本文關鍵詞：浙江省手足口病流行病學和病原學特征分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：手足口病是由多種腸道病毒引起的一種常見兒童傳染病,在2008年納入我國法定報告的丙類傳染病。多數手足口病患兒臨床癥狀和體征輕微,以發(fā)熱及手、足口腔等部位的皮疹或皰疹為主要特征,少數患兒可并發(fā)無菌性腦膜腦炎、呼吸道感染、心肌炎等致死性并發(fā)癥。手足口病給兒童的健康造成較為嚴重的威脅。本研究的目的：1.調查2010-2013年臨床確診手足口病患者腸道病毒的感染情況；了解浙江省手足口病腸道病毒的流行病學特征；明確影響腸道病毒檢出率的影響因素,為手足口病的有效防控提供科學依據。2.通過手足口病CoxA6病毒VPl基因進行核苷酸序列測定,分析CoxA6病毒分離株的基因特征,進一步了解手足口病CoxA6病毒的分子生物學性狀及與其他地區(qū)流行的手足口病CoxA6病毒毒株的遺傳進化距離,探討我省手足口病CoxA6病毒變異的分子基礎。為CoxA6病毒的變異變遷研究打下基礎。方法：1.臨床標本檢測及病毒分離：采用一步法熒光定量RT-PCR探針法和普通PCR或RT-PCR法對臨床確診手足口病患者的標本進行腸道病毒、EV71、CoxA16、 CoxA6 CoxA10病毒檢測,將本實驗室部分CoxA6病毒檢測陽性標本接種到橫紋肌瘤細胞(RD)進行病毒的分離培養(yǎng)。2.分子生物學實驗：對分離毒病株采用EV71、CoxA16、CoxA6病毒核酸檢測試劑盒進行驗證,并使用自己設計的特異性引物分別對毒株進行擴增；對于病毒核酸檢測為陽性的標本,進行普通RT-PCR擴增,將PCR產物送杭州華大基因有限公司測序。3.生物信息學分析：參考CoxA6的代表株以及中國大陸其他地區(qū)測定的手足口病Cox A6 VP1基因序列,應用DNASTAR、DANMAN等生物學軟件對浙江地區(qū)手足口病病毒核苷酸序列進行系統(tǒng)的分析。結果：1.人口學特征從2010年1月1日至2013年12月31日共有4218例手足口病診斷病例,在這些手足口病臨床診斷病例中男性患者2686例,女性患者1532例,男/女性別比例為1.75(2010年男/女：1.66：1,2011年男/女：2.16：1,2012年男/女：1.58：1,2013年男/女：1.59：1)；絕大多數病例集中在5歲以下兒童(93%),其中以1-3歲組最多(52%),并且患兒中散居兒童占主要部分,其次為幼兒園兒童。2.時間分布從2010年至2013年臨床診斷手足口病數據可見手足口病雖然全年可發(fā),但4-6月發(fā)病例數明顯開始上升(2013年3-6月),2010年和2011年發(fā)病高峰出現在5月,2012年和2013年發(fā)病高峰出現在6月。2010和2011年浙江省手足口病發(fā)病率的時間分布相似,一年內有一個發(fā)病高峰。2012年和2013年9月份出現發(fā)病次高峰。3.病原分布腸道病毒總檢出率為71.08%。2010年檢出腸道病毒核酸陽性樣本873例,其中EV71陽性454例(52.0%),CoxA16陽性235例(26.9%),其他腸道病毒陽性184例(21.1%)。2011年檢出腸道病毒核酸陽性的樣本有839例,其中EV71陽性378例(45.1%),CoxA16陽性252例(30.0%),其他腸道病毒陽性209例(24.9%)。2012年,檢出腸道病毒核酸陽性的樣本有595例,其中EV71陽性240例(40.3%),CoxA16陽性186例(31.3%),EV71、CoxA16同時陽性35例(5.9%),其他腸道病毒陽性134例(22.5%),顯示2010年至2012年優(yōu)勢病原為EV71,其次為CoxA16。2013年,檢出腸道病毒核酸陽性的樣本有711例,其中EV71陽性142例(20.0%),CoxA16陽性20例(2.8%),其他腸道病毒陽性549例(77.2%),結果顯示2013年手足口病優(yōu)勢病原體為其他腸道病原體,EV71、CoxA16檢出率明顯下降(P0.05),我們選取2013年的549例其他腸道病毒陽性樣本中的267例進行CoxA6和A10核酸檢測,結果顯示：其中CoxA6陽性137例(51.3%,137/267),CoxA10陽性16例(6.0%,16/267)4.不同類型標本腸道病毒核酸檢出情況2010年至2013年,共采集4246份樣本,其中咽拭子1421份、糞便2803份、皰疹液22份。咽拭子腸道病毒核酸檢出率為65.1%；皰疹液腸道病毒核酸均為陽性,陽性檢出率為100%；糞便標本腸道病毒核酸檢出率為76.2%,皰疹液病毒檢出率最高,其次為糞便,咽拭子病毒檢出率較低。5.我們共分離CoxA6病毒株各15株,并選擇4株進行基因序列測定和擴增,核苷酸序列進行同源性比對,同源性為：89.3-99.6%；分別將四株序列在NCBI上進行Blast同源性檢索,最終我們選取了34株序列(全部來自GenBank中)進行建樹進化分析,分析發(fā)現其中一株CA6-1-43與其他三株在樹形上的位置相距較遠。結論：1.2010-2012年,浙江省手足口臨床診斷病例的優(yōu)勢病原體為EV71,其次為CoxA16;2013年開始為其他腸道病毒為主(即非EV71、Cox16),其中Cox6陽性率上升顯著,手足口病優(yōu)勢病原體發(fā)生變化。2.2010-2013年,手足口病均在5-6月期間出現發(fā)病高峰,2012年和2013年在9月份出現發(fā)病次高峰,說明手足口病發(fā)病和流行具有明顯的季節(jié)性,夏季和冬季手足口病病例數下降,說明病毒的流行傳播可能受到極端溫度的限制；手足口病發(fā)病人群以5歲的散居兒童為主,男女性別的發(fā)病率男性大于女性。3. Cox A6毒株基因同源性及系統(tǒng)進化樹分析表明,浙江地區(qū)流行Cox A6毒株彼此之間存在一定差異,其中Cox A6-1-43與其它三株的同源性比較結果低于90%,考慮可能為異地遷入。
【關鍵詞】：手足口病 流行病學 腸道病毒EV71 柯薩奇病毒A16型 柯薩奇病毒A6型 VP1
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R725.1
【目錄】：

• 致謝4-5
• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-14
• 縮略語14-16
• 第一部分 4246例臨床診斷手足口病病例樣本腸道病毒流行規(guī)律研究16-39
• 1 前言16-18
• 2 材料與方法18-28
• 3 結果28-36
• 4 討論36-39
• 第二部分 浙江省手足口病Cox A6 VP1基因特性分析39-48
• 1 前言39-40
• 2 材料與方法40-43
• 3 結果43-46
• 4 討論46-48
• 全文結論48-49
• 參考文獻49-52
• 綜述52-61
• 參考文獻57-61
• 作者簡歷及在學期間所取得的科研成果61

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前2條

1 趙雅男,姜慶五,姜仁杰,沈進進,陳胤忠,汪華;我國新分離ECHO30病毒VP1序列分析[J];病毒學報;2005年02期

2 陳秋霞;吳德;李暉;莫艷玲;鄒麗容;方苓;黃平;柯昌文;;應用Taq Man熒光定量RT-PCR快速檢測腸道病毒的研究[J];中國病原生物學雜志;2008年11期

  本文關鍵詞：浙江省手足口病流行病學和病原學特征分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：301475