本文關(guān)鍵詞：艱難梭狀芽孢桿菌在喘息兒童糞便中的變化及免疫相關(guān)性的探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：通過實時熒光定量PCR技術(shù)，檢測喘息兒童腸道糞便中艱難梭狀芽胞桿菌的含量，同時采用ELISA方法，，檢測喘息兒童血清中IL-2及IL-4濃度，以探討毛細(xì)支氣管炎（簡稱毛支）與支氣管哮喘發(fā)作期（簡稱哮喘發(fā)作）兩種疾病與艱難梭狀芽孢桿菌的相關(guān)性，并試圖闡釋毛支與哮喘發(fā)作患兒免疫機制的改變。 方法：實驗組：所需糞便及血液樣本來源于2013年10月-2014年10月，吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院小兒呼吸一科，住院毛支患兒及哮喘發(fā)作患兒。對照組：糞便樣本及血液來源于相同時間，吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院兒外科無感染先天性畸形，如疝氣、鞘膜積液等疾病患兒。實驗組中毛支患兒66例，哮喘發(fā)作患兒20例；對照組患兒68例。應(yīng)用試劑盒提取糞便樣本中總DNA，選擇艱難梭狀芽胞桿菌特異性基因16S rRNA作為擴展區(qū)，設(shè)計該菌的特異性引物。在常規(guī)PCR擴增出目的片段的基礎(chǔ)上，進行回收純化，提高DNA回收量，測定模板濃度，用作標(biāo)準(zhǔn)品。應(yīng)用SYBR Green Ⅰ染料法，對待測樣品中艱難梭狀芽胞桿菌含量進行定量分析。使用GraphPad Prism5軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。使用ELISA試劑盒，按照說明書的具體步驟對留取的實驗組及對照組全部血清進行IL-2及IL-4檢測，并使用curve expert1.4統(tǒng)計學(xué)分析，探討艱難梭狀芽孢桿菌在喘息兒童糞便中的變化及兒童毛支與哮喘發(fā)作期免疫機制的改變。 結(jié)果： 1.實時熒光定量PCR技術(shù)可檢測出人體腸道糞便中艱難梭狀芽孢桿菌的含量，并且特異性強、重復(fù)性好、靈敏度高。 2.毛細(xì)支氣管炎患兒糞便中艱難梭狀芽胞桿菌含量與對照組相比升高p＝0.0349，有統(tǒng)計學(xué)意義。 3.支氣管哮喘發(fā)作期患兒糞便中艱難梭狀芽胞桿菌含量與正常對照組相比升高p＝0.044，有統(tǒng)計學(xué)意義。 4.毛細(xì)支氣管炎患兒與支氣管哮喘發(fā)作期患兒糞便中艱難梭狀芽胞桿菌含量相比無明顯變化p＝0.7219。 5.毛細(xì)支氣管炎及支氣管哮喘發(fā)作期患兒血清內(nèi)IL-2水平與對照組相比升高p＝0.0224，有統(tǒng)計學(xué)意義。 6.毛細(xì)支氣管炎及支氣管哮喘發(fā)作期患兒血清內(nèi)IL-4水平與對照組相比升高p＝0.0373，有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： 1.本實驗所使用的實時熒光定量PCR技術(shù)特異性強、重復(fù)性好，適于對人腸道糞便中艱難梭狀芽胞桿菌含量的檢測。 2.毛細(xì)支氣管炎患兒及支氣管哮喘患兒腸道內(nèi)梭狀芽胞桿菌含量較正常對照組含量明顯增多，提示提示艱難梭狀芽胞桿菌含量的增加可能與喘息性疾病相關(guān)。 3.毛細(xì)支氣管炎與支氣管哮喘患兒腸道內(nèi)艱難梭狀芽孢桿菌含量無明顯變化，推測二者可能是一種疾病的不同階段。 4.艱難梭狀芽孢桿菌數(shù)量的增多可能與毛細(xì)支氣管炎與支氣管哮喘患兒血清內(nèi)IL-2、IL-4濃度升高有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：實時熒光定量PCR 艱難梭狀芽胞桿菌 毛細(xì)支氣管炎 支氣管哮喘 Th1/Th2
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R725.6
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文縮略詞8-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 綜述12-17
• 2.1 哮喘及發(fā)病機制12-13
• 2.2 毛細(xì)支氣管炎及發(fā)病機制13
• 2.3 腸道菌群的簡介及研究現(xiàn)狀13-14
• 2.4 艱難梭狀芽孢桿菌14-15
• 2.5 影響腸道菌群定植的因素15
• 2.6 腸道菌群與各種疾病的相關(guān)性15-16
• 2.7 展望16-17
• 第3章 資料與方法17-25
• 3.1 研究對象17
• 3.1.1 入選標(biāo)準(zhǔn)17
• 3.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)17
• 3.2 主要試劑及儀器17-18
• 3.2.1 實驗所需試劑盒及試劑17-18
• 3.2.2 實驗所需儀器18
• 3.3 實驗方法18-23
• 3.3.1 便標(biāo)本定量 PCR 實驗方法18-20
• 3.3.2 血標(biāo)本 LISA 實驗方法20-23
• 3.4 研究內(nèi)容23
• 3.5 觀察指標(biāo)23-24
• 3.5.1 ELISA 結(jié)果觀察指標(biāo)24
• 3.6 統(tǒng)計學(xué)處理24-25
• 第4章 結(jié)果25-31
• 4.1 實時熒光定量 PCR 結(jié)果25-28
• 4.1.1 試劑盒提取糞便 DNA 結(jié)果25
• 4.1.2 定量 PCR 標(biāo)準(zhǔn)曲線的評價25-26
• 4.1.3 擴增曲線-靈敏度評價26
• 4.1.4 穩(wěn)定性評價26-27
• 4.1.5 溶解曲線--特異性評價27
• 4.1.6 喘息患兒糞便內(nèi)艱難梭狀芽孢桿菌定量結(jié)果27-28
• 4.2 試劑盒檢測 IL-2 及 IL-4 結(jié)果28-31
• 4.2.1 IL-2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作28-29
• 4.2.2 IL-2 統(tǒng)計學(xué)結(jié)果分析29
• 4.2.3 IL-4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作29-30
• 4.2.4 IL-4 統(tǒng)計學(xué)結(jié)果分析30-31
• 第5章 討論31-36
• 第6章 結(jié)論36-37
• 參考文獻37-41
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果41-42
• 致謝42

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 劉晶晶;袁耀宗;;難辨梭狀芽孢桿菌與炎癥性腸病[J];國際消化病雜志;2010年01期

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3 管遠(yuǎn)志;;腸道菌群及其生物學(xué)意義[J];臨床兒科雜志;2009年11期

4 張?zhí)N芳;汪麗萍;陳光福;;嬰兒喂養(yǎng)方式與兒童支氣管哮喘關(guān)聯(lián)性的meta分析[J];臨床兒科雜志;2013年02期

  本文關(guān)鍵詞：艱難梭狀芽孢桿菌在喘息兒童糞便中的變化及免疫相關(guān)性的探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：322850