本文關(guān)鍵詞：IFN-λ1-3 mRNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法的建立及IFN-λ1的表達(dá)與呼吸道病原關(guān)系的初探，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分IFN-λ1-3mRNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法的建立目的：建立人IFN-λ1.3型mRNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)檢測(cè)方法。方法：根據(jù)人IFN-λ1-3型mRNA的基因序列合成特異性引物及探針,用體外轉(zhuǎn)錄方法制備IFN-λ1-3的mRNA標(biāo)準(zhǔn)品,建立人IFN-λ1-3型mRNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法。結(jié)果：IFN-λ1-3型mRNA的載量與對(duì)應(yīng)的CT值有良好的線性關(guān)系；擴(kuò)增效率均在90%-100%之間；靈敏度分別是：1×100copies/μL、 1×101copies/μL、1×101copies/μL;變異系數(shù)均小于2%；各型問無交叉反應(yīng)。結(jié)論：成功建立了IFN-λ1-3型mRNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法。第二部分IFN-λ1的表達(dá)與呼吸道病原的關(guān)系的初探目的：了解呼吸道上皮細(xì)胞中IFN-λ1表達(dá)水平與呼吸道病原之間的關(guān)系,為開拓兒童呼吸道病毒感染新的治療方法提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和科學(xué)根據(jù)。方法：1.采集郴州地區(qū)2013年7月～2014年6月為期一年間就診于郴州市第一人民醫(yī)院兒科的急性呼吸道感染住院患兒鼻咽拭子標(biāo)本共489份,并按照年齡及標(biāo)本采集日期配對(duì)的原則,同時(shí)在該院兒保門診收集健康兒童鼻咽拭子244份為設(shè)為對(duì)照組,將收集的鼻咽拭子加入2ml病毒保存液并置于-80℃冰箱保存。2.采用所建立的熒光定量PCR方法檢測(cè)樣本中IFN-λ1 mRNA、管家基因甘油醛-3-磷酸脫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase GAPDH)mRNA,另外同時(shí)對(duì)本批標(biāo)本進(jìn)行常見病原(常見呼吸道病毒18種,細(xì)菌11種)進(jìn)行篩查。3.比較不同病原感染患兒鼻咽拭子標(biāo)本中IFN-λ1的表達(dá)差異。結(jié)果：1. 病例組中IFN-λ1表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(t=2.276P=0.027)。2. 病毒感染病例中IFN-λ1的總體表達(dá)水平與正常對(duì)照組無顯著差異(t=0.57 P=0.57),但是RSV感染的病例中IFN-λ1的表達(dá)量明顯高于正常對(duì)照組(t=2.25 P=0.026),IFN--λ1的表達(dá)量與RSV的載量無明顯相關(guān)性(r=0.12 P=0.41)。3.檢出HRV感染的病例組中IFN-λ1的表達(dá)量較檢出HRV感染的對(duì)照組顯著明顯升高(t=2.8 P=0.015)。4.RSV感染的病例中IFN-λ1的表達(dá)量較HRV顯著升高(t=2.19P=0.045)。5.細(xì)菌感染病例IFN-λ1表達(dá)水平與正常對(duì)照組比較無顯著差異(t=0.17 P=0.87)。結(jié)論：1.IFN-λ1參與了呼吸道病毒感染的發(fā)病過程；2.RSV可以誘導(dǎo)IFN-λ1表達(dá)且強(qiáng)于HRV；3.呼吸道細(xì)菌感染可能對(duì)IFN-λ1表達(dá)無明顯誘導(dǎo)作用。
【關(guān)鍵詞】：IFN-λmRNA 熒光定量PCR 呼吸道病原 兒童
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R725.6
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 英文縮略詞表13-15
• 第一部分 IFN-λ1-3 mRNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法的建立15-29
• 前言15-16
• 1.1 實(shí)驗(yàn)儀器與耗材16-17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)試劑17
• 1.3 實(shí)驗(yàn)方法17-24
• 1.4 結(jié)果24-27
• 1.5 討論27-28
• 1.6 結(jié)論28-29
• 第二部分 IFN-λ1的表達(dá)與呼吸道病原的關(guān)系29-44
• 前言29-32
• 2.1 研究對(duì)象、標(biāo)本采集、材料32-33
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法33-35
• 2.3 統(tǒng)計(jì)方法35
• 2.4 結(jié)果35-41
• 2.5 討論41-44
• 2.6 結(jié)論44
• 本實(shí)驗(yàn)的不足之處44
• 展望44-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• λ干擾素的概況及與呼吸道病毒之間的研究進(jìn)展(文獻(xiàn)綜述)49-57
• 參考文獻(xiàn)54-57
• 附錄57-61
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果61-63
• 致謝63

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  本文關(guān)鍵詞：IFN-λ1-3 mRNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法的建立及IFN-λ1的表達(dá)與呼吸道病原關(guān)系的初探，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：314727