(nèi)毒素性休克時微循環(huán)痙攣理想的血管活性藥物。且在以往的研究中發(fā)現(xiàn),鹽酸戊乙奎醚可通過調(diào)節(jié)HIF-1α和Gln的表達(dá)來降低內(nèi)毒素性腸損傷,且我們通過大量的臨床案例觀察到鹽酸戊乙奎醚的應(yīng)用可以明顯改善內(nèi)毒素性急性腎損傷時腎臟的功能。因此,本研究制備的模型為LPS致新生7日齡大鼠急性內(nèi)毒素性腎損傷,探討預(yù)先使用抗膽堿藥鹽酸戊乙奎醚對腎組織HIF-1α和Gln表達(dá)的影響,進(jìn)一步探討其具體作用機制。目的觀察新生大鼠內(nèi)毒素性急性腎損傷時腎組織中HIF-1α以及Gln的表達(dá);以鹽酸戊乙奎醚預(yù)先給藥為干預(yù)手段,觀察其對新生大鼠內(nèi)毒素性腎損傷時HIF-1α以及Gln的表達(dá)的影響;探討鹽酸戊乙奎醚預(yù)先給藥對內(nèi)毒素性腎損傷時實現(xiàn)腎臟保護(hù)作用的具體機制,以期找到新的治療途徑來面對新生兒內(nèi)毒素性腎損傷。材料與方法1實驗對象SD大鼠72只(1周齡,SPF級,健康);購于河南省實驗動物中心(鄭州大學(xué)),不限雌雄,體重15.0~18.0g。2實驗方法2.1實驗對象分組依據(jù)研究內(nèi)容,將實驗動物隨機分為兩部分:48只和24只。第一部分:取48只,根據(jù)隨機數(shù)字表法將其分為3組,每組16只(n=16)。分別為C組:對照組(PBS液);K組:LPS腎損傷組和P組:PHC組。此部分實驗動物于造模后觀察其行為學(xué)方面及精神狀態(tài)的變化,并計算各組造模后24h時的死亡率。第二部分:隨機將剩余的24只新生鼠分為C組、K組和P組,每組8只。此部分實驗用于觀察三組間腎組織HIF-1α和Gln以及相關(guān)因子的表達(dá)、腎組織濕/干重比的測定以及光鏡下觀察腎組織病理形態(tài)學(xué)改變。2.2動物模型的制備兩部分實驗動物同時制模。C組:腹腔注射PBS液10ml/kg;P組:腹腔PHC 2mg/kg注射,將濃度稀釋至0.10mg/ml;K組:腹腔LPS 5mg/kg注射,將濃度稀釋至1.0mg/ml。給藥方式:P組和K組均注射LPS,P組LPS注射前30min注射PHC。腹腔注射部位要求一致,回抽無血無氣體。實驗動物于制模后標(biāo)記清楚,放回鼠籠與母鼠共同喂養(yǎng),保持喂養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定。第二部分老鼠于造模后6小時時麻醉,取材,凍存,備用。2.3腎組織的標(biāo)本采集腹腔注射3ml/kg的10%水合氯醛進(jìn)行麻醉,麻醉后接小動物呼吸機,將老鼠以背臥位固定于手術(shù)臺上。從胸部正中剪開2.0~2.5cm,暴露肋骨和肌肉,觸摸到心尖的搏動后,使用注射器(5號針頭)進(jìn)行心臟采血。將血標(biāo)本于室溫下(22℃~25℃)靜置1小時,1200r/min離心10分鐘,取上清液,-80℃冰箱中保存待檢。開腹后取下左右兩腎。右腎上二分之一,勻漿處理,用于HIF-1α、Gln等指標(biāo)的檢測;右腎下二分之一,使用Trizol法提取RNA,RT-PCR法檢測HIF-1αm RNA的表達(dá);左腎上二分之一用于腎濕/干重比的檢測;左腎下二分之一,HE染色后,觀察其病理學(xué)改變。2.4檢測指標(biāo)2.4.1計算腎組織濕/干重比(W/D)使用濾紙吸取多余水分后,電子天平稱量左腎上二分之一,并記錄濕重。繼而放入70℃恒溫烘干箱48小時,行稱量,記錄干重,計算濕/干重比。2.4.2腎組織形態(tài)學(xué)觀察將左腎下二分之一組織放入10%多聚甲醛(多聚甲醛體積大于腎組織體積的3倍)中48小時使其固定充分。石蠟包埋,HE染色。400倍光鏡下觀察腎的組織結(jié)構(gòu)病理學(xué)改變。2.4.3 ELISA法測定腎組織中TNF-α、IL-6、HIF-1α、Gln的含量對右腎上二分之一腎組織進(jìn)行稱重,取緩沖液PBS,以1/9容量比配置,使用勻漿器制備組織勻漿。3500r/min離心10分鐘,取上清,于-80℃冰箱中保存待使用。嚴(yán)格按照ELISA試劑盒(RD公司,美國)的使用說明書檢測TNF-α、IL-6、HIF-1α、Gln的表達(dá)。2.4.4 RT-PCR法測定腎組織HIF-1αm RNA的表達(dá)將右腎下二分之一組織經(jīng)DEPC水沖洗后濾紙吸干,于液氮中速凍后,隨后置入-80℃冰箱保存待檢。使用Trizol法提取腎臟的RNA,HIF-1αm RNA在新生鼠腎組織的表達(dá)經(jīng)步驟:反轉(zhuǎn)錄、DNA擴增、糖瓊脂糖凝膠電泳等檢測。3統(tǒng)計學(xué)方法處理采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示計量資料,多組間比較單因素方差分析,兩兩之間相比較采用最小顯著差異法(LSD-t),設(shè)定檢驗水準(zhǔn)為α=0.05,即P值當(dāng)小于檢驗水準(zhǔn)時,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1.生存狀態(tài)觀察腹腔注射LPS后,1小時后K組新生鼠開始顫抖,呼吸頻率增快。于3小時后全身顏色呈現(xiàn)灰白色,活動遲緩,體溫明顯降低。6小時后皮膚顏色較3小時時更甚,不活動也不進(jìn)食,口唇青紫,呈現(xiàn)嚴(yán)重缺氧狀態(tài)。同時期P組新生鼠癥狀較K組狀態(tài)有明顯改善。C組新生鼠活動、進(jìn)食及精神狀態(tài)等情況皆正常。C組、P組及K組的24h死亡率分別為0%、12.4%和50%。2.腎組織的濕/干重比的結(jié)果:P組和K組較之于C組均有明顯升高(P0.05);P組較之于K組,顯著降低(P0.05);各組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。3.腎組織病理學(xué)結(jié)果顯示:C組腎組織形態(tài)學(xué)無明顯改變,基本正常。K組腎小管上皮細(xì)胞明顯腫脹,管腔變窄,充血,水腫,部分腎小管上皮細(xì)胞空泡化變形或者透明樣變性。管腔內(nèi)可見大量的脫落細(xì)胞、紅細(xì)胞和細(xì)胞管型,間質(zhì)血管擴張充血,且大量炎性細(xì)胞浸潤。與K組比較,P組腎小管上皮細(xì)胞腫脹明顯減輕,間質(zhì)少許充血以及炎性細(xì)胞浸潤,病理改變有明顯改善。4.P組和K組腎組織中的HIF-1α、IL-6、TNF-α含量較之于C組均有顯著增加(P0.05),Gln含量顯著降低(P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義;較之于K組,P組腎組織中IL-6、TNF-α、HIF-1α含量均較低,Gln的含量較高(P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。5.HIF-1αm RNA在腎組織中的表達(dá)結(jié)果:K組和P組較之于C組,均明顯增加(P0.05);P組較之于與K組,明顯降低(P0.05);差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論鹽酸戊乙奎醚預(yù)先給藥能夠減輕內(nèi)毒素血癥時腎組織炎癥反應(yīng),改善其組織病理學(xué)變化。對內(nèi)毒素性腎損傷發(fā)揮腎保護(hù)作用的機制:可能是通過抑制HIF-1α在腎組織中的表達(dá);也可能通過保護(hù)內(nèi)毒素?fù)p傷情況下腎臟谷氨酰胺代謝途徑,減少谷氨酰胺的消耗有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：內(nèi)毒素血癥 腎損傷 鹽酸戊乙奎醚 缺氧誘導(dǎo)因子-1α 谷氨酰胺
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R722.1
【目錄】：

• 摘要4-9
• Abstract9-16
• 中英文縮略詞對照表16-17
• 第1章 前言17-21
• 第2章 材料與方法21-29
• 第3章 結(jié)果29-37
• 第4章 討論37-43
• 第5章 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-48
• 鹽酸戊乙奎醚在內(nèi)毒素性腎損傷中的研究進(jìn)展48-64
• 參考文獻(xiàn)59-64
• 致謝64-65
• 個人簡歷及在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文65

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王宏宇;孫瑩杰;練向群;王大明;郝宏黨;;鹽酸戊乙奎醚預(yù)處理對體外循環(huán)大鼠腎臟的保護(hù)作用[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2008年19期

2 吳曉靜;夏中元;王伶俐;李寧濤;;鹽酸戊乙奎醚對創(chuàng)傷性急性肺損傷大鼠促炎性細(xì)胞因子的影響[J];武漢大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2010年03期

  本文關(guān)鍵詞：鹽酸戊乙奎醚預(yù)先給藥對新生大鼠內(nèi)毒素性腎臟損傷的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：361236