本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對幼鼠慢性腎功能不全的修復(fù)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)移植對幼鼠慢性腎功能不全(Chronic Renal Insufficiency,CRI)的修復(fù)作用。方法:1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)、鑒定及標(biāo)記:取體質(zhì)量為40~60g雄性Wistar幼鼠,3%水合氯醛麻醉后斷頸處死,75%酒精浸泡消毒15分鐘,待酒精滴瀝片刻,置于無菌手術(shù)彎盤中分離出全骨髓,用全骨髓培養(yǎng)法結(jié)合密度離心法培養(yǎng)種子細(xì)胞BMSCs,取生長狀態(tài)良好的第三代BMSCs,用流式細(xì)胞儀(Flow cytometer,FCM)檢測CD45抗原和CD90抗原陽性表達(dá)情況;用成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)液及成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)液誘導(dǎo)BMSCs向脂肪細(xì)胞及成骨細(xì)胞分化,鑒定其多向分化潛能;用DAPI(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)標(biāo)記BMSCs。2、實(shí)驗(yàn)動物分組及造模:取體質(zhì)量為91±12g、生長狀況良好的雄性Wistar幼鼠90只,隨機(jī)為3組:A組:BMSCs治療組,35只;B組:模型組,35只;C組:正常對照組,20只。A、B兩組幼鼠每日同一時間點(diǎn)給予腺嘌呤100mg/(kg?d)灌胃,建立幼鼠CRI模型。C組幼鼠灌胃予等體積蒸餾水作為對照。上述處理共5周。3、BMSCs修復(fù)幼鼠CRI:造模24小時,所有幼鼠尾部用醫(yī)用酒精棉球消毒,可見皮下血管明顯擴(kuò)張,作如下處理:A組幼鼠用留置針抽取1ml DAPI-BMSCs(1x106)經(jīng)擴(kuò)張的尾靜脈植入;B、C兩組幼鼠用留置針抽取1ml PBS緩沖液,經(jīng)幼鼠擴(kuò)張尾靜脈植入。于治療后第3天、7天、14天、28天、42天時,從A、B兩組幼鼠中隨機(jī)抽取6只,C組幼鼠隨機(jī)抽取3只,3%水合氯醛麻醉,頸靜脈取血標(biāo)本,檢測腎功能變化血清學(xué)指標(biāo);放入代謝籠留取24小時尿標(biāo)本進(jìn)行尿蛋白定量檢測;腎臟組織經(jīng)中性甲醛固定后,制造切片行HE和PAS染色,記錄三組幼鼠切片組織學(xué)變化。結(jié)果:1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)、鑒定及標(biāo)記:第三代BMSCs為排列均勻、包體中間粗、兩端較細(xì)的紡錘形;FCM多次檢測顯示BMSCs表面CD90抗原陽性,CD45抗原陰性;成脂及成骨誘導(dǎo)分化后,經(jīng)相應(yīng)染色分別可見紅色脂滴及紅色鈣化結(jié)節(jié)形成;DAPI標(biāo)記種子細(xì)胞核為圓形,發(fā)藍(lán)色熒光,標(biāo)記率接近100%。2、CRI模型建立:A、B兩組大鼠給予腺嘌呤100mg/(kg?d)連續(xù)灌胃5周時,與C組大鼠相比,表現(xiàn)為對外來刺激反應(yīng)明顯遲鈍,無精打采,飲食量明顯低于C組,尿量多,毛發(fā)干枯脫落。隨機(jī)抽取各組幼鼠3只,留取血、尿標(biāo)本檢測腎功能變化指標(biāo)(BUN、Cr、尿蛋白定量),均較C組明顯升高,P0.05,造模成功。3、BMSCs修復(fù)幼鼠慢CRI:腎臟功能學(xué)變化:細(xì)胞移植治療28天時,A、B兩組間血清腎臟功能學(xué)指標(biāo)無明顯差別;42天時,A組上述指標(biāo)較B組降低,P0.05,結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義。腎臟組織學(xué)變化:細(xì)胞移植治療28天時,A、B兩組大鼠腎組織無明顯差別,腎小球主要表現(xiàn)為體積肥大,球囊擴(kuò)張,炎細(xì)胞浸潤;腎小管損傷嚴(yán)重,主要表現(xiàn)為輪廓不清,管間排列紊亂,管腔及間質(zhì)大量淡黃色尿酸結(jié)晶沉積,腎小管上皮細(xì)胞腫脹、裂解、壞死,間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤明顯;未見局部腎小球硬化及間質(zhì)纖維化;42天時,A組腎小管輪廓較B組清晰、規(guī)則,尿酸結(jié)晶沉積減少,上皮細(xì)胞腫脹減輕,炎癥細(xì)胞浸潤減少,P0.05,結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:1、采用全骨髓培養(yǎng)法結(jié)合密度離心法可培養(yǎng)干細(xì)胞特性保持較為完整的BMSCs細(xì)胞。2、CD45和CD90抗原可作為離體培養(yǎng)BMSCs的獨(dú)立鑒定方法,該法操作簡單,結(jié)果肯定。經(jīng)多向誘導(dǎo)分化補(bǔ)充鑒定明確所培養(yǎng)細(xì)胞為種子細(xì)胞BMSCs;3、100mg/(kg?d)劑量的腺嘌呤每日灌胃,連續(xù)5周可成功建立幼鼠慢性腎功能不全模型;4、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可改善幼鼠慢性腎功能不全,修復(fù)受損腎小管,抑制炎癥細(xì)胞浸潤。
【關(guān)鍵詞】：慢性腎功能不全 幼鼠 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 修復(fù)
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R726.9
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 常用縮寫詞中英文對照表11-12
• 前言12-13
• 1 材料與方法13-20
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物13-14
• 1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑及儀器14-15
• 1.3 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)、鑒定及體外標(biāo)記15-17
• 1.4 腺嘌呤灌胃建立幼鼠慢性腎功能不全模型17
• 1.5 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)幼鼠慢性腎功能不全17-18
• 1.6 血、尿標(biāo)本及腎臟組織形態(tài)學(xué)檢測18-19
• 1.7 主要觀察指標(biāo)19-20
• 2 結(jié)果20-27
• 2.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)、鑒定及標(biāo)記20-23
• 2.2 腺嘌呤灌胃建立幼鼠慢性腎功能不全模型23-24
• 2.3 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)幼鼠慢性腎功能不全24-27
• 3 討論27-31
• 4 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 綜述35-40
• 參考文獻(xiàn)38-40
• 致謝40-41
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果41-42
• 個人簡歷42

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