目的通過建立同型半胱氨酸（Homocysteine,Hcy）誘導(dǎo)的仔鼠先天性心臟�。–ongenital heart defect,CHD）模型,觀察仔鼠心臟畸形情況,探討不同劑量的Hcy對(duì)CHD仔鼠心肌病理?yè)p害程度與血清反應(yīng)因子（Serum response factor,SRF）表達(dá)水平的關(guān)系,進(jìn)一步探討Hcy導(dǎo)致CHD的分子機(jī)制。方法40只S-D孕鼠隨機(jī)分為四組:低劑量Hcy建模組（A組）、高劑量Hcy建模組（B組）,高劑量Hcy+FA+VitB₁₂干預(yù)組（C組）,對(duì)照組（D組）,每組各10只。大鼠妊娠第7～17天腹腔注射不同劑量的Hcy:A組1%Hcy 0.1ml/10g.Wt/d、B組2%Hcy 0.1ml/10g.Wt/d、C組2%Hcy 0.1ml/10g.Wt/d、D組用生理鹽水0.1ml/10g.Wt/d注射,C組自確定妊娠起至分娩,按FA 0.05mg/10g.Wt/d+VitB₁₂ 1mg/10g.Wt/d飲水喂養(yǎng)。分娩當(dāng)天解剖仔鼠,體視顯微鏡觀察仔鼠心臟畸形情況。A、B、C三組選取CHD仔鼠心臟各2例,D組選取非CHD... 

【文章來(lái)源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

部分心肌組織標(biāo)本RNAI%瓊脂糖凝膠電泳圖

取PcR擴(kuò)增產(chǎn)物1川，2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)逆轉(zhuǎn)錄的結(jié)果，應(yīng)用凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)分析有無(wú)目的基因S邵基因及管家基因GAPDH的擴(kuò)增，從而判斷cDNA合成的質(zhì)量并判斷目的片段的大小。見圖2一2，與DNAM田上er比照，各片段的PCR反應(yīng)產(chǎn)物的長(zhǎng)度與所設(shè)計(jì)的各片段大小預(yù)期值符合，特異性較理想，可進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR。電泳條件:電壓80V;時(shí)間20min。圖2一SRF基因及G人衛(wèi)DH擴(kuò)增產(chǎn)物2%瓊脂糖凝膠電泳圖1、2為SRF，3、4為GA衛(wèi)DH，片段大小分別為152帥，140飾2.3.4.5實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)cDNA使用 SYBRGreenl熒光染料進(jìn)行定量PCR反應(yīng)，反應(yīng)體系混勻后放入PCR熱循環(huán)儀中進(jìn)行。優(yōu)化循環(huán)條件及退火溫度后進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)。反應(yīng)體系

增以從72℃開始緩慢升溫，系統(tǒng)定時(shí)檢測(cè)各管的熒光強(qiáng)度，并以溫度為橫坐標(biāo)，以該溫度相對(duì)熒光強(qiáng)度的變化為縱坐標(biāo)，自動(dòng)繪制熔解曲線，熔解曲線的波峰所在的溫度為熔點(diǎn)溫度(Tm)，在88℃左右，說明引物特異性較好(見圖2一)。圖2一4實(shí)時(shí)熒光定量PCR熔解曲線圖③相對(duì)定量公式及表達(dá)量按照Livak和Schttgen設(shè)計(jì)的比較閩值法來(lái)測(cè)定目的基因的相對(duì)表達(dá)的方法，該方法根據(jù)數(shù)學(xué)推導(dǎo)公式得出目的基因的量:目的基因量=2一△△Ct

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]湖南省出生缺陷發(fā)生的動(dòng)態(tài)分析[J]. 杜其云,林愛云,唐趙丹.  中國(guó)婦幼保健. 2007(31)
[2]圍孕期補(bǔ)充多種維生素可減少子代某些先天畸形的發(fā)生[J]. 朱毓純,楊慧霞,高雪蓮.  中華圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)雜志. 2006(05)
[3]同型半胱氨酸、同型半胱氨酸誘導(dǎo)基因-2抗體和葉酸對(duì)人胚心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響[J]. 趙麗君,董靜霞,畢振伍,呂丹瑜,李英.  解剖學(xué)報(bào). 2005(04)
[4]細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法(綜述)[J]. 矯毓娟,劉江紅.  中國(guó)神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志. 2004(01)
[5]同型半胱氨酸體內(nèi)外誘導(dǎo)鼠胚胎心肌細(xì)胞凋亡的研究[J]. 劉虹,李勇,葉鴻瑁,李松,管增偉,胡白和,趙智榕.  中國(guó)生育健康雜志. 2002(04)
[6]血漿同型半胱氨酸、葉酸、5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與先天性心臟病的相關(guān)性研究[J]. 劉虹,李松,葉鴻瑁,韓玲,孟昭亨,朱慧萍,郝玲,李勇.  中華圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)雜志. 2002(02)
[7]HCY-2基因和同型半胱氨酸與雞胚先天性心臟畸形發(fā)生的關(guān)系[J]. 李勇,李松,陳光慧,胡白和,孟昭亨,陳星,趙如冰,張晨暉,劉虹,趙智榕,湯健,李竹.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2000(02)
[8]同型半胱氨酸對(duì)雞胚早期心血管發(fā)育的影響[J]. 李勇,李竹,陳星,齊佩文,李松.  中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志. 1999(03)



本文編號(hào)：3349863