腸道病毒71型分子流行病學(xué)調(diào)查及miRNA抑制腸道病毒71型體外復(fù)制的研究
發(fā)布時(shí)間:2021-04-26 05:26
2008年3月份,安徽省阜陽市發(fā)生了較大規(guī)模的手足口病疫情。隨后,疫情蔓延至全國。2008年5月2日,衛(wèi)生部已將手足口病列入傳染病防治法規(guī)定的丙類傳染病進(jìn)行管理。近年來,手足口病疫情不斷暴發(fā),手足口病發(fā)病數(shù)位居丙類傳染病之首,對我國人民的衛(wèi)生健康造成了嚴(yán)重威脅,今后一段時(shí)間疫情可能進(jìn)一步上升,防控形勢十分嚴(yán)峻。手足口。℉and, foot and mouth disease, HFMD)是由小RNA病毒科的多種腸道病毒引起的傳染病,主要有:柯薩奇病毒A組的4、5、7、9、10、16型;柯薩奇病毒B組的2、5型;腸道病毒71型以及?刹《,其中以柯薩奇病毒A16型(CoxA16)和腸道病毒71型(EV71)最常見。一般來說,手足口病的癥狀輕微,約在10-14天左右自愈。但EV71引起的手足口病有時(shí)引起神經(jīng)系統(tǒng)癥狀,甚至導(dǎo)致死亡。目的:本研究擬建立針對手足口病和EV71的快速檢測方法,持續(xù)監(jiān)測手足口病;調(diào)查了解鎮(zhèn)江市手足口病的流行病學(xué)特點(diǎn),在手足口病的高發(fā)時(shí)段和高發(fā)人群加強(qiáng)防控;研究了解江蘇省EV71的基因特征,以便更好的了解EV71病毒的起源地、變異規(guī)律和流行途徑,防范EV71的大規(guī)模...
【文章來源】:江蘇大學(xué)江蘇省
【文章頁數(shù)】:120 頁
【學(xué)位級別】:博士
【文章目錄】:
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
1.1 手足口病
1.1.1 手足口病簡介
1.1.2 手足口病流行現(xiàn)狀
1.1.3 手足口病病原學(xué)
1.1.4 手足口病的鑒別診斷和檢測方法
1.2 腸道病毒71型
1.2.1 腸道病毒71型的簡介
1.2.2 腸道病毒71型的分子流行病學(xué)
1.2.3 病毒的感染與復(fù)制
1.2.4 腸道病毒71型的致病性和嗜神經(jīng)性
1.2.5 腸道病毒71型的治療
1.3 microRNA
1.3.1 microRNA簡介
1.3.2 病毒microRNA與細(xì)胞microRNA
1.3.3 腸道病毒71型與microRNA
1.4 本研究的目的和立題依據(jù)
1.5 研究內(nèi)容
第二章 用病原和腸道病毒71型檢測方法的建立
2.1 材料和方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 結(jié)果
2.2.1 RNA標(biāo)準(zhǔn)品的制備和定量
2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
2.2.3 多重?zé)晒釸T-PCR方法的建立
2.2.4 多重?zé)晒釸T-PCR方法的特異性、靈敏度、重復(fù)性
2.2.5 多重?zé)晒釸T-PCR的臨床檢測和驗(yàn)證
2.3 討論
第三章 鎮(zhèn)江市2009-2010年手足口病的流行病學(xué)調(diào)查
3.1 材料與方法
3.1.1 流行病學(xué)資料
3.1.2 其他資料的來源
3.1.3 衛(wèi)生部發(fā)布的《手足口病預(yù)防控制指南》規(guī)定的手足口病病例診斷
3.1.4 統(tǒng)計(jì)與分析方法
3.2 結(jié)果
3.2.1 鎮(zhèn)江市手足口病的疫情情況
3.2.2 鎮(zhèn)江市手足口病的流行病學(xué)特點(diǎn)
3.2.6 鎮(zhèn)江市手足口病的病原學(xué)
3.2.7 鎮(zhèn)江市重癥手足口病的分析
3.3 討論
第四章 江蘇省腸道病毒71型分子流行病學(xué)調(diào)查
4.1 材料和方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 結(jié)果
4.2.1 樣品EV71/EV-U雙重?zé)晒舛縍T-PCR檢測結(jié)果
4.2.2 EV71vp1基因擴(kuò)增結(jié)果
4.2.3 EV71基因進(jìn)化樹分析
4.3 討論
第五章 腸道病毒71型感染神經(jīng)細(xì)胞后microRNA的變化
5.1 材料與方法
5.1.1 材料
5.1.2 方法
5.2 結(jié)果
5.2.1 EV71病毒分離和鑒定
5.2.2 EV71病毒滴度(TCID50)檢測
5.2.3 EV71病毒感染人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞
5.2.4 總RNA的提取
5.2.5 EV71病毒感染SK-N-SH細(xì)胞前后miRNA芯片雜交
5.2.6 EV71病毒感染SK-N-SH細(xì)胞前后miRNA芯片結(jié)果
5.3 討論
第六章 實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證基因芯片結(jié)果
6.1 材料與方法
6.1.1 主要試劑
6.1.2 主要儀器
6.1.3 方法
6.2 結(jié)果
6.2.1 總RNA的提取
6.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的結(jié)果
6.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR與芯片結(jié)果的比較
6.3 討論
第七章 miRNA對腸道病毒71型的調(diào)控
7.1 材料與方法
7.1.1 材料
7.1.2 方法
7.2 結(jié)果
7.2.1 miRNA模擬體和抑制體轉(zhuǎn)染SK-N-SH細(xì)胞
7.2.2 SK-N-SH細(xì)胞病變效應(yīng)比較
7.2.3 miRNA對EV71VP1蛋白表達(dá)的影響
7.2.4 miRNA對EV71病毒滴度(TCID50)的影響
7.2.5 miRNA對EV71RNA的影響
7.2.6 qRT-PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)染后miRNA含量變化
7.2.7 利用生物學(xué)軟件預(yù)測miRNA的靶基因
7.3 討論
第八章 主要結(jié)論及展望
8.1 主要結(jié)論
8.2 創(chuàng)新點(diǎn)
8.3 展望
參考文獻(xiàn)
在讀期間已發(fā)表的論文
致謝
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]HBV整合引起HepG2細(xì)胞microRNA表達(dá)譜變化分析[J]. 韓俊峰,阮志華,張蓓,吳玉章. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2007(22)
[2]北京市兒童手足口病與腸道病毒71型和柯薩奇病毒A組16型感染有關(guān)[J]. 朱汝南,錢淵,鄧潔,邢江峰,趙林清,王芳,廖斌,任曉旭,李穎,張琪,李杰. 中華流行病學(xué)雜志. 2007(10)
[3]1970~2004年全球腸道病毒71型分離株的分子流行病學(xué)分析[J]. 董曉楠,應(yīng)劍,陳應(yīng)華. 科學(xué)通報(bào). 2007(09)
[4]柯薩奇病毒A組16型中國分離株(Cox.A16 SHZH00-1)全基因組序列測定及分析[J]. 李琳琳,何雅晴,朱俊萍,薛穎,朱雅芳,徐星曄,金奇. 病毒學(xué)報(bào). 2005(03)
[5]腸道病毒71型的RT-PCR診斷及基因特征[J]. 崔愛利,許文波,李秀珠,胡家瑜,凌華,唐偉,楊智宏,張燕,陳立,Hiroyuki Shimizu. 病毒學(xué)報(bào). 2004(02)
[6]小兒手足口病并暴發(fā)性心肌炎4例報(bào)告[J]. 王曉華,劉維嬋. 臨床兒科雜志. 2003(01)
[7]手-足-口病36例誤診分析[J]. 邵海明,林洪宇,鄭光衛(wèi). 臨床薈萃. 2002(21)
[8]小兒手足口病1602例報(bào)告[J]. 王曉華,李文琳. 中華流行病學(xué)雜志. 2001(04)
[9]手足口病流行特點(diǎn)及其防治[J]. 何家鑫,沈曉娜. 海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志. 2001(03)
[10]兒童梅毒誤診為手足口病1例[J]. 張振國,劉曉虹,張振強(qiáng). 中國麻風(fēng)皮膚病雜志. 2000(01)
本文編號:3160816
【文章來源】:江蘇大學(xué)江蘇省
【文章頁數(shù)】:120 頁
【學(xué)位級別】:博士
【文章目錄】:
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
1.1 手足口病
1.1.1 手足口病簡介
1.1.2 手足口病流行現(xiàn)狀
1.1.3 手足口病病原學(xué)
1.1.4 手足口病的鑒別診斷和檢測方法
1.2 腸道病毒71型
1.2.1 腸道病毒71型的簡介
1.2.2 腸道病毒71型的分子流行病學(xué)
1.2.3 病毒的感染與復(fù)制
1.2.4 腸道病毒71型的致病性和嗜神經(jīng)性
1.2.5 腸道病毒71型的治療
1.3 microRNA
1.3.1 microRNA簡介
1.3.2 病毒microRNA與細(xì)胞microRNA
1.3.3 腸道病毒71型與microRNA
1.4 本研究的目的和立題依據(jù)
1.5 研究內(nèi)容
第二章 用病原和腸道病毒71型檢測方法的建立
2.1 材料和方法
2.1.1 材料
2.1.2 方法
2.2 結(jié)果
2.2.1 RNA標(biāo)準(zhǔn)品的制備和定量
2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
2.2.3 多重?zé)晒釸T-PCR方法的建立
2.2.4 多重?zé)晒釸T-PCR方法的特異性、靈敏度、重復(fù)性
2.2.5 多重?zé)晒釸T-PCR的臨床檢測和驗(yàn)證
2.3 討論
第三章 鎮(zhèn)江市2009-2010年手足口病的流行病學(xué)調(diào)查
3.1 材料與方法
3.1.1 流行病學(xué)資料
3.1.2 其他資料的來源
3.1.3 衛(wèi)生部發(fā)布的《手足口病預(yù)防控制指南》規(guī)定的手足口病病例診斷
3.1.4 統(tǒng)計(jì)與分析方法
3.2 結(jié)果
3.2.1 鎮(zhèn)江市手足口病的疫情情況
3.2.2 鎮(zhèn)江市手足口病的流行病學(xué)特點(diǎn)
3.2.6 鎮(zhèn)江市手足口病的病原學(xué)
3.2.7 鎮(zhèn)江市重癥手足口病的分析
3.3 討論
第四章 江蘇省腸道病毒71型分子流行病學(xué)調(diào)查
4.1 材料和方法
4.1.1 材料
4.1.2 方法
4.2 結(jié)果
4.2.1 樣品EV71/EV-U雙重?zé)晒舛縍T-PCR檢測結(jié)果
4.2.2 EV71vp1基因擴(kuò)增結(jié)果
4.2.3 EV71基因進(jìn)化樹分析
4.3 討論
第五章 腸道病毒71型感染神經(jīng)細(xì)胞后microRNA的變化
5.1 材料與方法
5.1.1 材料
5.1.2 方法
5.2 結(jié)果
5.2.1 EV71病毒分離和鑒定
5.2.2 EV71病毒滴度(TCID50)檢測
5.2.3 EV71病毒感染人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞
5.2.4 總RNA的提取
5.2.5 EV71病毒感染SK-N-SH細(xì)胞前后miRNA芯片雜交
5.2.6 EV71病毒感染SK-N-SH細(xì)胞前后miRNA芯片結(jié)果
5.3 討論
第六章 實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證基因芯片結(jié)果
6.1 材料與方法
6.1.1 主要試劑
6.1.2 主要儀器
6.1.3 方法
6.2 結(jié)果
6.2.1 總RNA的提取
6.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的結(jié)果
6.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR與芯片結(jié)果的比較
6.3 討論
第七章 miRNA對腸道病毒71型的調(diào)控
7.1 材料與方法
7.1.1 材料
7.1.2 方法
7.2 結(jié)果
7.2.1 miRNA模擬體和抑制體轉(zhuǎn)染SK-N-SH細(xì)胞
7.2.2 SK-N-SH細(xì)胞病變效應(yīng)比較
7.2.3 miRNA對EV71VP1蛋白表達(dá)的影響
7.2.4 miRNA對EV71病毒滴度(TCID50)的影響
7.2.5 miRNA對EV71RNA的影響
7.2.6 qRT-PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)染后miRNA含量變化
7.2.7 利用生物學(xué)軟件預(yù)測miRNA的靶基因
7.3 討論
第八章 主要結(jié)論及展望
8.1 主要結(jié)論
8.2 創(chuàng)新點(diǎn)
8.3 展望
參考文獻(xiàn)
在讀期間已發(fā)表的論文
致謝
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]HBV整合引起HepG2細(xì)胞microRNA表達(dá)譜變化分析[J]. 韓俊峰,阮志華,張蓓,吳玉章. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2007(22)
[2]北京市兒童手足口病與腸道病毒71型和柯薩奇病毒A組16型感染有關(guān)[J]. 朱汝南,錢淵,鄧潔,邢江峰,趙林清,王芳,廖斌,任曉旭,李穎,張琪,李杰. 中華流行病學(xué)雜志. 2007(10)
[3]1970~2004年全球腸道病毒71型分離株的分子流行病學(xué)分析[J]. 董曉楠,應(yīng)劍,陳應(yīng)華. 科學(xué)通報(bào). 2007(09)
[4]柯薩奇病毒A組16型中國分離株(Cox.A16 SHZH00-1)全基因組序列測定及分析[J]. 李琳琳,何雅晴,朱俊萍,薛穎,朱雅芳,徐星曄,金奇. 病毒學(xué)報(bào). 2005(03)
[5]腸道病毒71型的RT-PCR診斷及基因特征[J]. 崔愛利,許文波,李秀珠,胡家瑜,凌華,唐偉,楊智宏,張燕,陳立,Hiroyuki Shimizu. 病毒學(xué)報(bào). 2004(02)
[6]小兒手足口病并暴發(fā)性心肌炎4例報(bào)告[J]. 王曉華,劉維嬋. 臨床兒科雜志. 2003(01)
[7]手-足-口病36例誤診分析[J]. 邵海明,林洪宇,鄭光衛(wèi). 臨床薈萃. 2002(21)
[8]小兒手足口病1602例報(bào)告[J]. 王曉華,李文琳. 中華流行病學(xué)雜志. 2001(04)
[9]手足口病流行特點(diǎn)及其防治[J]. 何家鑫,沈曉娜. 海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志. 2001(03)
[10]兒童梅毒誤診為手足口病1例[J]. 張振國,劉曉虹,張振強(qiáng). 中國麻風(fēng)皮膚病雜志. 2000(01)
本文編號:3160816
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