背景:神經(jīng)母細胞瘤來源于交感神經(jīng)系統(tǒng),是小兒最常見的顱外實體惡性腫瘤,其發(fā)病率及死亡率均較高,對患兒及其家庭影響很大。高度異質性是神經(jīng)母細胞瘤主要特點之一,臨床上根據(jù)風險因素指標的不同將神經(jīng)母細胞瘤劃分為低危組、中危組和高危組。低、中危組患兒預后較好,但對于高危組患兒而言,即使綜合多種治療方案,其預后仍不理想,目前針對神經(jīng)母細胞瘤的治療仍是臨床研究的難點。微管蛋白是中心體和紡錘體的基本結構單位,在細胞有絲分裂過程中發(fā)揮重要作用。研究表明微管蛋白在神經(jīng)母細胞瘤中特異表達,且可作為該腫瘤的特異治療靶點。HAUS5是人類Augmin復合物的亞基之一,主要參與紡錘體組裝,維持中心體完整以及胞質分裂等過程。HAUS5表達異常可誘導中心體的微管片段化以及中心體體積的增大,導致染色體錯位以及雙極紡錘體功能缺陷等,而雙極紡錘體的異常又可誘發(fā)腫瘤形成。據(jù)國外研究報道,敲減HAUS5基因可抑制膠質母細胞瘤干細胞樣細胞增殖以及腫瘤形成能力。綜上,HAUS5有可能對神經(jīng)母細胞瘤的發(fā)生、發(fā)展起作用,然而目前國內外對HAUS5在神經(jīng)母細胞瘤組織中表達狀況,及其在神經(jīng)母細胞瘤中的作用影響等方面研究尚不足。目的:本研... 

【文章來源】：鄭州大學河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１?ＨＡＵＳ５在ＮＢ腫瘤組織中免疫組化染色結果（２０〇ｘ），圖Ａ為高表達，??染色陽性率為８０％，總評分為８分；圖Ｂ為低表達，染色陽性申．為１０％，總評??

?＾???２?ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測不同ＮＢ細胞中ＨＡＵＳ５表達結果??以ＧＡＰＤＨ作為內參基因，以ＡＣｔ值反應目的基因表達豐度高低（ＡＣｔ＝目??的基因Ｃｔ值－內參基因Ｃｔ值）。測得ＡＣｔ值￡１２表示該細胞中基因表達豐度高；??１２＜ＡＣｔ值＜１６表示基因表達豐度為中；ＡＱ值２１６表示基因表達豐度低。本實驗??ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測ＳＨ－ＳＹ５Ｙ、ＳＫ－Ｎ－ＡＳ兩組細胞中ＨＡＵＳ５基因表達結果如下（表??２．１）?〇??表?２．１?ＲＴ－ｑＰＣＲ?檢測?ＳＨ－ＳＹ５Ｙ、ＳＫ－Ｎ－ＡＳ?兩組細胞?ＨＡＵＳ５?基因?Ａ?Ｃｔ?值??細胞名稱?ＧＡＰＤＨＣｔ值?ＨＡＵＳ５Ｃｔ值?ＡＣｔ?ＡＣｔ均值??ＳＨ－ＳＹ５Ｙ?１４．４６?２４．４８?１０．０２?１０．０５??１４．４９?２４．４９?１０??１４．４３?２４．５５?１０．１２??ＳＫ－Ｎ－ＡＳ?１２．９９?２２．５３?９．５４?９．５７??１２．８５?２２．４８?９．６３???１１９?２２．４３?＾５３???以ＧＡｒｏＨ為內參的ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測結果可以看出，ＨＡＵＳ５基因在ＳＨ－ＳＹ５Ｙ、??ＳＫ－Ｎ－ＡＳ兩組細胞中的表達豐度均高（圖２．１）。??１２．０??ｆ８．°．?■?■??０．０??■■■■?＾???ＳＨ－ＳＹ５Ｙ?ＳＫ－Ｎ－ＡＳ??圖２．１?ＲＴ－ｑＰＣＲ技術檢測ＳＨ－ＳＹ５Ｙ、ＳＫ－Ｎ－ＡＳ兩種ＮＢ細胞中ＨＡＵＳ５基因??表達豐度??２２??

Ｓ細胞中ＨＡＵＳ５??基Ｗ在ｍＲＮＡ水平的農(nóng)達量較ｓｈＣｔｒｌ組明顯受到抑制［相對衣達倍數(shù)??（０．３１８±０．０３８）?ｖｓ?（?１．０２０±０．２５３），尸＝０．０３８］，差異有統(tǒng)計學意義（如圖?３．１）。??ＲＴ－ｑＰＣ’Ｒ檢測結汜敲減效率達到６８．２％，說明ｓｈＲＮＡ慢病毒感染ＮＢ細胞成功，??ＨＡＵＳ５基因敲減成功。??１?４００??Ｉ?Ｉ??？?１．２００??３?１?ＯＯＯ??ｚ?＆?｜Ｈ｜｜｜｜??＾?＾?０?８００??ｓｈＣｔｒｌ?ｓｈＨＡＵＳＳ??圖３＿?１敲減ＨＡＵＳ５基因后ｓｈＨＡＵＳ５組和ｓｈＣｔｒｌ組細胞中ｍＲＮＡ水平表達??中．度比較，＊表不？廠＜?（）．〇５??４?Ｃｅ?Ｉ?ｉ?ｇｏ細胞計數(shù)檢測結果??Ｃｅｌｉｇｏ細胞成像分析儀器４讀取被病海感染后帶熒光的細胞并進行細胞??計數(shù)，實驗中所繪的細胞增殖曲線圖和增殖倍數(shù)的生長曲線圖均可反應細胞的??生�。浚迹涸鲋碃顟B(tài)。本實驗中檢測結果為，在第４天和第５天ｓｌｉ丨ＩＡＵＳ５組較ｓｈＣｔｒｌ??組的細胞數(shù)量比較分別為［ｄａｙ４?（２２４１?士?１８８）?ｖｓ?（４４７２?±３９７）?，?Ｚ５＜０．０５〕，［ｄａｙ５??（２４２７±１３１）?ｖｓ?（５４６７?±３９５），尸〈０．?Ｏｆ；］。在第?４?大和第［；天?ｓｈＨＡＵＳ５?組較??ｓｈＣｔｄ組細胞數(shù)量的變化倍數(shù)比較分別為［ｄａｙ４?（１．１４±０．０２）?ｖｓ?（１．６８±０．０６），??Ｐ＜０．０５］，?［ｄａｙ５?（?１．２４±０＿０３）?ｖｓ?（２．０６±０．０３），尸?＜０．０５］。結果提示?ｓｈＨＡＵＳ５??２３??

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3572415