第一部分高氧對(duì)早產(chǎn)大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)分化的影響【目的】建立高氧細(xì)胞損傷模型,探討高氧對(duì)早產(chǎn)大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞（AECⅡ）增殖和轉(zhuǎn)分化的影響,為高氧肺損傷時(shí)肺泡化障礙及肺損傷修復(fù)機(jī)制的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)�！痉椒ā吭囵B(yǎng)早產(chǎn)大鼠（孕19～20 d）AECⅡ,于接種15 h貼壁并更換培養(yǎng)液后,隨機(jī)分為空氣組和高氧組。高氧組通入95% O2-5% CO2 10 min后置于370C、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),空氣組直接置于370C、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。于培養(yǎng)后24、48及72 h,收獲各組細(xì)胞。高氧對(duì)早產(chǎn)大鼠AECII轉(zhuǎn)分化的影響:利用倒置相差顯微鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)變化;免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測AECⅡ特異性肺泡表面活性蛋白-C（SP-C）及肺泡Ⅰ型上皮細(xì)胞（AECⅠ）特異性蛋白水通道蛋白5（AQP5）的表達(dá);RT-PCR和流式細(xì)胞術(shù)分別檢測SP-C、AQP5 mRNA及蛋白的表達(dá)。高氧對(duì)早產(chǎn)大鼠AECII增殖的影響:利用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞計(jì)數(shù);臺(tái)盼藍(lán)拒染法檢測細(xì)胞活力;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期;免疫熒光法檢測Ki67表達(dá)�！窘Y(jié)果】空氣組AECII在培養(yǎng)后其數(shù)目不斷增... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

倒置相差顯微鏡下AECII形態(tài)改變(×200)

圖 2 透射電鏡所見 AEC II（A）及 AECⅠ（B），箭頭所示為板層體。、高氧對(duì) AECII 增殖和細(xì)胞活力的影響空氣組 AECII 在培養(yǎng) 24、48 及 72 h，其細(xì)胞數(shù)目不斷增加。高氧組給氧的細(xì)胞數(shù)目有少量增加，但隨給氧時(shí)間延長，細(xì)胞增殖明顯受抑。高氧組給 72 h，細(xì)胞數(shù)目明顯低于同時(shí)間點(diǎn)空氣組，兩組相比有顯著性差異（P<0.藍(lán)排斥試驗(yàn)檢測細(xì)胞活力可見：直到培養(yǎng) 72 h，空氣組(93.5±2.6)%的細(xì)胞臺(tái)染。高氧組給氧最初 24 h，細(xì)胞活力尚可，但隨高氧暴露時(shí)間延長，高氧暴活力明顯低于同時(shí)間點(diǎn)空氣組（P<0.05），高氧暴露 72 h，細(xì)胞活力明顯0.01）。結(jié)果見表 1，圖 3A、3B。表 1 高氧對(duì) AECII 增殖和細(xì)胞活力的影響(n=5, ± s )組別 細(xì)胞數(shù)目×105細(xì)胞活力（%）0 h 24 h 48 h 72 h 0 h 24 h 48 h 72 h

17圖 4 B ki67 表達(dá)的免疫熒光檢測(×200)A：空氣 24 h；B：高氧 24 h；C：空氣 48 h；D：高氧 48 h；E：空氣 72 h；F：高氧 72 h免疫熒光檢測 ki67 表達(dá)可見，高氧暴露后 24、48 及 72 h，Ki67+細(xì)胞表達(dá)較相同時(shí)間點(diǎn)空氣組均明顯降低，且隨給氧時(shí)間延長，Ki67 表達(dá)逐漸降低。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]肺泡II型上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化[J]. 盧紅艷,常立文.  細(xì)胞生物學(xué)雜志. 2006(01)
[2]早產(chǎn)兒氧療與慢性肺疾病的防治[J]. 常立文.  小兒急救醫(yī)學(xué). 2005(06)
[3]Notch信號(hào)與大鼠肺發(fā)育的關(guān)系研究[J]. 張謙慎,常立文,劉漢楚,容志惠,祝華平,陳紅兵,李文斌.  華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2004(03)
[4]國人胎兒肺泡發(fā)育與上皮細(xì)胞分化的透射電鏡觀察[J]. 孔祥永,安靚,封志純.  第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2004(01)
[5]轉(zhuǎn)分化研究進(jìn)展[J]. 孫麗新,湯家銘,成國祥.  中國生物工程雜志. 2004(01)
[6]胎鼠肺細(xì)胞的分離純化及原代培養(yǎng)[J]. 祝華平,常立文,李文斌,劉漢楚,張謙慎.  華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2003(06)
[7]肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞形態(tài)與功能的研究進(jìn)展[J]. 柳琪林.  中國危重病急救醫(yī)學(xué). 2003(07)
[8]高濃度氧對(duì)早產(chǎn)鼠肺一氧化氮合酶表達(dá)的影響[J]. 馬麗亞,常立文,全裕鳳.  中國當(dāng)代兒科雜志. 2001(03)
[9]小鼠肺泡發(fā)育與肺泡上皮細(xì)胞分化的電鏡觀察[J]. 盧曉曄,黃中新,王檣.  解剖學(xué)研究. 2000(01)



本文編號(hào)：3286283