目的本研究采集正常產(chǎn)婦抗凝臍帶血樣本進行人巨細胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）分離和鑒定,分析探討合肥地區(qū)HCMV先天性感染的分子流行病學(xué)特征和病毒糖蛋白B基因型別。為進一步研究其致病性、免疫性以及研制HCMV亞單位疫苗提供依據(jù)。方法從臨床采集正常順產(chǎn)婦（年齡在19～38歲）的臍帶血樣本160例,按實驗設(shè)計分別作如下處理:（1）HCMV先天性感染的實驗室檢測:HCMV病毒分離,將樣本接種至人胚成纖維細胞（HF）上,觀察CPE（Cytopathic effect,CPE）,對分離得到的病毒株應(yīng)用間接免疫熒光法（indirect immunofluorescence assay ,IFA）鑒定后,體外培養(yǎng)病毒并提取DNA采用PCR檢測HCMV IE和UL83基因。同時應(yīng)用pp65抗原血癥的方法直接檢測臍帶血白細胞樣本中HCMV pp65抗原。記錄分析結(jié)果,確定合肥地區(qū)新生兒HCMV先天性感染率。（2）HCMV先天性感染臨床分離株的基因型分析:通過限制性片段長度多態(tài)性分析（RFLP）對Rsa I和Hinf I酶切位點的突變情況進行分析;對PCR產(chǎn)物進行純化后測序... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

HCMV的糖蛋白B

從安徽省合肥市婦幼保健院共采集 160 例臍帶血樣本，將樣本接種至 HF 細胞進行病毒分離。經(jīng)盲傳三代觀察到具有典型 HCMV CPE 的共 40 份，病毒分離率為 25.0%。倒置顯微鏡下見 CPE 為：開始為灶性病變，病變細胞明顯腫脹變圓，核變大，形成巨大細胞, 細胞折光性增強（詳見圖 2)。取出現(xiàn) CPE 的細胞涂片，固定以后做 IFA 檢測 HCMV pp65 抗原，HCMV 陽性標(biāo)本在 HF 細胞核內(nèi)可檢測到蘋果綠色陽性信號，陰性標(biāo)本則無蘋果綠色信號，僅見紅色信號（詳見圖 3)；PCR 檢測上述細胞培養(yǎng)物的 HCMV IE、UL83 基因，結(jié)果顯示：HCMV IE PCR陽性標(biāo)本均在 242bp 處檢測到特異性條帶（詳見圖 4A)；HCMV UL83 PCR 陽性標(biāo)本均在 766 bp 處檢測到特異性條帶（詳見圖 4B),再次證實上述細胞培養(yǎng)物感染了HCMV。

圖 3 病毒分離培養(yǎng)細胞玻片 IFA 結(jié)果（免疫熒光染色，×100）Fig3 Results of indirect immunofluorescence（Immunofluorescent staining，×100）A：HF 細胞培養(yǎng)物玻片 B：HCMV 陽性樣本細胞培養(yǎng)物玻片A： Normal HF cells B：The cultures in HCMV positive sampleA B

【參考文獻】：
期刊論文
[1]不同糖蛋白B基因型人巨細胞病毒感染與慢性牙周炎的關(guān)系[J]. 陳莉麗,孫偉蓮,嚴杰,余鐘聲.  中華口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2006(04)



本文編號：3120225