發(fā)布時間：2017-04-12 07:12

  本文關(guān)鍵詞：RGC-32在急性腎損傷腎小管修復(fù)中的作用及可能機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：急性腎損傷(Acute Kidney Injury,AKI)為臨床常見危重癥,指多種原因引起的腎小球濾過率(Glomerular Filtration Rate,GFR)突然下降,臨床表現(xiàn)為氮質(zhì)血癥、水電解質(zhì)和酸堿平衡紊亂以及全身各系統(tǒng)癥狀。盡管人類對AKI的診斷治療水平尤其是腎臟替代技術(shù)有了長足進步,但AKI死亡率仍高達5%-10%,伴腎外器官衰竭患者可達50%-70%。此外,AKI是引發(fā)慢性腎功能不全常見原因之一。急慢性腎損傷已經(jīng)成為威脅人類健康的重要疾病。因此,積極尋找AKI發(fā)生及發(fā)展機制,對AKI進行早期診斷及治療一直是全球腎臟病研究者的熱門課題。腎臟急性缺血缺氧再灌注損傷(Acute Ischemia-reperfusion Kidney Injury,AIKI)是臨床最常見的AKI病因之一,其主要病理特征為急性腎小管壞死。研究表明,急性腎小管壞死發(fā)生后細(xì)胞周期循環(huán)在腎小管修復(fù)過程中起著極其重要的作用。業(yè)已證明,補體應(yīng)答基因-32(Response Gene to Complement 32,RGC-32)為細(xì)胞周期關(guān)鍵調(diào)控分子,促進細(xì)胞周期循環(huán)參與細(xì)胞增生。本研究第一部分在建立AIKI動物模型基礎(chǔ)上,通過實時熒光定量PCR、Western blotting以及免疫組織化學(xué)等方法觀察了RGC-32在AIKI大鼠腎組織中的動態(tài)表達變化及分布,并初步了解其在AIKI大鼠腎組織中的表達規(guī)律及其意義。研究發(fā)現(xiàn),大鼠腎缺血再灌注損傷24h后,RGC-32在腎組織表達水平出現(xiàn)明顯下調(diào)并持續(xù)至缺血再灌注后72h,術(shù)后1周其表達量逐漸上升至基本正常水平,提示RGC-32可能在急性腎損傷過程中發(fā)揮作用。隨后,為明確RGC-32在大鼠AIKI過程中的可能機制,本研究第二部分通過體外腎小管上皮細(xì)胞損傷模型,利用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)干預(yù)RGC-32表達,進一步觀察了RGC-32對腎小管上皮細(xì)胞損傷及修復(fù)的影響。第一部分:RGC-32在急性腎損傷大鼠腎組織中的表達及意義【目的】:通過建立大鼠AIKI模型,觀察RGC-32在AIKI大鼠腎組織中表達變化與分布規(guī)律,了解RGC-32在AIKI中的意義�！痉椒ā�:采用國際公認(rèn)的雙側(cè)腎蒂夾閉法建立AIKI模型,SD大鼠隨機分組:(1)模型組(AIKI組)(n=64):分離大鼠雙側(cè)腎蒂,持續(xù)阻斷45min。并分別于腎臟缺血再灌注后2h、6h、24h、48h、72h、1w、2w、4w分別處死大鼠8只。通過腹主動脈采血檢測血清肌酐(Serum Creatinine,Scr)水平。留取腎臟組織,通過實時熒光定量PCR、Western blotting以及免疫組織化學(xué)法明確腎組織損傷程度及RGC-32表達變化與分布規(guī)律。(2)假手術(shù)組(sham組)(n=64):僅分離雙側(cè)腎蒂而不進行腎蒂阻斷,其余操作同AIKI組�！窘Y(jié)果】:(1)通過免疫組織化學(xué)方法發(fā)現(xiàn):正常大鼠腎組織中RGC-32主要表達于近端小管、遠(yuǎn)端小管及集合管上皮細(xì)胞,腎小球僅有微弱表達;RGC-32在腎小管間質(zhì)及腎臟血管無表達。(2)AIKI組缺血再灌注后2h、6h、24h、48h、72h、1w、2w、4w RGC-32蛋白相對表達水平分別為0.0168±0.0029,0.0156±0.0021,0.0065±0.0013,0.0075±0.0013,0.0096±0.0014,0.0132±0.0016,0.0169±0.0014,0.0179±0.0022。其中缺血再灌注后24h、48h、72h兩組間RGC-32蛋白表達水平差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。RGC-32 m RNA表達水平變化與免疫組化結(jié)果相符。RGC-32蛋白表達與腎小管-間質(zhì)損傷評分存在顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.514,P0.01)�！窘Y(jié)論】:(1)首次發(fā)現(xiàn)RGC-32蛋白在正常SD大鼠腎組織中主要表達于腎小管上皮細(xì)胞胞漿,腎小球系膜細(xì)胞可有微弱表達,腎血管及腎小管間質(zhì)無表達。(2)大鼠腎臟缺血再灌注后,RGC-32于再灌注后24h-72h表達水平明顯降低。RGC-32可能在AKI發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。第二部分:RGC-32通過細(xì)胞周期參與腎小管上皮細(xì)胞損傷及修復(fù)過程【目的】:通過體外腎小管損傷模型,研究RGC-32對腎小管上皮細(xì)胞周期影響以及參與腎小管上皮細(xì)胞損傷修復(fù)過程的作用�！痉椒ā�:(1)體外培養(yǎng)NRK-52E細(xì)胞,TNF-α(10ng/ml)干預(yù)制備體外腎小管上皮細(xì)胞損傷模型并鑒定。(2)采用瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù)分別轉(zhuǎn)染RGC-32真核表達載體和RGC-32 si RNA,制備RGC-32高表達組及RGC-32敲低組,驗證轉(zhuǎn)染效果。(3)通過流式細(xì)胞儀,檢測RGC-32高表達組及RGC-32敲低組細(xì)胞周期變化。(4)Western blotting方法檢測各組細(xì)胞損傷標(biāo)志物及細(xì)胞外基質(zhì)表達。【結(jié)果】:(1)與對照組相比,RGC-32敲低組G2/M期比例明顯增多(P0.05);RGC-32高表達組S期比例明顯增加(與空白質(zhì)粒對照組比較P0.05)且不影響G2/M期。(2)與對照組相比,RGC-32敲低組細(xì)胞損傷標(biāo)志物NGAL、KIM-1及細(xì)胞外基質(zhì)α-SMA、Fibronectin表達明顯增高�！窘Y(jié)論】:RGC-32可能通過調(diào)控細(xì)胞周期G2/M期在腎小管上皮細(xì)胞損傷修復(fù)過程中發(fā)揮重要作用,其確切機制有待進一步闡明。
【關(guān)鍵詞】：急性缺血缺氧再灌注損傷 急性腎損傷 補體應(yīng)答基因-32 腎臟 大鼠 補體應(yīng)答基因-32 細(xì)胞周期 G2/M檢測點 腎小管纖維化
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R726.9
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 英文縮略詞表13-15
• 前言15-18
• 第一部分：RGC-32 在急性腎損傷大鼠腎組織中的表達及意義18-44
• 材料與方法18-31
• 結(jié)果31-41
• 一、AIKI大鼠腎損傷評價31-38
• 二、RGC-32 在大鼠腎組織表達及分布規(guī)律38-40
• 三、RGC-32 表達水平與腎小管-間質(zhì)損傷程度相關(guān)性分析40-41
• 討論41-43
• 小結(jié)43-44
• 第二部分：RGC-32 通過細(xì)胞周期參與腎小管上皮細(xì)胞損傷及修復(fù)過程44-57
• 材料與方法44-50
• 結(jié)果50-54
• 一、RGC-32 轉(zhuǎn)染NRK-52E細(xì)胞效率50-51
• 二、RGC-32 對NRK-52E細(xì)胞周期影響51-52
• 三、RGC-32 對細(xì)胞生物學(xué)行為的影響52-54
• 討論54-56
• 小結(jié)56-57
• 全文總結(jié)57
• 課題創(chuàng)新性57
• 課題局限性57-58
• 參考文獻58-62
• 綜述 1：兒童急性腎損傷診斷標(biāo)準(zhǔn)及生物標(biāo)志物研究進展62-72
• 參考文獻68-72
• 綜述 2：[已發(fā)表于《國際兒科學(xué)雜志》，2013,40（6）:545-549]利妥昔單抗對兒童難治性腎病綜合征的治療進展72-83
• 參考文獻78-83
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄83-84
• 致謝84

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