目的 本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法,觀察對照組腸壁、先天性巨結(jié)腸癥(Hirschsprung's disease,HD)患者有神經(jīng)節(jié)細(xì)胞段和無神經(jīng)節(jié)細(xì)胞段腸壁神經(jīng)組織中鈣視網(wǎng)膜蛋白(Calretinin,CR)的表達(dá)結(jié)果,并同時對比觀察神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neurone specific enolase,NSE)、S-100蛋白(S-100 protein,S-100)、組織蛋白酶D(cathpsin D,CAD)的三種腸道神經(jīng)標(biāo)志物在對照組及巨結(jié)腸腸壁表達(dá)情況,目的在于了解HD的病理生理改變以及尋找診斷先天性巨結(jié)腸的簡便有效的方法。 方法 1、收集蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院小兒外科2005—2008年手術(shù)切除HD標(biāo)本54例,包括HD擴(kuò)張段與痙攣段。以15例年齡與之相符的無HD患兒的手術(shù)切除結(jié)腸標(biāo)本作為對照組。 2、分別對HD痙攣段、擴(kuò)張段、對照組腸壁組織切片進(jìn)行CR、NSE、S-100、CAD的免疫組織化學(xué)染色和HE染色,計算機(jī)成像系統(tǒng)照相存盤,用圖像分析軟件(Image-Pro-Plus)分別判定各指標(biāo)在HD擴(kuò)張段與痙攣段神經(jīng)叢中陽性染色面積百分比。所得數(shù)據(jù)用SPSS12.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行處理分析。 結(jié)果 1、無論是HE或免疫組化染色HD的擴(kuò)張段神經(jīng)節(jié)細(xì)胞皆存在,肌層神經(jīng)纖維有不同程度的排列改變,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞大小不等;痙攣段均未見神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。 2、在正常結(jié)腸及HD擴(kuò)張段腸壁免疫組化染色可見鈣視網(wǎng)膜蛋白在肌間及黏膜下神經(jīng)叢中對神經(jīng)節(jié)細(xì)胞呈強(qiáng)陽性表達(dá),神經(jīng)纖維也呈陽性反應(yīng);而HD痙攣段腸壁的免疫組化染色則可見鈣視網(wǎng)膜蛋白在肌間神經(jīng)叢及黏膜下神經(jīng)叢大多表達(dá)陰性(90.7%),僅少量呈弱陽性表達(dá)(9.3%)。NSE在正常腸壁及HD擴(kuò)張段腸壁肌間、粘膜下神經(jīng)叢中神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及神經(jīng)纖維中均有表達(dá);在HD痙攣段腸壁可見NSE陽性表達(dá)的神經(jīng)纖維;S-100不表達(dá)于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,組織蛋白酶D表達(dá)于神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。 3、定量分析:CR、NSE、S-100、CAD分別在HD痙攣段之間神經(jīng)叢中陽性染色面積百分率與其在HD擴(kuò)張段神經(jīng)叢中陽性染色面積百分率存在差異,有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。 結(jié)論 1、鈣視網(wǎng)膜蛋白免疫組化染色可很好的顯示正常結(jié)腸及HD擴(kuò)張段腸壁的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及神經(jīng)纖維,而在HD痙攣段該指標(biāo)免疫組化染色結(jié)果呈陰性或弱陽性表達(dá)�？勺鳛樵\斷HD很好的神經(jīng)標(biāo)志物。 2、鈣視網(wǎng)膜蛋白在HD的痙攣段腸管內(nèi)的肌間神經(jīng)叢及黏膜下神經(jīng)叢大多表達(dá)陰性,僅少量呈弱陽性。對小塊組織或直腸黏膜活檢診斷HD有幫助,可作為診斷HD的一種敏感有效的方法。 3、鈣視網(wǎng)膜蛋白在HD痙攣段腸壁表達(dá)缺失或減少,可能參與HD的發(fā)病機(jī)制。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R726.5
【部分圖文】：

鈣視網(wǎng)膜蛋白在先天性巨結(jié)腸癥腸壁的表達(dá)及意義結(jié)果根據(jù)以上數(shù)據(jù)繪制CR、NSE、S一100、CAD免疫組化染色在本次54例巨結(jié)腸標(biāo)本擴(kuò)張段和痙攣段中平均陽性面積百分率比較的直條圖見圖31:圈HD擴(kuò)張段.HD痙攣段田翁形舊以到斗匕口 CRNSES一 100CAD圖31:各標(biāo)志物在HD擴(kuò)張段和痙孿段染色陽性面積比較

正常腸段肌間神經(jīng)叢(HEx400,典型的成熟神經(jīng)節(jié)細(xì)胞易辮認(rèn)

新生兒腸壁肌間神經(jīng)叢(HEx200),不典型神經(jīng)節(jié)細(xì)胞難以識別.
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2891038