發(fā)布時間：2017-05-02 18:04

  本文關鍵詞：益生菌對新生大鼠壞死性小腸結腸炎的影響研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：壞死性小腸結腸炎(NEC)是新生動物和嬰兒常見的急性胃腸道疾病,以回腸末端的病變最為嚴重,發(fā)病率和死亡率均很高。本病盡管經過幾十年的研究,但其發(fā)病機制尚不清楚,確診困難。為了探究益生菌對壞死性小腸結腸炎的影響,本試驗建立了新生大鼠壞死性小腸結腸炎動物模型,并觀測了補充益生菌對NEC新生大鼠腸壁中細胞因子IL-6、CXCL1、TNF-α、 PAF和ITF的影響。方法：96只新生Wistar大鼠,隨機分成3組：對照組、NEC組和益生菌組。于試驗的第4 d,取大鼠回腸末端腸管觀察其病理組織學變化；通過實時定量PCR法和ELISA法檢測回盲部腸組織中IL-6、CXCL1、TNF-α、PAF口ITF的表達水平。結果：NEC組的病理組織學評分極顯著高于對照組(P0.01),益生菌組的病理組織學評分極顯著低于NEC組(P0.01)。NEC組的IL-6和CXCL1 mRNA相對表達量極顯著高于對照組(P0.01),益生菌組IL-6和CXCL1 mRNA相對表達量極顯著低于NEC組(P0.01)并且益生菌組與對照組間IL-6和CXCL1 mRNA相對表達量無差異性(P0.05)；NEC組TNF-α mRNA相對表達量顯著高于對照組(P0.05),但益生菌組與NEC組或對照組間mRNA相對表達量無顯著差異(P0.05)；在三個試驗組間,PAF mRNA相對表達量差異不顯著(P0.05)；NEC組和益生菌組ITF mRNA相對表達量極顯著低于對照組(P0.01),但益生菌組和NEC組間ITF mRNA相對表達量無差異性(P0.05)。NEC組IL-6、CXCL1和TNF-α的蛋白含量極顯著或顯著高于對照組(P0.0 1或P0.05),益生菌組IL-6、CXCL1和TNF-α的蛋白含量極顯著或顯著低于NEC組(P0.01或P0.05)；NEC組和益生菌組PAF的蛋白含量極顯著低于對照組(P0.01),但益生菌組和NEC組間PAF的蛋白含量無差異性(P0.05)；在三個試驗組間,ITF的蛋白水平差異不顯著(P0.05)。結論：益生菌可通過調節(jié)腸壁IL-6、CXCL1和TNF-α的基因mRNA和蛋白的表達,降低腸壁的炎癥反應,但對ITF和PAF的影響不明顯,其作用機理有待于進一步研究。
【關鍵詞】：益生菌 壞死性小腸結腸炎 大鼠 炎性細胞因子 腸三葉因子
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：S857.31;R722
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-11
• 符號說明11-12
• 第一部分 文獻綜述12-24
• 第一章 壞死性小腸結腸炎的研究進展12-19
• 1 NEC的病因12-14
• 1.1 早產12-13
• 1.2 腸道致病菌定植13
• 1.3 喂養(yǎng)不當13-14
• 1.4 腸壁缺血、缺氧和再灌注損傷14
• 2 NEC的致病因子及相關因子14-16
• 2.1 白介素614-15
• 2.2 白介素815
• 2.3 腫瘤壞死因子α15
• 2.4 血小板活化因子15-16
• 2.5 腸三葉因子16
• 3 NEC的診斷16-17
• 3.1 診斷標準16-17
• 3.2 診斷方法17
• 4 NEC的治療17-19
• 4.1 保守治療17-18
• 4.2 外科治療18-19
• 5 NEC的預防19
• 第二章 益生菌對NEC防治作用的研究19-24
• 1 益生菌的菌種19-20
• 2 益生菌的生理學作用及作用機理20-21
• 2.1 對致病菌的競爭排斥作用20
• 2.2 增強腸上皮屏障功能20
• 2.3 產生抗菌類化學物質20-21
• 2.4 調節(jié)宿主免疫功能21
• 3 益生菌對NEC的防治作用21-22
• 4 課題研究的意義22-24
• 第二部分 試驗研究24-58
• 試驗一 新生大鼠壞死性小腸結腸炎模型的建立24-35
• 1 材料24-26
• 1.1 試驗動物及分組24
• 1.2 主要儀器24
• 1.3 主要試劑24-25
• 1.4 相關試劑的配制25-26
• 1.4.1 配方乳的配制25
• 1.4.2 脂多糖(LPS)的配制25
• 1.4.3 抗凝管的制備25
• 1.4.4 10%中性福爾馬林固定液的制備25
• 1.4.5 2.5%戊二醛固定液的配制25-26
• 1.4.6 梯度酒精的配制26
• 1.4.7 0.5%氨水酒精溶液的配制26
• 1.4.8 0.5%鹽酸酒精溶液的配制26
• 1.4.9 伊紅染色液的配制26
• 2 方法26-28
• 2.1 新生大鼠壞死性小腸結腸炎模型的建立26-27
• 2.1.1 造模方法26
• 2.1.2 試驗分組26-27
• 2.2 樣品的采集與固定27
• 2.3 石蠟切片的制作27-28
• 2.3.1 沖洗、脫水和透明27
• 2.3.2 浸蠟、包埋與修蠟27
• 2.3.3 切片、烤片27
• 2.3.4 HE染色27-28
• 2.4 掃描電鏡28
• 2.4.1 沖洗28
• 2.4.2 脫水28
• 2.4.3 干燥28
• 2.4.4 粘樣28
• 2.4.5 鍍金28
• 2.4.6 觀察28
• 2.5 數據處理28
• 3 結果28-33
• 3.1 增重29
• 3.2 病理學觀察29-30
• 3.3 血液學變化30-31
• 3.4 病理組織學變化31-32
• 3.5 病理學評分32
• 3.6 超微結構變化32-33
• 4 討論33-35
• 試驗二 益生菌對NEC大鼠腸壁病理組織學的影響35-44
• 1 材料35
• 1.1 試驗動物及分組35
• 1.2 主要儀器35
• 1.3 主要試劑35
• 1.4 相關試劑的配制35
• 1.4.1 益生菌的配制35
• 1.4.2 其他試劑的配制35
• 2 方法35-36
• 2.1 試驗分組36
• 2.2 樣品的采集和固定36
• 2.3 石蠟切片的制作36
• 2.4 掃描電鏡36
• 2.5 數據處理36
• 3 結果36-42
• 3.1 增重36-37
• 3.2 病理學觀察37-38
• 3.3 血液學變化38-39
• 3.4 病理組織學變化39-40
• 3.5 病理學評分40-41
• 3.6 超微結構變化41-42
• 4 討論42-44
• 試驗三 益生菌對NEC大鼠腸壁中ITF和相關細胞因子表達的影響44-58
• 1 材料44-45
• 1.1 試驗動物及分組44
• 1.2 主要儀器44
• 1.3 主要試劑44
• 1.4 相關試劑的配制44-45
• 1.4.1 0.1% DEPC水的配制44-45
• 1.4.2 50×TAE的配制45
• 2 方法45-48
• 2.1 樣品采集45
• 2.2 熒光實時定量PCR法檢測腸壁組織中相關基因的mRNA表達45-47
• 2.2.1 引物設計45-46
• 2.2.2 總RNA提取46
• 2.2.3 RNA濃度和完整性檢測46
• 2.2.4 cDNA合成46-47
• 2.2.5 cDNA濃度調整47
• 2.2.6 RT-PCR條件47
• 2.2.7 基因相對表達量的計算47
• 2.3 ELISA法檢測腸壁組織中相關因子蛋白的表達量47-48
• 2.3.1 試驗材料48
• 2.3.2 方法48
• 2.4 數據處理48
• 3 結果48-55
• 3.1 總RNA提取結果48-49
• 3.2 引物特異性49-50
• 3.3 腸壁組織中IL-6、CXCL1、TNF-α、PAF和ITF基因相對表達量的變化50-53
• 3.3.1 腸壁組織中IL-6 mRNA相對表達量的變化50-51
• 3.3.2 腸壁組織中CXCL1 mRNA相對表達量的變化51
• 3.3.3 腸壁組織中TNF-α mRNA相對表達量的變化51-52
• 3.3.4 腸壁組織中PAF mRNA相對表達量的變化52
• 3.3.5 腸壁組織中ITF mRNA相對表達量的變化52-53
• 3.4 腸壁組織中相關基因蛋白的表達情況53-55
• 3.4.1 腸壁組織中IL-6含量的變化53
• 3.4.2 腸壁組織中CXCL1含量的變化53-54
• 3.4.3 腸壁組織中TNF-α含量的變化54
• 3.4.4 腸壁組織中PAF含量的變化54-55
• 3.4.5 腸壁組織中ITF含量的變化55
• 4 討論55-58
• 全文總結58-59
• 參考文獻59-68
• 致謝68-69
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文69-70

【相似文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

1 楊建萍,劉耕陶;酞丁安在大鼠體內的吸收、分布和排泄[J];中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志;2005年04期

2 符路娣;蔡海云;;介紹一種簡便的大鼠灌胃方法[J];中獸醫(yī)學雜志;2006年03期

3 羅麗華,陳宜峰,單祥年,曹筱梅;大鼠(Rattus norvegicus)微量血培養(yǎng)和染色體標本制作的方法[J];動物學研究;1980年03期

4 辛丘巖,曹一亮,馬振凱,張德金,李美娟;磁處理水對大鼠生長影響的試驗(摘要)[J];獸醫(yī)大學學報;1986年03期

5 王繼玉,劉鑫,吳治禮,戴清文,樊璞;耕牛鉬中毒的研究(Ⅵ報)——銅鉬鎘在大鼠體內的相互影響[J];江西農業(yè)大學學報;1986年03期

6 王玉琳;朱宣人;;蕨和毛葉蕨對大鼠致瘤作用的實驗研究[J];甘肅農大學報;1986年02期

7 AhmedG.;金月英;;銅鎘鐵鉬錳對大鼠硒利用的影響[J];國外畜牧科技;1987年02期

8 王穎;;蛋白物質使嗜酒大鼠戒酒[J];生物技術通報;1991年07期

9 徐晶;吳桂林;馬莉;王瓏;閻銘杰;;SD大鼠生長用飼料配方的研究[J];飼料研究;1991年01期

10 李傳玉;張波;李振邦;黃伏連;田紹文;胡新天;;大鼠成年前異常生活環(huán)境對其成年后恐懼記憶的影響(英文)[J];動物學研究;2009年01期

中國重要會議論文全文數據庫 前10條

1 尹音;孫振宇;胡敏;李冬霞;;持續(xù)性高正加速度對大鼠顳頜關節(jié)損傷的作用[A];第八屆全國顳下頜關節(jié)病學及（牙合）學大會論文匯編[C];2011年

2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;

本文編號：341414