本文關(guān)鍵詞：山西地區(qū)苯丙氨酸羥化酶基因突變實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:85例患兒均來自山西省婦幼保健院新生兒篩查中心和門診、大同市婦幼保健院、長(zhǎng)治市婦幼保健院、運(yùn)城市婦幼保健院門診經(jīng)過各種檢查后確診為苯丙酮尿癥的患兒。年齡均在15天至7歲之間,其中48例為男性,37例為女性。初診時(shí)外周血苯丙氨酸濃度測(cè)定均在251-2621μmol/L,所有患兒在獲得了患兒家長(zhǎng)或監(jiān)護(hù)人的知情同意的情況下均進(jìn)行了血二氫喋啶還原測(cè)定、尿喋呤分析和四氫生物喋呤缺乏癥負(fù)荷試驗(yàn),將四氫生物喋呤缺乏癥排除掉。苯丙酮尿癥(phenylketonuria,PKU;OMIM 261600)是可以治愈的少數(shù)遺傳病之一,在我國(guó)的發(fā)病率約為1/11572,大部分患者是由于PAH基因突變,導(dǎo)致PAH酶活性降低或消失,使得苯丙氨酸不能轉(zhuǎn)化而在體內(nèi)大量積蓄,從而導(dǎo)致疾病的發(fā)生。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)苯丙酮尿癥的診斷方法耗時(shí)長(zhǎng)且相當(dāng)繁瑣,且這些方法僅適用于已經(jīng)出生患兒的診斷,不能應(yīng)用于產(chǎn)前篩查。因此,通過對(duì)山西地區(qū)PKU患者中PAH基因的突變位點(diǎn)及特征的研究,探討PKU基因診斷和產(chǎn)前篩查的方法,并能夠進(jìn)一步豐富中國(guó)人PAH基因突變數(shù)據(jù)庫(kù)。方法:1、收集山西地區(qū)各醫(yī)院確診為PKU的患兒標(biāo)本85例,用PCR體外擴(kuò)增技術(shù)對(duì)苯丙酮尿癥患者的第3、7和11號(hào)外顯子進(jìn)行擴(kuò)增,進(jìn)而用相應(yīng)的內(nèi)切酶進(jìn)行酶切突變位點(diǎn)分析;2、采用高分辨熔解曲線分析(High Resolution Melting,HRM)法檢測(cè)PKU患兒的5、6、7`、11和12號(hào)外顯子的常見的突變位點(diǎn)。3、對(duì)85例PKU患兒PAH基因13個(gè)外顯子進(jìn)行體外擴(kuò)增和測(cè)序,然后與正常序列進(jìn)行比對(duì),統(tǒng)計(jì)全部突變信息。結(jié)果:1、采用PCR-RFLP,對(duì)85例PKU患兒中PAH基因第3、7和11外顯子突變進(jìn)行檢測(cè),經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證后,兩者結(jié)果相符;2、本研究中,我們采用HRM法作為篩查工具,對(duì)85例PKU患者進(jìn)行了PAH基因的5、6、7、11和12外顯子及外顯子-內(nèi)含子交界區(qū)的突變篩查,經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證,PCR-HRM產(chǎn)物的檢測(cè)結(jié)果與第5、6、7、11和12外顯子PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果完全吻合。3、對(duì)85例患者PAH基因13個(gè)外顯子進(jìn)行序列分析,其中,L11fs X7、P69H、L98V、T372R和IVS11-1GC五個(gè)突變位點(diǎn)在HGMD數(shù)據(jù)庫(kù)中尚未報(bào)到,并得出R243Q、V399V和Y204C屬于山西地區(qū)的突變熱點(diǎn);結(jié)論:1、PCR-RFLP法具有重復(fù)性好、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確率高和低成本的特點(diǎn),為基層開展PAH基因檢測(cè)提供了簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的方法;2、HRM技術(shù)具有高準(zhǔn)確度、高通量、低成本的特點(diǎn),適用于PAH基因的常見突變位點(diǎn)篩查,也可用于新生兒PAH基因的產(chǎn)前診斷;3、通過對(duì)山西地區(qū)85例PKU患兒PAH基因的13個(gè)外顯子突變分析,結(jié)果顯示,患有苯丙氨酸缺乏癥的患者中突變頻率最高的位點(diǎn)是R243Q,為15.8%,其次為V399V和Y204C。L11fs X7、P69H、L98V、T372R和IVS11-1GC五個(gè)突變位點(diǎn)為本研究新發(fā)現(xiàn)。為山西地區(qū)PKU患兒PAH基因突變提供一定的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),也對(duì)我國(guó)PKU患者的基因突變資料庫(kù)奠定一定基礎(chǔ);4、本研究進(jìn)一步豐富了中國(guó)人PAH基因突變數(shù)據(jù)庫(kù)。
【關(guān)鍵詞】：PKU PAH基因 突變熱點(diǎn) PCR-RFLP HRM
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R440;R725.8
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 常用縮寫詞中英文對(duì)照表11-12
• 前言12-14
• 第一部分 應(yīng)用PCR-RFLP、HRM法檢測(cè)經(jīng)典型苯丙酮尿癥患者常見的突變位點(diǎn)..214-24
• 1 材料與方法14-20
• 1.1 研究對(duì)象14-15
• 1.2 研究方法15-20
• 2 結(jié)果20-23
• 2.1 PCR電泳圖20
• 2.2 PCR-RFLP檢測(cè)結(jié)果20
• 2.3 HRM分析結(jié)果20-22
• 2.4 DNA 測(cè)序結(jié)果22-23
• 3 討論23-24
• 第二部分 山西地區(qū)經(jīng)典型苯丙酮尿癥患者基因突變及苯丙酮尿癥基因型與表型關(guān)系研究24-36
• 1 材料與方法24-27
• 1.1 研究對(duì)象24
• 1.2 研究方法24-27
• 2 結(jié)果27-34
• 2.1 PCR擴(kuò)增目的基因結(jié)果27
• 2.2 PHA基因部分測(cè)序圖27-28
• 2.3 PAH基因的突變位點(diǎn)結(jié)果28-30
• 2.4 苯丙酮尿癥基因型與表型關(guān)系30-34
• 3 討論34-35
• 4 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-38
• 綜述38-46
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 致謝46-47
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果47-48
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷48

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 張眉，顧學(xué)范，張美華，張雅芬，潘星時(shí)，黃曉東，沈永年，葉軍，，陳瑞冠;中國(guó)南方人苯丙氨酸羥化酶基因外顯子7點(diǎn)突變及其頻率分析[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;1995年06期

2 張志;莊俊漢;黃宗青;許香廣;鄧英太;彭書新;江劍輝;何蘊(yùn)韶;;經(jīng)典型苯丙酮尿癥基因全長(zhǎng)外顯子的突變檢測(cè)和分析[J];中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志;2006年05期

3 毛新梅;何江;劉媛;馬曉燕;余伍忠;;寧夏地區(qū)回族苯丙酮尿癥患兒苯丙氨酸羥化酶基因突變分析[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2012年21期

  本文關(guān)鍵詞：山西地區(qū)苯丙氨酸羥化酶基因突變實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：313084