腎臟疾病是影響兒童健康的重要疾病,其發(fā)病機(jī)制多復(fù)雜,易于復(fù)發(fā),治療棘手。近年來的研究發(fā)現(xiàn),5-羥甲基胞嘧啶（5-hmC）介導(dǎo)的表觀遺傳學(xué)參與了多種生物學(xué)過程,但有關(guān)Tet2介導(dǎo)的DNA去甲基化在腎臟發(fā)育及腎臟疾病中的調(diào)控作用研究甚少。目的:既往研究表明5-hmC介導(dǎo)的表觀遺傳學(xué)調(diào)控在腎臟疾病中可能發(fā)揮重要作用,因此我們希望通過相關(guān)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究該DNA去甲基化修飾參與腎臟發(fā)育及腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展。方法:1.采用免疫熒光染色分別觀察小鼠腎臟細(xì)胞、體外培養(yǎng)足細(xì)胞中5-hmC及Tet2的表達(dá)水平以及進(jìn)一步qRT-PCR檢測(cè)不同發(fā)育階段野生型小鼠腎臟Tetl、Tet2和Tet3的表達(dá)水平。2.Tet2敲除后,采用dot blot檢測(cè)腎臟不同發(fā)育階段中5-hmC含量變化以及進(jìn)一步研究Tet2敲除后,通過非靶標(biāo)代謝組學(xué)分析及經(jīng)IPA生物反應(yīng)路徑分析軟件分析檢測(cè)Tet2敲除對(duì)腎臟形態(tài)和功能方面的影響。3.最后與臨床有機(jī)結(jié)合,通過免疫熒光染色觀察5-hmC在人體腎臟中的表達(dá)以及qRT-PCR檢測(cè)臨床腎病綜合征患者腎穿組織中Tetl、Tet2 mRNA的變化。結(jié)果:1.本實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了 5-hmC廣泛存在于... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．小鼠腎臟組織中５－ｈｍＣ染色（上圖１?ＯＯｘ，下圖２００ｘ）??

體外培養(yǎng)足細(xì)胞株，進(jìn)行足細(xì)胞細(xì)胞多重免疫熒光染色。采用足細(xì)胞特異性??抗體Ｓｙｎａｐｔｏｐｏｄｉｎ作為足細(xì)胞的鑒定。Ｓｙｎａｐｔｏｐｏｄｉｎ主要分布在足細(xì)胞胞衆(zhòng)，呈放??射狀分布。免疫熒光染色顯示體外培養(yǎng)的足細(xì)胞基因組ＤＮＡ中含有５ｈｍＣ（圖３）。??結(jié)果表明ＤＮＡ甲基化存在于足細(xì)胞中。??ＤＡＰＩ??５ｈｍＣ?Ｓｙｎａｐｔｏｐｏｄｉｎ?Ｍｅｒｇｅ??ｍｍｍｍ??■■■??圖３．體外培養(yǎng)足細(xì)胞中５－ｈｍＣ染色（上圖２００ｘ，下圖６００ｘ）??２８??

正文結(jié)果??化成熟，胞質(zhì)形狀不規(guī)則、向四周伸展，有大量較細(xì)較長的足突形成，細(xì)胞呈“樹??枝”狀（圖２Ｂ）。??■■??圖２足細(xì)胞的培養(yǎng)，Ａ３３°Ｃ允許條件下培養(yǎng)生長的細(xì)胞１００Ｘ；?Ｂ３７°Ｃ非允許??條件下培養(yǎng)生長的細(xì)胞１００Ｘ??１．３體外培養(yǎng)足細(xì)胞中５－ｈｍＣ染色??體外培養(yǎng)足細(xì)胞株，進(jìn)行足細(xì)胞細(xì)胞多重免疫熒光染色。采用足細(xì)胞特異性??抗體Ｓｙｎａｐｔｏｐｏｄｉｎ作為足細(xì)胞的鑒定。Ｓｙｎａｐｔｏｐｏｄｉｎ主要分布在足細(xì)胞胞衆(zhòng)，呈放??射狀分布。免疫熒光染色顯示體外培養(yǎng)的足細(xì)胞基因組ＤＮＡ中含有５ｈｍＣ（圖３）。??結(jié)果表明ＤＮＡ甲基化存在于足細(xì)胞中。??ＤＡＰＩ??５ｈｍＣ?Ｓｙｎａｐｔｏｐｏｄｉｎ?Ｍｅｒｇｅ??ｍｍｍｍ??■■■??圖３．體外培養(yǎng)足細(xì)胞中５－ｈｍＣ染色（上圖２００ｘ，下圖６００ｘ）??２８??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[4]IgA腎病患者甘露糖結(jié)合蛋白基因多態(tài)性的功能研究[J]. 龔如軍,劉志紅,劉棟,黎磊石.  南京大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2001(05)



本文編號(hào)：2993557